Nuss手术后钢板移位的原因分析与预防及处理

目的探讨Nuss手术后发生钢板移位的原因,总结预防及处理钢板移位措施。方法选择2010年6月至2022年2月四川省人民医院收治的Nuss手术后发生钢板移位的17例患者为研究对象。采用回顾性方法分析其临床病例资料,总结发生钢板移位的原因及处理措施等。本研究经四川省人民医院医学伦理委员会批准[审批文号:伦审(研)2023年第446号]。所有患者或其监护人对诊治均知情同意。结果①本组患者男性为15例、女性2例,年龄为(12.8±4.7)岁(5.5~25.3岁),Haller指数为3.6±0.3(3.3~4.3)。②本组17例患者中:14例为钢板上下倾斜移位、1例为钢板上下倾斜合并横向移位、2例为钢板向后陷入移位(年龄分别为25.3岁、18.3岁);非对称型漏斗胸患儿为13例,对称型为4例;年龄>12岁者为12例。③17例患者本次入院均再次手术调整钢板,均使用固定翼及医用不锈钢丝加固钢板。其中,2例为Nuss手术后>3个月发现钢板上下倾斜移位者,重新选择切口取出钢板后,更换肋间隙安置固定钢板;其余15例为Nuss手术后0~3个月内发现钢板移位者,经原切口更换肋间隙(4例)重新安置钢板或经原切口原肋间隙(11例)复位钢板后重新固定。④本组17例患者中,6例钢板安置位置不合适,8例在Nuss手术后确认或疑似有剧烈活动或外伤史,13例胸廓不对称,2例胸骨凹陷严重,12例年龄>12岁。结论漏斗胸患者Nuss手术时年龄适宜、钢板型号及放置位置合适、术后避免过早剧烈活动或外伤,是减少Nuss手术后钢板移位的主要措施。一旦发现Nuss术后钢板移位,应视具体情况及时纠正处理。

基于mRNA测序筛选先天性膈疝大鼠模型肺PI3K/AKT/eNOS/VEGF的基因表达差异

目的研究除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型的肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶/血管内皮生长因子(PI3K/AKT/eNOS/VEGF)基因表达情况。方法制作先天性膈疝大鼠模型,将10只SPF级雌性SD大鼠在怀孕9.5 d时通过随机数字表法分组,分为对照组5只及膈疝组5只,于孕21.5 d时解剖出胎鼠肺组织,通过HE染色检测胎鼠肺组织发育情况;α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫荧光技术检测肺小动脉肌化程度;对照组与膈疝组各取3份胎鼠左肺组织样本行mRNA测序,进行差异表达基因分析,并对差异表达基因行KEGG功能富集分析;采用qRT-PCR技术检测两组胎鼠肺组织PI3K/AKT/eNOS/VEGF mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验及一氧化氮(NO)试剂盒分别检测eNOS和NO生成量。结果本研究中,对照组获取78只活胎,膈疝组获取64只活胎,膈疝组中37只胎鼠形成膈疝,膈疝率57.8%(37/64);HE染色后膈疝组相较于对照组存在明显肺发育不全及血管重构;免疫荧光显示膈疝组α-SMA表达增高(P<0.01),提示膈疝组胎鼠肺血管中膜厚度增厚且血管肌化水平增加。mRNA测序结果膈疝组与对照组相比,差异基因有4871个,其中下调基因有3741个,上调基因有1130个。这些差异基因主要富集于PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、Rap1信号通路、cAMP信号通路、催产素信号通路、Apelin信号通路、松弛素(Relaxin)信号通路、环磷酸鸟苷(cGMP-PKG)信号通路等。qRT-PCR显示,膈疝组与对照组相比PI3K/AKT/eNOS/VEGF均下调(P<0.05)。测定eNOS膈疝组浓度(8.720±0.729)ng/ml相比于对照组浓度(11.084±0.605)ng/ml降低;膈疝组NO浓度(2.811±0.213)μmol/gprot相比于对照组浓度(4.598±0.588)μmol/gprot降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型肺组织中,PI3K/AKT/eNOS/VEGF基因表达下调以及NO生成减少,肺血管重塑及新生血管减少可能与之相关。

产前他克莫司治疗对先天性膈疝大鼠病理模型肺血管重构的影响

目的 探讨产前对合并肺发育不良及肺动脉高压(PAH)的先天性膈疝(CDH)大鼠病理模型,采取他克莫司(FK506)治疗的抗血管重构作用及其作用机制。方法 选取17只健康、成年的无特定病原体(SPF)级Sprague Dawley(SD)大鼠为研究对象,均为8周龄,雌、雄鼠分别为12、5只。采用除草醚构建CDH大鼠病理模型。12只雌鼠受孕后,通过随机数字表法,根据不同处理方式处理分为FK506组(n=3)、CDH组(n=3)、CDH+FK506组(n=3)和对照组(n=3)。观察4组胎鼠肺组织发育情况,采取血管弹性纤维染色(EVG),观察肺血管厚度;α-SMA和CD31免疫荧光双重染色,检测胎鼠新生血管生成;Western blotting法检测胎鼠肺组织中BMPR2、p-SAMD1、p-SMAD5蛋白的表达水平。本动物实验均经电子科技大学附属医院·四川省人民医院动物实验伦理委员会伦理审查通过[伦审(研)2022年第191号]。结果 (1)4组胎鼠的双肺重量和双肺重量/胎鼠体重总体比较,差异均有统计学意义(H=81.25、106.98,P均<0.001),而4组胎鼠体重总体比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)EVG染色结果显示,4组胎鼠肺动脉中膜厚度百分比(MT%)和肺泡面积百分比(S%)总体比较,差异均有统计学意义(F=13.26、P=0.006,F=37.48、P<0.001)。其中,CDH组胎鼠MT%,较对照组增厚(P=0.001);CDH+FK506组大鼠肺动脉MT%,则较CDH组降低(P=0.002)。(3)4组CDH胎鼠α-SMA和CD31阳性细胞增殖指数分别总体比较,差异均有统计学意义(F=33.76、9.18,P<0.05)。进一步进行4组间两两多重比较的结果显示,CDH组分别和CDH+FK506组、对照组组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)FK506组、CDH+FK506组和对照组3组胎鼠BMPR2、p-SMAD1蛋白相对表达水平总体比较,差异均有统计学意义(F=11.45、10.94,P<0.05),而3组胎鼠p-SMAD5蛋白相对表达水平总体比较,差异无统计学意义(F=0.01、P>0.05)。其中,CDH组胎鼠BMPR2、p-SMAD1表达水平,较对照组降低(P=0.049、0.018),CDH+FK506组BMPR2、p-SMAD1表达水平,则较CDH组升高(P=0.010、0.023)。结论 在除草醚诱导的CDH大鼠病理模型中,产前对其采取FK506干预,可以减轻CDH大鼠模型的肺血管重构,对缓解CDH大鼠的肺发育不良具有正面影响。

ASK1-P38α/JNK对除草醚诱导的先天性膈疝肺血管的影响

目的探究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)通路中ASK1-P38α/JNK在除草醚诱导的先天性膈疝动物模型肺中的表达情况。方法选取健康成年SPF级SD大鼠,怀孕后通过数字随机法分为空白对照组、膈疝组和膈疝+西地那非干预组3组,通过HE染色检测胎肺发育情况、免疫组织化学定位各组胎肺中的凋亡信号调节激酶1(apoptosis signalregulating kinase 1,ASK1)、丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen activated protein kinase 14,P38α)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白和实时定量聚合酶链反应(quantificational real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组胎肺的死亡结构域相关蛋白(Death domain associated protein,DAXX)、ASK1、MAPK激酶3(MAP kinase kinase 3,MKK3)、P38α、MAPK激酶4(MAP kinase kinase 4,MKK4)及JNK的mRNA相对表达量。结果成功获得对照组4只孕鼠50只活胎、膈疝组6只孕鼠84只活胎,干预组4只孕鼠37只活胎。HE染色后与正常组相比,膈疝组的肺明显发育不良及血管重构,干预组明显改善。免疫组织化学显示,ASK1、P38α、JNK在各个组中均有表达,定位在肺叶边缘、气管、气管软骨、周围结缔组织、发育不良全肺叶及部分血管。qRT-PCR显示,ASK1与上游DAXX、下游P38α和JNK均呈正相关(r=0.778、P<0.001,r=0.816、P<0.001和r=0.284、P=0.044),ASK1的mRNA表达量升高导致了下游P38α和JNK升高。DAXX中,膈疝组和干预组均较对照组升高(1.28±0.41、1.31±0.30比1.00±0.20,P<0.05);ASK1中,膈疝组较对照组显著升高(1.51±0.70比1.00±0.23,P<0.05);MKK3中,干预组较对照组和膈疝组升高(1.21±0.32比1.00±0.18、0.97±0.35,P<0.05);MKK4中,干预组较对照组和膈疝组显著升高(1.52±0.40比1.00±0.25、1.19±0.38,P<0.05)。结论在除草醚诱导的先天性膈疝动物模型肺中,肺发育不良可能与MAPK通路中的ASK1-P38α/JNK上调有关。