人参皂苷等萜类化合物生物合成途径及HMGR的研究进展

人参皂苷是人参的主要有效成分之一,属典型的萜类化合物。对萜类生物合成途径及HMG-CoA还原酶进行了综述。大量研究资料表明HMG-CoA还原酶是萜类生物合成途径中甲羟戊酸途径的第一个限速关键酶,这对人参皂苷生物合成途径及其调控的深入研究具有一定的参考价值。

人参HMGR基因的克隆与序列分析

以人参根RNA为模板,根据其他植物HMGR基因序列保守区设计特异性简并引物,进行RT-PCR扩增。纯化回收HMGR基因RT-PCR产物与pMD18-T载体连接,再转化到JM109大肠杆菌中进行克隆,对阳性克隆菌重组质粒进行测序和序列分析。结果表明:人参HMGR核心片段的大小为458bp,与其他植物核苷酸序列有较高的同源性,依次为杜仲86.1%、南京椴83.8%、长春花83.2%、马铃薯82.5%、苹果82.1%、景烈白兰81.6%、肾叶橐吾81.6%、南苍术81.0%、红豆杉80.4%、水稻80.3%。

梅花鹿源BVDV基因E_0克隆与序列分析

对梅花鹿源BVDV基因E0进行了克隆和序列分析。结果表明,梅花鹿源BVDV基因E0的大小为681bp,与报道9株BVDV(VEDEVAC、Bega、C24V、ILLC、NADL、OSLOSS、R1935、SD-1、Y546)和7株猪瘟病毒(ALD、Bres-cia、c、GPE、JL、LN9912、SM)及3株羊边界病毒(BD31、C413、BDVX818)相比,核苷酸序列的同源性依次为98.6%～84.8%、76.1%～74.7%、77.0%～76.7%。梅花鹿源BVDV为Ιb基因亚型。

人参发根的诱导及其分子检测

[目的]探讨发根农杆菌诱导人参发根分子机理。[方法]用发根农杆菌A4菌株感染3年生人参根外植体,在无激素的MS培养基上诱导人参发根,并对其进行分子检测,考察rolB和rolC基因是否转化并整合到人参基因组中。[结果]成功获得了人参发根,该发根在固体和液体培养基上得到了很好的继代;从人参发根DNA中检测到rolB和rolC基因,与已发表发根农杆菌质粒相应的核苷酸序列的同源性达到99%。[结论]发根农杆菌质粒的rolB和rolC基因已转化并整合到人参基因组中,是人参发根产生的分子机理。

鹿源牛病毒性腹泻病毒E_0基因的RT-PCR扩增

用RT-PCR方法,成功扩增了鹿源牛病毒性腹泻病毒保护性抗原E0基因。该RT-PCR最佳反应条件分别为退火温度为55℃、25 mmol/μL MgC l2(4μL)、10 pmol/μL上下游引物(2μL)、5 U/μL Taq酶(1μL)。

鹿源BVDV基因E_0蛋白特性分析

以DNAStar5.01软件,对鹿源BVDV基因E0蛋白特性进行了分析。结果表明E0蛋白由227个残基构成,等电点为7.61。E0蛋白中有与地衣类植物核苷酸酶的保守区域相似序列,维持催化活性所必需的氨基酸残基区域在28-40和71-89处,催化活性的氨基酸为His30、His79,且该序列高度保守。E0蛋白氨基酸亲水性与抗原性指数成平行相关,BVDV各毒株间非常相似,亲水性与抗原性指数都较高的区域有8-16,23-29,59-67,70-81,96-109,114-122,127-134,137-143,165-172,186-198和213-221,适合研制亚单位基因工程疫苗。