番茄青枯病拮抗菌株B-6的诱变选育

青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起,是设施番茄生产上一类重要的土传性病害,给种植户造成巨大的经济损失。筛选高效突变生防菌株成为目前青枯病防控的重要手段之一。为了给生防菌剂的进一步开发应用提供依据,研究以筛选出具有抑菌活性的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)B-6为出发菌株,采用紫外线和亚硝酸钠复合诱变处理,计算致死率和正突变率确定最佳诱变条件,利用平板初筛和摇瓶发酵复筛获得高效突变菌株,测定高效突变菌株抑菌活性的遗传稳定性,并与出发菌株进行生长曲线的对比。结果表明,在紫外照射时长为3 min和亚硝酸钠浓度为0.045 mol/L复合诱变条件下,获得1株抑菌活性最强的高效突变菌株UH-9;该菌株对番茄青枯病菌抑菌圈平均直径达到28.6 mm,抑菌活性与出发菌株相比提高了86.5%,菌株在传代培养7次后抑菌活性无显著变化,具有良好的遗传稳定性。复合诱变处理比单一紫外诱变处理及亚硝酸钠诱变处理抑菌活性分别提高39.1%和25.4%,复合诱变比单一诱变抑菌活性更好。通过对比菌株UH-9和B-6的生长曲线可知,生长时期相同,且13 h后UH-9的OD600高于B-6。

番茄青枯病拮抗菌株的筛选、鉴定及发酵条件的优化

目前,对于番茄青枯病害的发生缺乏有效的预防措施,筛选和利用有益微生物是重要途径之一。试验以番茄青枯病病原菌为靶标菌,采用稀释涂布分离法、平板对峙法从健康番茄植株根际土壤中分离筛选对青枯病菌有较好拮抗作用的菌株,结合形态学特征、生理生化特征、分子生物学方法等对其进行菌种鉴定,且采用单因素试验及正交试验方法,对拮抗菌株B-6的发酵培养液配方及发酵条件进行优化。结果表明,从番茄青枯病重病田块的健康植株根际土壤中分离筛选到1株抑菌效果较好的细菌菌株B-6,抑菌圈直径为13.8 mm;对拮抗菌株B-6进行鉴定,经16S rDNA测序并进行同源性比较得出,拮抗菌株B-6与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa strain Pa84)的16S rDNA序列相似性达到100%;优化后的最佳培养基组合为麦芽糖3%(30 g)、蛋白胨1.0%(10 g)、氯化钠1.0%(10 g)、蒸馏水1 000 mL,最佳发酵条件为摇床转速180 r/min、发酵时间24 h、装液量100 mL(规格为250 mL锥形瓶)、接种量1.0%(1 mL),pH值8,经发酵优化后的抑菌圈直径为16.5 mm,比原抑菌圈直径增大19.6%。研究分离筛选到的拮抗菌株B-6为1株具有开发潜力的生防菌株。