慢病毒载体转染犬睾丸生殖细胞

目的观察慢病毒载体(Lentiviral vector,LV)对犬生殖细胞的转染,为基于LV的精子介导法制备转基因动物提供依据。方法采用睾丸打点注射法,向比格犬两侧睾丸分别注入滴度为5×108、1×108、2×107TU/mL的慢病毒液组成3个剂量组,每点注射量为每只犬0.2 mL。于注射后第2周开始采集精液,通过精液DNA的PCR检测和精子荧光镜检评估绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的整合及表达。结果 1)在高剂量组,整合并表达GFP基因的精子于第4周首现并持续至第17周;在中、低剂量组于第5周首现,分别持续到第14周、12周。2)GFP表达的高峰期在注射后第7周～10周。3)GFP表达于整个精子,以顶体后区和精子尾颈部表达最强。4)注射后第2周～6周,中剂量组犬采精困难,高低剂量组犬精子畸形率有上升的趋势。5)在GFP表达的高峰期,绿色荧光精子的百分率在高、中、低剂量组分别为43.33%、35.53%和4.55%,具有明显的差异。结论基于LV的精子介导转基因法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)可成功获得转基因犬精子,转基因阳性率、表达的强度与持续时间与慢病毒滴度相关。

建设工程项目分包管理的现状分析

自从工程项目管理诞生以来,管理水平一步步的在提升。随着管理的不断深入发展,适应现代社会发展的专业分包应运而生。除少数专业化程度较高的分部、分项工程由专业分包队伍完成外,大部分具体的施工任务还是由总承包企业组织劳务队伍和自有机械设备、自购材料来完成。目前劳务企业专业化程度低、素质参差不齐、管理力量薄弱、管理水平不高,都牵制了总承包企业的大量管理精力。随着中国加入世界贸易组织,政策、法规的进一步完善,规范专业分包体系,将是我国建设工程项目管理发展的必然趋势。

微卫星DNA标记技术对试验用虎皮猫群体遗传结构的分析

用筛选优化出的24个具有丰富多态性的微卫星位点对华北制药厂的34只虎皮猫基因组DNA进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和STR扫描,运用popgene3.2软件对试验用虎皮猫群体进行群体遗传结构分析。结果显示,虎皮猫群体平均观测等位基因数为4.083 3,平均有效等位基因数为2.632 3,平均有效杂合度为0.610 8,平均香隆指数为1.078 6。结果表明,微卫星DNA标记技术适于猫群体遗传结构分析;该试验用虎皮猫群体符合封闭群的遗传特性。

2006—2009年北京市丰台区犬只狂犬病病毒抗体效价调查分析

为了摸清当前社会犬只的狂犬病免疫状况,我们从2006年起连续4年对北京市丰台区城区和4个乡镇社会犬只的狂犬病病毒抗体效价进行了抽样调查。所采集的犬只血清样品共4 776份,采用免疫荧光中和试验法检测其血清狂犬病病毒抗体效价并做统计分析。结果显示,有68.1%的免疫接种犬的抗体滴度为阳性,未免疫犬有16.4%为阳性(P<0.01);在城区和乡镇间,免疫接种覆盖率分别为81.7%和27.6%(P<0.01);在大型犬和小型犬间,免疫接种率有较大差异,分别为69.5%和39.3%(P<0.01)。虽然北京市狂犬病的发生率和病死率多年来都控制在0.02/100 000以下,但从犬只免疫接种率来看,4年中任何1年的接种率都没有超过WHO规定的70%的标准,分别为55.0%、53.8%、67.4%和54.4%,提示免疫接种率较低,存在狂犬病发作的风险。调查结果还显示城区免疫阳性犬数量是乡镇的2.5倍;在疫苗的接种率和狂犬病痛毒抗体效价方面,城区也好于乡镇,说明加强农村地区犬只免疫接种率是今后狂犬病预防的重要工作内容。调查还发现,免疫过的小型犬数量是大型犬的1.68倍,究其原因,一方面是因为城区绝大多数犬都是小型犬,普遍接受免疫接种;而在乡镇,大多数犬是中大型犬,而且漏免率较高。调查结果提示:北京市应加强对农村地区犬只的免疫接种,尤其要提高对中大型犬的免疫接种率。