磁性固相萃取前处理-超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中阿维菌素类药物残留

目的建立磁性固相萃取(magnetic solid phase extraction,MSPE)前处理-超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中阿维菌素类药物残留的方法。方法牛奶样品使用乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白,8 mL乙腈提取,10 mg磁性HLB净化材料净化,5%乙腈-水、乙腈进行淋洗和洗脱,使用超高效液相色谱-串联质谱法检测牛奶中阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素。结果4种药物在0.2~200.0μg/L质量浓度范围内线性关系良好(r^(2)>0.995)。阿维菌素、伊维菌素和多拉菌素的检出限为0.2μg/kg,定量限为0.5μg/kg;乙酰氨基阿维菌素的检出限为0.5μg/kg,定量限为2.5μg/kg,回收率为74.31%~96.67%,相对标准偏差为0.02%~12.24%。结论本研究建立的MSPE前处理技术,极大地提高了样品前处理效率,缩短了样品检测的时间,降低了检测成本,减少了有机溶剂的使用,可应用于定量检测牛奶样品中阿维菌素类药物残留,为MSPE前处理方法的广泛应用提供参考。

拟态弧菌OmpK基因的克隆及原核表达

克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析。根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交至GenBank(GenBank登录号为FJ462707)。拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%。该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku。利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku。

单链抗体的制备及其应用

单链抗体由于分子质量小、穿透力强、半衰期短、特异性好和免疫原性低等特点,越来越引起学者的重视。本文就单链抗体的制备、表达及应用等方面作一综述。

抗氯霉素单克隆抗体的制备、纯化及其特异性鉴定

目的:获得能稳定分泌高亲和力抗体的抗氯霉素杂交瘤细胞。方法:重氮化法偶联制备氯霉素(CAP)的免疫抗原和检测抗原(CAP-BSA和CAP-OVA)。应用常规技术融合,三次有限稀释克隆和间接竞争ELISA法筛选杂交瘤细胞株,并鉴定抗体特异性。结果:得到一株能够稳定分泌高亲和力,特异性强抗体的杂交瘤细胞株4B12,辛酸-硫酸铵法纯化体内诱生法制备的腹水;纯化后的抗体效价>1:256000,杂交瘤细胞染色体平均数为50±2,分泌的抗体属于IgG1亚类,相对分子质量为157.92ku,亲和常数为8.26×108M-1;与甲砜霉素、庆大霉素、泰乐菌素、青霉素、链霉素和卡那霉素无交叉反应。结论:该细胞株可满足建立免疫学检测方法的需要和开发应用的要求。

猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗激发抗肿瘤细胞免疫

探讨以猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗对小鼠细胞免疫抗肿瘤的影响。以猪软骨多糖作为免疫佐剂,采用共同培养的方法制备小鼠肝癌H22细胞全细胞肝癌疫苗,免疫小鼠后,分别以脾淋巴细胞、巨噬细胞为对象检测肝癌疫苗对小鼠机体细胞免疫的影响。结果表明,以猪软骨多糖为免疫佐剂的全细胞肝癌疫苗能明显刺激脾淋巴细胞活化、增强巨噬细胞的吞噬能力。以猪软骨多糖为免疫佐剂的肝癌疫苗能增强机体的细胞免疫,为软骨多糖用于肿瘤的免疫治疗和免疫预防提供了试验依据,为进一步的临床免疫治疗肿瘤奠定了基础。

马立克氏病研究进展

一、马立克氏病的流行病学。1．易感宿主。鸡是最主要的自然宿主，除鹌鹑以外的其他动物自然感染没有实际意义。但近几年有特超强毒株感染火鸡的报道。Gandry报道了九十年代初在法国南部火鸡因MD肿瘤所致的死亡率高达80％；不同种类、品系的鸡均能感染MD，但对发生MD的抵抗力差异很大。

不同来源多糖的制备和生物学功能比较

本文介绍了植物多糖、动物多糖和微生物多糖的制备及其生物学功能。

食叶草营养成分分析及对SD大鼠尿酸的影响

以河北产食叶草为研究对象,系统分析食叶草中矿物质、多糖、粗纤维、蛋白质、氨基酸、多酚和黄酮的含量,及对高尿酸SD大鼠尿酸水平干预的效果。结果显示,食叶草干物质中蛋白质(32.5%)、多糖(11.00 mg/g)、多酚(5.11 mg/g)、黄酮(18.30 mg/g)、钾、钙、镁等营养物质含量丰富,氨基酸含量丰富且模式优良。食叶草高蛋白属性并未加重高尿酸模型大鼠尿酸水平。

中兽药口服液中非法添加化学药物高分辨质谱筛查

建立了适用于中兽药口服液中167种非法添加化学药物的超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱高通量筛查方法。样品采用0.5%甲酸乙腈-水进行振荡超声提取,电喷雾电离源(ESI)、正负离子同时扫描方式进行数据采集。通过与自建的167种化合物的基本信息及色谱-质谱信息数据库进行比对,对色谱-质谱条件、提取溶剂的种类和净化条件进行优化。将经前处理后的口服液样品上机测试后,采用Trace Finder筛查软件对数据结果进行分析。结果显示,50 ng/mL非法添加药物(头孢类和内酰胺类药物为100~200 ng/mL)上机时可定性检出。不同药物配方因基质影响,其非法添加药物的检出率略有差异。该方法可基本实现中兽药口服液中非法添加化学药物的高通量快速筛查,具备操作简便、快速高效的特点,为其他兽药剂型中非法添加药物的筛查奠定了基础。

四环素及β-内酰胺耐药性基因芯片的制作及优化

目的优化四环素及-内酰胺耐药性基因芯片制作和杂交条件。方法设置多组实验,逐一改变影响寡核苷酸在玻片表面固定及芯片杂交效率的实验条件,从中优化出芯片实验的最佳条件。结果得出的最佳条件是:探针以30pmol/μL的终浓度溶于50%二甲基亚砜中,在温度为20℃、湿度70%的条件下点制在基片上;荧光探针纯化后使用2×杂交液在42℃湿盒中杂交5h。结论优化出了耐药基因芯片制作和杂交的最佳条件,总结出芯片制作优化的方法。

高分辨质谱筛查复合预混合饲料中 非法添加药物

本实验旨在建立复合预混合饲料中超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱质谱(HPLC-Q-Exactive Focus/MS)测定157种非法添加药物的高通量筛查方法。通过构建非法添加药物筛查数据库并与样品中未知物信息进行比对,从而快速确定未知药物种类和含量。数据库包括磺胺类、喹诺酮类、β-受体激动剂类、硝基咪唑类、苯并咪唑类、蛋白同化激素类、糖皮质激素类、喹噁啉类、四环素类、抗病毒类、氯霉素类和真菌毒素类等12类157种药物的液相色谱条件及相关筛查参数。饲料样品使用50%乙腈水溶液超声提取,净化后过膜上机,正负模式扫描,TraceFinder软件进行定性筛查。结果表明:该方法可适用于复合预混合饲料中多种兽药非法添加的快速筛查,当药物添加浓度为50 ng/g时药物检出率为98.7%,药物添加浓度为100 ng/g时药物检出率100%。该方法可基本满足预混合饲料中非法添加药物的高通量快速检测需求,为实现多种药物高通量筛查提供数据支撑。

微量元素铬在动物营养中的应用

铬(Cr^(3+))是人和动物体内必需的微量营养元素。铬可促进胰岛素的功能,平衡血清胆固醇,促进蛋白质代谢和生长发育,在核酸代谢中也有重要作用。此外,它在减少应激、提高免疫力、改善胴体品质和提高繁殖性能等方面均有很好的功效。

抗河豚毒素单链抗体基因的构建、表达及活性分析

目的:构建抗河豚毒素(TTX)单链抗体表达载体并进行活性分析。方法:提取抗TTX单克隆抗体3D4杂交瘤细胞总RNA,根据鼠源单克隆抗体设计轻、重链可变区基因VL和VH引物并进行RT-PCR扩增,借助Linker(G1y4Ser)3连接成单链抗体TTX-ScFv(VH-Linker-VL)基因,克隆至表达载体pET-22b(+)后转入E.coliBL21(DE3)诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA检测表达蛋白的反应活性。结果:测序结果表明TTX-ScFv基因全长744 bp,经NCBI blast分析氨基酸序列符合鼠抗体可变区特征,其中VH366 bp,VL333 bp,Linker 45 bp,SDS-PAGE与薄层扫描分析显示表达产物相对分子量为26.045ku,表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总量的42%;ELISA检测表明TTX-ScFv可与TTX特异结合。结论:成功构建了抗TTX单链抗体表达载体,表达产物具有一定的免疫学结合活性。

猪软骨多糖与H22鼠肝癌细胞共培养物对小鼠体液免疫保护作用的研究

本试验以猪软骨多糖与H22鼠肝癌细胞的共同培养物(PS&H22)为研究对象,探讨其对小鼠体液免疫的影响。结果表明:PS&H22组小鼠的生命延长率和存活率极显著高于模型组(P<0.01);免疫荧光检测结果显示PS&H22免疫小鼠血清可与H22细胞发生特异性结合,说明免疫小鼠体内存在抗H22细胞特异性抗体;ELISA检测表明PS&H22免疫小鼠抗体效价大于12800,进一步证明免疫小鼠血清中抗体含量高,且其抗肿瘤体液免疫得到增强。

鹿白色念珠菌感染的诊断

白色念珠菌(Candida albicans)作为条件性致病菌可正常存在于人畜口腔粘膜、胃肠道、肛门、阴道、皮肤等部位,一般不致病,但当机体营养不良、维生素缺乏,长期使用抗菌药物时,白色念珠菌感染机率增加, 严重者可导致其它脏器感染发病甚至死亡.动物源白色念珠菌的单独感染较少发生,一般都是混合感染,因其危害性不大,一般不易引起养殖业和兽医工作者的重视.