目的采用不同实时荧光PCR方法检测各类型DNA污染模拟样本,分析检测方法性能,为在新型冠状病毒(简称新冠病毒)核酸检测中鉴别DNA污染提供依据。方法取实验室保存的新冠病毒RNA核酸样本和新冠病毒阳性质控品(含病毒序列的质粒样本),按不...目的采用不同实时荧光PCR方法检测各类型DNA污染模拟样本,分析检测方法性能,为在新型冠状病毒(简称新冠病毒)核酸检测中鉴别DNA污染提供依据。方法取实验室保存的新冠病毒RNA核酸样本和新冠病毒阳性质控品(含病毒序列的质粒样本),按不同比例混合,并进行梯度稀释,制成模拟样本。分别使用实时荧光RT-PCR、灭活逆转录酶前加样并去除RT步骤的PCR(PCR Set 1)和灭活逆转录酶后加样并去除RT和灭活步骤的PCR(PCR Set 2)三种不同方法,使用同一型号设备对同一批模拟样本进行检测。记录并分析检测结果,确定最佳的DNA污染判断方法。结果新冠病毒RNA核酸样本中,相比实时荧光RT-PCR,PCR Set 1下所有样本的Ct值增高2-4个循环,PCR Set 2中除原始样本N基因阳性外,均为阴性。新冠病毒DNA污染样本三种方法检测Ct值无明显差异。含等量DNA污染的混合污染样本和含梯度DNA污染的混合污染样本三种方法检测显示Ct值存在差异。三种方法检测不同新冠病毒基因,变化规律无明显差异。结论PCR Set 1和PCR Set 2两种方法均可用于鉴别DNA污染,特别是PCR Set 2方法对各浓度的DNA污染均有较好的区分能力。展开更多
目的为提高男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)发现率,特别是早期感染发现率,探索基于互联网平台和干血斑(dried blood spot,DBS)样本总核酸(total nucleic acid,TNA)检测的...目的为提高男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)发现率,特别是早期感染发现率,探索基于互联网平台和干血斑(dried blood spot,DBS)样本总核酸(total nucleic acid,TNA)检测的新模式在MSM人群中的应用。方法采用滚雪球法招募600名感染状况未知且未经治疗的MSM。DBS的制备和HIV抗体快速检测(rapid test,RT)及TNA检测在北京市疾病预防控制中心进行。若采集到配对静脉血样本,实验室会对其进行抗体酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA);若ELISA筛查阳性,则继续进行HIV抗体免疫印迹(western blot,WB)检测。HIV TNA检测结果提交至互联网平台供被检测人进行查询。结果599份合格样本TNA阳性率为9.35%(56/599),其中RT阴性而TNA阳性百分比为21.4%(12/56)。在RT和TNA均阳性的44个样本中,收集了35份配对的全血样本,其ELISA阳性率为100%(35/35),WB阳性率为91.4%(32/35),WB可疑率为8.57%(3/35)。怀疑早期感染(RT阴性而TNA阳性)的12份样本中,1份配对全血样本ELISA筛查阴性。结论互联网平台加DBS HIV核酸检测可以及时发现高危人群中的感染者,为后续精准干预提供有力支持,对有效防控我国艾滋病疫情具有重要意义。展开更多
文摘目的采用不同实时荧光PCR方法检测各类型DNA污染模拟样本,分析检测方法性能,为在新型冠状病毒(简称新冠病毒)核酸检测中鉴别DNA污染提供依据。方法取实验室保存的新冠病毒RNA核酸样本和新冠病毒阳性质控品(含病毒序列的质粒样本),按不同比例混合,并进行梯度稀释,制成模拟样本。分别使用实时荧光RT-PCR、灭活逆转录酶前加样并去除RT步骤的PCR(PCR Set 1)和灭活逆转录酶后加样并去除RT和灭活步骤的PCR(PCR Set 2)三种不同方法,使用同一型号设备对同一批模拟样本进行检测。记录并分析检测结果,确定最佳的DNA污染判断方法。结果新冠病毒RNA核酸样本中,相比实时荧光RT-PCR,PCR Set 1下所有样本的Ct值增高2-4个循环,PCR Set 2中除原始样本N基因阳性外,均为阴性。新冠病毒DNA污染样本三种方法检测Ct值无明显差异。含等量DNA污染的混合污染样本和含梯度DNA污染的混合污染样本三种方法检测显示Ct值存在差异。三种方法检测不同新冠病毒基因,变化规律无明显差异。结论PCR Set 1和PCR Set 2两种方法均可用于鉴别DNA污染,特别是PCR Set 2方法对各浓度的DNA污染均有较好的区分能力。
文摘目的为提高男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群艾滋病病毒(human immunodeficiency virus,HIV)发现率,特别是早期感染发现率,探索基于互联网平台和干血斑(dried blood spot,DBS)样本总核酸(total nucleic acid,TNA)检测的新模式在MSM人群中的应用。方法采用滚雪球法招募600名感染状况未知且未经治疗的MSM。DBS的制备和HIV抗体快速检测(rapid test,RT)及TNA检测在北京市疾病预防控制中心进行。若采集到配对静脉血样本,实验室会对其进行抗体酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA);若ELISA筛查阳性,则继续进行HIV抗体免疫印迹(western blot,WB)检测。HIV TNA检测结果提交至互联网平台供被检测人进行查询。结果599份合格样本TNA阳性率为9.35%(56/599),其中RT阴性而TNA阳性百分比为21.4%(12/56)。在RT和TNA均阳性的44个样本中,收集了35份配对的全血样本,其ELISA阳性率为100%(35/35),WB阳性率为91.4%(32/35),WB可疑率为8.57%(3/35)。怀疑早期感染(RT阴性而TNA阳性)的12份样本中,1份配对全血样本ELISA筛查阴性。结论互联网平台加DBS HIV核酸检测可以及时发现高危人群中的感染者,为后续精准干预提供有力支持,对有效防控我国艾滋病疫情具有重要意义。