PolyI:C刺激猪PK15细胞后病毒感染应答基因未注释转录本鉴定及其特征分析

【目的】鉴定猪PK15细胞在类病毒聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的数量、剪接类型、新蛋白编码与分子结构,为进一步研究这些未注释转录本的功能奠定基础。【方法】将猪PK15细胞分为对照组和试验组,每组3个重复;试验组加入终浓度为20μg/mL的PolyI:C,对照组加入等体积(2μL)的PBS,两组在37℃、5%CO_(2)条件下分别刺激6 h后进行Nanopore测序,鉴定两组的总转录本与差异表达基因。对差异表达基因进行GO功能分析,进一步筛选病毒感染的应答基因。对总转录本与Ensemble注释的转录本序列进行比较,发现未注释转录本。将病毒感染应答基因的未注释转录本与其对应的Ensemble注释转录本序列进行比对,分析未注释转录本的剪接类型和编码蛋白。【结果】PolyI:C刺激后,两组共鉴定蛋白编码的转录本61505个,其中有Ensemble数据库注释的39497个,未注释的转录本22008个,未注释转录本数量占总数的35.78%。同时两组鉴定到71个差异蛋白编码基因,与对照组相比,试验组上调表达基因57个,下调表达基因14个。GO功能富集分析显示,这些差异表达基因富集到20个生物过程,其中前3个生物过程分别是防御病毒反应、Ⅰ型干扰素信号通路和病毒应答,均与病毒感染应答相关。24个病毒感染应答的基因有16个基因存在未注释转录本,其中CCL 5、IFI 6、BST 2和MX 1基因未注释转录本的数量多于其Ensemble注释的总转录本数量,且大部分未注释转录本产生新的蛋白序列。IFIT 3、OAS 2、RSAD 2、CCL 5、IFI 44、CD 40、IFI 6、BST和MX 19个基因的未注释转录本有差异表达。【结论】本研究系统地鉴定了猪PK15细胞受PolyI:C刺激后病毒感染应答基因的未注释转录本的分子特征,筛选的IFIT 3、OAS 2、RSAD 2、CCL 5、IFI 44、CD 40、IFI 6、BST和MX 19个基因的差异表达的未注释转录本可能具有重要生物学作用,为进一步解析宿主基因在抗病毒反应中的复杂转录调控机制提供了依据。

规模化猪场粪污处理利用现状及案例分析

规模化猪场在养殖过程中会产生大量的粪污,如果不加以妥善处理与利用,将对环境和公共健康造成严重威胁。粪污处理与资源化利用成为实现养猪业可持续发展的关键环节。本文探讨了规模化猪场粪污的危害,介绍了规模化猪场粪污集中收集系统及目前规模化猪场在猪舍粪污处理中使用的尿泡粪和机械清粪2种清粪工艺,并详细讨论了生物发酵、厌氧消化、好氧处理等多种方法对固体粪污和液体污水的处理技术,以满足不同规模化养猪场的清粪需求。同时,探讨了规模化猪场种养结合生态循环利用和工业化深度处理2种主要的粪污处理利用模式。展望了未来科技创新对粪污处理与利用的推动作用,呼吁各方共同努力,以实现养猪企业的可持续发展、保障环境和人类健康的计划。本文为规模化养猪场选择粪污处理技术和利用模式提供了有益的参考,有助于环境保护和养猪业可持续发展。

CRISPR/dCas9-KRAB系统沉默猪LncRNA-NEAT1基因

本研究利用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1基因表达在细胞中的亚定位,采用5′RACE获得LncRNA-NEAT1基因的转录起始位点;利用CRISPOR软件对-300~0 bp区域的LncRNA-NEAT1启动子序列设计sgRNA并构建到px330载体,通过转染细胞与T7E1酶切验证sgRNA效率;利用酶切和亚克隆方法将dCas9-KRAB-BSD片段替换px330载体的Cas9序列,形成重组px330-dCas9-KRAB载体;将验证有效的sgRNA构建到px330-dCas9-KRAB载体,形成px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体。添加不同质量浓度的Blasticidin S处理细胞,以最小致死质量浓度来确定筛选质量浓度。转染px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体并用Blasticidin S筛选细胞7 d后进行LncRNA-NEAT1基因的表达检测,同时对sgRNA在LncRNA-NEAT1基因启动子上的结合位点进行Sanger测序,以进一步验证上述结合位点是否发生切割。结果显示LncRNA-NEAT1主要表达于细胞核,而在细胞质中几乎不表达。5′RACE获得了LncRNA-NEAT15′端大约270 bp的序列。qPCR检测结果显示,与对照组相比,sgRNA1和sgRNA2能够显著抑制LncRNA-NEAT1的表达(P<0.05)。Sanger测序结果表明sgRNA1和sgRNA2所在的位点并没有发生碱基缺失和插入。研究结果为后续进一步研究LncRNA-NEAT1在先天性免疫反应中的功能奠定了基础。

芳香烃受体与动物繁殖关系的研究进展

芳香烃受体(Aryl Hydrocarbon Receptor,AHR)是一种细胞内受体,也是一种重要的配体依赖性转录因子。现有研究发现AHR的配体和其生物学功能具有多样性,并且对动物繁殖活动有重要的调控作用,但具体机制尚不清晰。本文对AHR的配体、AHR在动物机体的分布与表达调控、AHR对激素分泌及生殖系统的作用、AHR多态性和拷贝数与产仔数关系等方面进行归纳分析,为扩展动物繁殖理论提供新思路和参考。

江苏省楼房养猪模式调研与发展分析

楼房养猪是在破解经济发达地区土地资源紧缺、稳产保供任务重等问题的新形势下迅速发展起来的一种养猪模式。文章采用问卷访谈与实地走访相结合的方式,开展了江苏省内10个县区的楼房猪场调研,分别从养殖类型、猪群转移、饲料输送等饲养工艺,通风、温湿度等环境控制,以及臭气处理、生物安全管理、粪便管理等方面总结了省内楼房养猪的主要模式,从建筑结构与工艺、建材选择、养殖工艺、成本收益等方面分析了存在的共性问题,并从集智攻关、科学评估两个方面对楼房养猪未来的发展布局提出了相关建议。

苏紫猪运动量与生长性能关系的研究

苏紫猪是在江苏省自主培育品种苏钟猪与江苏地方猪种淮猪杂交后,再与引进的巴克夏外种猪杂交选育而成的优质黑猪培育新品系,具有繁殖力高、肉质好、抗逆性强特点,另外产肉率及瘦肉率适中、肉品质优且耐贮藏,以其优良的产肉性能和出色的肉质品质受到广泛关注。但与外种猪相比,地方优良培育品种猪生长性能不突出,严重制约了优质猪产业的发展。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对猪毒害作用及毒理机制研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)是一种常见的污染粮食、饲料和食品的霉菌毒素,严重影响人和牲畜的健康。猪对DON非常敏感,DON可造成猪拒食、生长抑制、呕吐以及器官损伤、细胞毒性、免疫毒性等毒害作用。本文主要综述了DON对猪的毒害作用、毒理机制以及解毒剂开发等方面的研究进展,尤其关注DON毒理作用的遗传调控研究,旨在为从遗传本质提高猪对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的抵抗力提供更全面的参考。

苜蓿草粉对苏山猪屠宰性能、胴体品质和肉质性状的影响

本试验旨在探讨饲粮添加苜蓿草粉对苏山猪屠宰性能、胴体品质、肌肉脂肪酸和氨基酸含量的影响,从而确定苜蓿草粉作为饲粮粗纤维改善苏山猪胴体品质的可行性。试验选择健康、体重为(60.0±2.0)kg的苏山猪60头,随机分为4组,每组3个重复,每个重复5头,分别在基础饲粮中添加0(对照组)、10%(试验Ⅰ组)、15%(试验Ⅱ组)、20%(试验Ⅲ组)苜蓿草粉,预试期7 d,正试期80 d。结果表明:1)随着饲粮中苜蓿草粉添加量的增加,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组屠宰率、板油重、背膘厚均高于对照组,瘦肉率低于对照组,其中板油重和背膘厚与对照组相比差异达到极显著水平(P<0.01)。2)饲粮中添加苜蓿草粉对苏山猪肌肉颜色和失水率有显著影响(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组背最长肌亮度值显著高于对照组(P<0.05),红度值和黄度值极显著低于对照组(P<0.01);试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组背最长肌失水率均低于对照组,其中试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比差异达到显著水平(P<0.05)。3)饲粮中添加苜蓿草粉影响苏山猪肌肉脂肪酸和氨基酸组成,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组总单不饱和脂肪酸、必需氨基酸和鲜味氨基酸含量均高于对照组,其中试验Ⅰ组必需氨基酸和鲜味氨基酸含量与对照组相比差异达到极显著水平(P<0.01)。综上所述,饲粮中添加10%苜蓿草粉可以显著改善苏山猪肌肉颜色,提高苏山猪肌肉嫩度、鲜味,进而改善猪肉品质。

绵羊GDF9基因PCR-SSCP分析

生长分化因子 9(GDF9)是由卵母细胞分泌的一种生长因子 ,它对早期卵泡的生长和分化起重要的调节作用。采用PCR SSCP技术分析了GDF9基因在小尾寒羊、湖羊、多赛特羊和萨福克羊 4个绵羊品种的多态性。结果表明 :GDF9基因在两对引物扩增片段中均存在PCR SSCP多态性。对于引物 1扩增片段 ,4个绵羊品种均检测到AA基因型 ,AB基因型只出现在湖羊、多赛特羊和萨福克羊中 ,仅在萨福克羊中检测到BB基因型 ;在 4个绵羊品种中 ,A等位基因频率明显高于B等位基因频率。对于引物 2扩增片段 ,4个绵羊品种均检测到AA基因型 ,AB基因型只出现在湖羊、多赛特羊和萨福克羊中 ,4个绵羊品种均没有检测到BB基因型 ;在 4个绵羊品种中 ,AA基因型频率最高 ,A等位基因频率明显高于B等位基因频率。引物 1的多态性片段测序分析表明 :位于GDF9基因cDNA第15 2处发生了单碱基的改变 (A→G) ,并导致了氨基酸的改变 (天冬酰胺→天冬氨酸 )。

添加苜蓿草粉对育肥中后期苏山猪胴体性状和肉品质的影响

本试验旨在探讨饲粮添加苜蓿草粉对育肥中后期苏山猪屠宰性能、胴体性状、肌肉脂肪酸和氨基酸含量的影响。选取健康、体重为(30.0±1.0)kg的苏山猪60头(公母各占1/2),随机分为4组,每组3个重复。对照组饲喂基础饲粮,育肥中期试验组在基础饲粮中分别添加5%(试验Ⅰ组)、10%(试验Ⅱ组)和15%(试验Ⅲ组)的苜蓿草粉;育肥后期试验组在基础饲粮中分别添加10%(试验Ⅰ组)、15%(试验Ⅱ组)和20%(试验Ⅲ组)的苜蓿草粉。预试期7 d,正试期128 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加苜蓿草粉可极显著提高苏山猪板油重和背膘厚(P<0.01),对平均日增重、屠宰率和瘦肉率影响不显著(P>0.05)。2)试验组背最长肌水分和粗蛋白质含量均低于对照组,肌肉亮度(L)值高于对照组,红度(a)和黄度(b)值低于对照组,其中试验Ⅲ组与对照组差异达到极显著水平(P<0.01)。3)试验组背最长肌总饱和脂肪酸和总单不饱和脂肪酸含量高于对照组,总多不饱和脂肪酸含量低于对照组,差异均达到极显著水平(P<0.01)。试验组背最长肌葵酸、棕榈酸和十七烷酸等饱和脂肪酸含量均显著高于对照组(P<0.05);但亚油酸、二十碳二烯酸、二十碳三烯酸等多不饱和脂肪酸含量均极显著低于对照组(P<0.01)。4)试验组背最长肌氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸总量均高于对照组,其中试验Ⅲ组鲜味氨基酸含量与对照组差异达到极显著水平(P<0.01)。综上所述,苏山猪育肥中期添加10%苜蓿草粉,育肥后期添加15%苜蓿草粉可以显著改善苏山猪屠宰性能、胴体性状和肉品质。

不同粗纤维水平日粮对育肥后期苏山猪生长性能和屠宰性能的影响

本试验旨在研究日粮中不同粗纤维水平对育肥后期苏山猪生长性能和胴体性能的影响。选用45头60kg左右苏山猪,随机分成A、B、C组,每组15头,分别采用8.35%,9.10%,11.39%粗纤维水平日粮进行饲喂。试验结束后,每组随机选取5头猪屠宰。结果表明:(1)日粮中粗纤维水平可影响苏山猪生长速度。B组平均日增重高于A组、C组,B组与A组间差异显著(P<0.05)。(2)日粮中粗纤维水平可影响苏山猪血液生化指标。B组尿素氮、总胆固醇、高密度脂蛋白显著高于C组(P<0.05);C组尿素氮显著高于A组(P<0.05)。(3)日粮中粗纤维水平可影响苏山猪屠宰性能。粗纤维水平升高,脂率呈下降趋势;B组、C组肉脂比均显著高于A组(P<0.05);B组小肠重量显著低于A组、C组(P<0.05);C组的大肠重量显著高于A组、B组(P<0.05)。心脏重量A组最高,B组最低,组间差异显著(P<0.05);A组肺重量显著高于B组(P<0.05)。本试验结果提示,适量提高日粮中粗纤维水平可提高苏山猪生长速度,降低育肥后期苏山猪的脂率,提高肉脂比;同时可影响育肥后期苏山猪小肠、大肠、心脏和肺的发育。

生长分化因子9基因的研究进展

转化生长因子β( TGF-β)超家族成员对卵巢卵泡的发育起着重要的作用 ,在这个超家族中发现 1个新成员生长分化因子 ( GDF-9) ,它对早期卵泡和卵母细胞的生长是必需的。本文主要阐述了生长分化因子 9基因结构和功能、基因克隆以及在小鼠、人类和绵羊卵巢中的作用机理 ,并讨论了该基因对繁殖性能的影响。

苜蓿草粉对苏山猪生长速度、血液生化指标及屠宰性能的影响

【目的】本试验旨在研究饲粮中苜蓿草粉含量对生长期和育肥期苏山猪生长速度、血液生化指标、屠宰性能以及内脏器官发育的影响。【方法】选取健康、体重为(30.0±1.0)kg的苏山猪54头,采用单因子试验设计随机分为3组,每组3个重复,生长期分别在基础饲粮中添加0%(对照组)、10%(试验Ⅰ组)、15%(试验Ⅱ组)苜蓿草粉,育肥期分别在基础饲粮中添加0%(对照组)、15%(试验Ⅰ组)、20%(试验Ⅱ组)苜蓿草粉。预试期7 d,正试期124 d。试验结束后,每组随机选取6头猪屠宰。【结果】(1)少量添加苜蓿草粉可提高生长期苏山猪平均日增重,苜蓿草粉含量过多将降低生长期苏山猪平均日增重;苜蓿草粉可提高育肥期苏山猪平均日增重,但饲粮中苜蓿草粉对生长期和肥育期苏山猪平均日增重的影响均未达到显著水平(P>0.05)。(2)生长期,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组各项血液生化指标与对照组间差异均未达到显著性水平(P>0.05);育肥期,试验Ⅰ组尿素氮浓度、总胆固醇浓度和高密度脂蛋白浓度均高于对照组和试验Ⅱ组,差异达到极显著水平(P<0.01)。(3)试验Ⅰ组和试验Ⅱ组板油重和胴体直长均高于对照组,且差异达到极显著水平(P<0.01);试验Ⅰ组和试验Ⅱ组背膘厚高于对照组,但差异未达到显著水平(P>0.05)。(4)试验Ⅱ组大肠重和小肠重均高于对照组和试验Ⅰ组,其中试验Ⅱ组大肠重极显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.01)。在其余内脏器官指标上,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组与对照组差异均未达到显著水平(P>0.05)。【结论】饲粮中添加苜蓿草粉可影响育肥期苏山猪的生长性能,苏山猪具有一定的耐粗饲性。

不同屠宰体重对苏山猪屠宰性能、胴体性状和肉品质的影响

试验旨在探讨不同屠宰体重对苏山猪屠宰性能、胴体性状和肉品质的影响,从而确定苏山猪最佳屠宰体重。选用60头30 kg左右的苏山猪,公母各半,随机分成A、B、C组,每组20头,平均体重分别达到90、100、110 kg时,每组选取3头公猪、3头母猪进行屠宰性能、胴体性状和肉品质测定。结果表明:随着苏山猪屠宰体重的增加,各组屠宰性能存在较大差异,A组瘦肉率为63.18%,显著高于B、C组(P<0.05);C组板油重、肩部最厚处背膘厚、倒数第3~4肋骨处背膘厚显著高于A组(P<0.05);3个处理组屠宰率、皮率、骨率以及脂肪率等指标无显著差异(P>0.05);3个处理组背最长肌水分、粗蛋白质、粗脂肪无显著差异(P>0.05),但A组的粗灰分显著高于B、C组(P<0.05);B组肌肉L值为43.50,显著高于C组(P<0.05),C组pH 1 h和pH 24 h分别为6.40和5.83,显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于A、B组。随屠宰体重增长肌肉内饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸呈上升趋势,多不饱和脂肪酸呈下降趋势,其中C组饱和脂肪酸显著高于A组(P<0.05);A组总氨基酸、必需氨基酸和鲜味氨基酸均高于B、C组,但差异均未达到显著水平(P>0.05)。因此,综合考虑,苏山猪的最佳屠宰体重为90 kg左右。

去乙酰化酶SIRT1在猪不同组织中的表达规律性分析

【目的】分析去乙酰化酶SIRT1在猪不同组织中的表达规律性,为研究猪SIRT1基因功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR和Western blotting方法检测猪脑、肝脏、胰脏、脂肪、卵巢、肾脏、心脏、脾脏等组织中SIRT1基因mRNA和蛋白的表达量。【结果】在猪脑、肝脏、胰脏、脂肪、卵巢、肾脏、心脏、脾脏等组织中均有SIRT1mRNA和蛋白表达,且以卵巢组织中的表达量最高,心脏中的表达量最低。【结论】去乙酰化酶SIRT1在猪不同组织中的表达具有一定规律性,可能与猪的脂肪代谢和繁殖活动密切相关,直接或间接调节猪的能量代谢和生殖活动。

猪SIRT1基因荧光定量PCR检测方法的建立

SIRT1基因对细胞的生存、衰老、凋亡等生理活动起着十分重要的调节作用。为了建立荧光定量PCR技术检测猪SIRT1基因表达量,根据GenBank中猪SIRT1 mRNA序列设计引物,建立基于SYBR Green I染料技术的荧光定量PCR检测方法。结果表明,所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感和特异性强等特点,为猪SIRT1基因定量分析提供了技术平台。

猪肌内脂肪沉积调控机制研究进展

肌内脂肪(Intramuscular Fat,IMF)是指肌肉样品中通过化学方法提取的脂肪,是嵌入在猪肌肉纤维之间的脂肪组织,主要来源于脂肪细胞和肌细胞。肌内脂肪是猪肉品质的重要指标,是影响猪肉品质的重要性状之一,与风味、多汁性、嫩度等密切相关,决定猪肉的品质和营养价值。肌内脂肪含量较高时,猪肉具有更好的嫩度、多汁性和适口性。

猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因表达量与雌激素分泌的相关性

SIRT1是一种二氢尿嘧啶脱氢酶依赖的具有去乙酰化酶活性的多功能转录调节因子。为分析体外白黎芦醇和尼克酰胺诱导的猪卵巢颗粒细胞中SIRT1 mRNA表达量的变化与颗粒细胞分泌雌激素的相关性,采用qRT-PCR方法进行SIRT1 mRNA分析,猪雌激素酶联免疫分析试剂盒检测培养液中雌激素浓度。结果表明,培养液中白黎芦醇浓度达到50μmol/L时,颗粒细胞中SIRT1 mRNA表达量极显著高于空白对照组(P<0.01);相反,尼克酰胺浓度达到50μmol/L时,处理组颗粒细胞中SIRT1 mRNA表达量极显著低于空白对照组(P<0.01);培养液中,颗粒细胞分泌雌激素的变化规律与SIRT1 mRNA表达规律一致,相关分析表明,两者存在较强的正相关,相关系数为0.966 8。

SIRT1基因对猪卵巢颗粒细胞中生殖激素受体基因表达量的影响

为了探讨SIRT1基因在猪卵巢颗粒细胞生殖激素分泌中的作用,采用白藜芦醇和尼克酰胺处理猪卵巢颗粒细胞,检测猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因和生殖激素受体表达水平,分析SIRT1基因与生殖激素受体表达量的相关性。结果表明,白藜芦醇和尼克酰胺可剂量依赖性地调节猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因表达,SIRT1基因表达量的升高可引起ER2、FSHR、LHR表达量上调,其相关系数分别为0.820 6、0.519 7和0.140 7。说明,SIRT1基因参与猪卵巢颗粒细胞生殖激素受体表达调控,可影响猪卵巢颗粒细胞生殖激素分泌。

母猪窝产活仔数与初生仔猪整齐度的相关性研究

本研究统计分析了苏钟猪纯系及其杂交系母猪窝产活仔数与初生仔猪整齐度间的相关性,结果表明,随着母猪窝产活仔数的增加,仔猪初生重的平均数逐渐降低,标准差逐渐升高,整齐度不断降低。纯系苏钟猪窝产活仔数与标准差存在正相关,差异达到显著水平(P<0.05);与平均数存在负相关,差异达到极显著水平(P<0.01);杂交系苏钟猪窝产活仔数与标准差存在正相关,差异达到极显著水平(P<0.01);与平均数存在负相关,差异也达到极显著水平(P<0.01)。同时,不同产仔区间母猪窝产活仔数对仔猪初生重的标准差和平均数也存在较显著的影响,母猪窝产活仔数与初生仔猪的整齐度间存在一个较优的经济区间。