蔺草品种间DNA指纹鉴定技术研究初报

以4个蔺草代表性品种(鄞蔺1号、农林4号、岗山和太草)为材料,采用SSR引物对基因组DNA进行PCR扩增。结果表明,67对SSR引物在4个品种中均有扩增条带。其中引物RM24在鄞蔺1号和其它3个品种之间具有明显差异。而引物RM267和RM330在农林4号和其它3个品种间表现多态性差异。因此,SSR引物RM24可初步作为区分我国蔺草品种与其它国家或地区品种的DNA指纹标记。

蔺草基因组DNA提取方法的比较研究

以16个蔺草品种实生苗和4个蔺草品种组培苗为材料,探讨了CTAB改良法与DNA试剂盒法对蔺草基因组DNA提取质量的影响。结果发现,对于同一品种而言,CTAB改良法提取获得的DNA A260nm和OD值远低于试剂盒提取法,前者的DNA浓度仅为0.65-4.90μg/ml,而后者则为5.10-32.80μg/ml,后者为前者的1.6-21.2倍。这表明试剂盒提取法更适合于蔺草基因组DNA的提取。试验还发现提取材料对基因组DNA的质量有显著影响,蔺草组培苗优于实生苗。

蔺草基因组DNA提取条件的优化研究

以来自宁波高桥种质资源圃中的15个蔺草样品为材料,进行了基因组DNA提取条件的优化研究,结果表明:加入Proteinase K后,DNA的浓度普遍在600μg/mL以上,A260/A280值在1.8-2.0之间,浓度随加入量的增加呈递增状态,在加入量为6μL时提取效果最好。Proteinase K水浴温度与时间的条件优化试验中发现,最佳的水浴温度为65℃,水浴时间以30 min,离心条件在转速10,000 r/min,时间8 min时获得的DNA质量较好。加入RNase A后,A260/A280值在1.8-2.0之间,随加入量的增加纯度也增大,加入量以3μL为宜;RNase A水浴时间在10 min时A260/A280值普遍最接近1.8,浓度也较高。应用所获得的优化提取条件对宁波市高桥镇种植的15个蔺草样品进行提取DNA测试,电泳结果表明所有品种都出现了特异性DNA条带。由此,在进行蔺草实生苗基因组DNA提取时,建议采用如下条件:Proteinase K加入量6μL,水浴温度为65℃,时间为30 min;第一步DNA沉淀的离心转速为10,000r/min,离心时间为8 min。RNase A加入量3μL;RNase A水浴时间10 min。