米曲霉沪酿3.042曲酸发酵工艺研究初报

对米曲霉沪酿3.042曲酸发酵工艺条件进行了研究,分析了碳源、氮源、pH、装液量对曲酸产酸量的影响,获得了最优摇瓶培养条件:10%蔗糖、1%蛋白胨、pH=2.5、装液量40mL(250mL三角瓶),发酵温度30℃、摇瓶转速200r·min-1条件下达最高产酸量3340mg·L-1。

热休克蛋白65及其两个功能表位在调节动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化是一种自身免疫性疾病。人自身热休克蛋白60是主要的自身免疫原之一，能引起人自身免疫性反应进而促进动脉粥样硬化的发生，热休克蛋白65与人热休克蛋白60有较高的同源性，同源性为46％左右，具有相似的抗原表位，通过诱导粘膜免疫耐受产生抗炎效果将会对动脉粥样硬化产生积极的影响。热休克蛋白65鼻黏膜免疫动脉粥样硬化模型新西兰大白兔，能显著减轻主动脉粥样斑块，与PBS组存在极显著差异（P〈0．01）。热休克蛋白65上31-46片段，180-188片段与霍乱毒素B亚单位的融合蛋白鼻黏膜免疫动脉粥样硬化模型新西兰大白兔．不能显著减轻主动脉粥样斑块，与PBS组不存在显著性差异（P〉0．05）。结果表明HSP65鼻黏膜免疫新西兰大白兔能有效诱导兔黏膜免疫耐受，预防动脉粥样硬化；热休克蛋白65上31-46片段和180～188片段，虽然有文献报道通过诱导免疫耐受在小鼠自身免疫性疾病佐剂性关节炎中有很好的预防作用，但在动脉粥样硬化中却不能有效诱导黏膜免疫耐受而显著改善病情。

基于热休克蛋白65的抗动脉粥样硬化蛋白疫苗的免疫效果

选取了HSP65上对自身免疫性炎症疾病有防治作用的两段功能表位P1(179-190)、P2(31-46),分别以HSP65和CTB为载体蛋白构建高效表达载体pET28a-HSP65-P1P2P1与pET28a-CTB-P1P2P1,以硫酸铵分级沉淀和包涵体洗涤、经DEAE阴离子交换柱层析分离纯化得到HSP65-P1P2P1与CTB-P1P2P1融合蛋白,并用戊二醛一步偶联法将两者偶联形成HpCp复合物。以小剂量滴鼻粘膜免疫高胆固醇膳食诱发产生动脉粥样硬化的新西兰大白兔,结果显示两组融合蛋白均表现出一定的减斑功效,与PBS对照组相比较,主动脉病斑面积分别减少了34.9%和27.9%,为进一步开发能用于临床的抗AS疫苗提供了良好的设计思路,可经进一步优化设计提高其免疫原性,研发为抗动脉粥样硬化疫苗。