IGFBP-5及p53与汉防己甲素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的关系研究

目的研究汉防己甲素(tetrandrine,Tet)抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及可能的分子机制。方法采用CCK-8、流式及Western blot分析不同浓度Tet对MCF-7细胞增殖与凋亡的影响;通过real-time PCR、Western blot检测Tet对MCF-7细胞IGFBP-5表达的影响;应用CCK-8分析Tet及IGFBP-5过表达或沉默表达对Tet抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响;利用Western blot检测Tet对MCF-7细胞p53表达的影响,以及过表达IGFBP-5和(或)Tet对乳腺癌MCF-7细胞p53表达的影响。结果 Tet呈浓度和时间依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导G1期阻滞,并降低PCNA表达水平;同时,Tet明显增加MCF-7细胞凋亡比例,升高Bad的蛋白水平,降低Bcl-2的蛋白水平。Tet上调MCF-7细胞IGFBP-5的表达水平,过表达IGFBP-5增加Tet对MCF-7细胞的增殖抑制作用,而沉默IGFBP-5则减弱Tet的这种作用。Tet升高MCF-7细胞的p53蛋白水平,降低MDM2的蛋白水平;过表达IGFBP-5增强Tet对p53表达的促进和对MDM2表达的抑制作用。结论 Tet对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,机制可能与其上调IGFBP-5而增强p53信号的功能有关。

环氧化酶-2与骨形态发生蛋白9诱导血管平滑肌钙化的关系研究

目的研究高磷对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)的影响,BMP9对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的影响与环氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的关系。方法利用免疫荧光、茜素红染色和Western blot检测高磷水平对血管平滑肌钙化的诱导作用;利用茜素红染色、硝酸银染色、real-time PCR和Western blot检测BMP9诱导血管平滑肌钙化的作用;采用免疫荧光、茜素红染色、real-time PCR、Western blot检测COX-2与BMP9诱导血管平滑肌钙化的关系。结果与对照组相比,高磷明显促进骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalin,OCN)表达,并诱导VSMCs出现明显钙盐沉积;高磷呈浓度依赖性方式诱导BMP9表达,增加Runx2、Dlx-5、ALP等骨向调节因子的mRNA表达水平,但降低SM22α的mRNA。BMP9过表达明显增加VSMCs中OPN和OCN的表达水平,同时降低α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平;BMP9过表达明显诱导钙盐沉积,但ALK2突变后则减弱BMP9的这种作用;BMP9过表达能诱导血管平滑肌钙化,14 d时作用最明显。高磷和BMP9过表达都能在VMSCs中明显诱导COX-2表达,过表达COX-2增强BMP9在VSMCs中对OPN和OCN表达的促进作用,但加强BMP9对α-SMA表达的抑制作用;COX-2抑制剂减弱BMP9对OPN和OCN表达的促进作用,以及BMP9对α-SMA表达的抑制作用;COX-2抑制剂同时还降低BMP9在VSMCs中促进钙盐沉积的作用。结论高磷诱导VSMCs钙化可能与促进BMP9和COX-2表达有关,并且COX-2参与介导BMP9诱导的VMSCs钙化。

骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞骨向分化与Wnt11的关系

目的 探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导干细胞骨向分化与Wnt11的关系及可能的分子机制。方法通过qPCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测成骨分化相关标志物,以及BMP/Smad和p38 MAPK信号的变化;利用荧光素酶报告质粒,检测BMP/Smad信号的活性改变。结果 BMP9增加C3H10T1/2细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积、骨桥素(OPN)和Wnt11表达。Wnt11在C3H10T1/2、MEFs、MC3T3-E1和C2C12细胞中均有表达。在C3H10T1/2细胞中,Wnt11增强BMP9促进ALP活性、钙盐沉积、Runx-2和OPN表达的作用,以及BMP9对BMP/Smad报告质粒转录活性和Smad1/5/8磷酸化的促进作用;Wnt11还增强BMP9诱导p38 MAPK磷酸化的作用;抑制p38 MAPK则减弱BMP9诱导ALP活性、钙盐沉积及OPN表达的作用,但该效应能被Wnt11部分逆转。结论 BMP9在MSCs中能上调Wnt11表达。Wnt11能促进BMP9的骨向分化诱导作用,该作用可能与其增加BMP/Smad和p38 MAPK信号的活性有关。

Wnt10b与骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的关系

目的研究Wnt10b与骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导间充质干细胞(MSCs)骨向分化的关系,以及相关的分子机制。方法利用PCR、Westernblot、组织化学染色等方法,检测BMP9对Wnt10b表达的影响,以及Wnt10b对BMP9诱导的成骨分化的影响。同时,通过定量PCR、Westernblot、油红O染色、流式细胞术等,分析Wnt10b影响BMP9成骨分化诱导作用的可能机制。结果Wnt10b在C3H10T1/2、C2C12、MEFs和MC3T3-E1细胞中均有表达,BMP9在C3H10T1/2细胞中上调Wnt10b的表达水平。Wnt10b增强BMP9在C3H10T1/2细胞中增加OCN蛋白水平和促进钙盐沉积的能力,沉默Wnt10b减弱BMP9的作用。Wnt10b并不改变BMP9对细胞周期的影响,但能增强BMP9诱导的Smad1/5/8磷酸化,沉默Wnt10b减弱BMP9对Smad1/5/8磷酸化的促进作用。此外,Wnt10b抑制BMP9在C3H10T1/2细胞中诱导的成脂分化,沉默Wnt10b则促进BMP9的成脂分化诱导作用。结论Wnt10b可以促进BMP9诱导的MSCs骨向分化,这种作用可能与增强BMP/Smad信号转导有关。

特殊状态人群中亚胺培南-西司他丁的群体药动学研究进展

亚胺培南-西司他丁为广谱碳青霉烯类抗菌药物,已在临床广泛应用,但其在特殊状态人群[本文特指连续性肾脏替代治疗(CRRT)患者、体外膜肺氧合(ECMO)患者、病情危重的烧伤患者以及新生儿和儿童]的个体化给药方案制订中缺乏相应指南和专家共识。本文总结亚胺培南-西司他丁在特殊状态人群中的群体药动学研究,推荐亚胺培南-西司他丁剂量为:CRRT患者给予1~3 g/d;烧伤患者给予500 mg~1 g,q6 h;ECMO患者给予750 mg~1 g,q6 h;新生儿给予20 mg/kg,q8 h或25 mg/kg,q8 h;儿童给予25 mg/kg,q6 h。

肾功能亢进患者血浆中亚胺培南浓度UPLC-MS/MS测定方法的建立及药代动力学研究

目的建立了测定肾功能亢进(ARC)患者血浆中亚胺培南(IMP)浓度的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,并研究IMP在ARC患者体内的药代动力学特征。方法血浆样品用乙腈沉淀蛋白处理,以阿莫西林为内标,采用UPLC-MS/MS法分析。筛选IMP的给药方案为1 g,静脉滴注,每隔8 h的ARC患者,收集不同时间点的血药浓度,计算药代动力学参数。结果IMP在0.40~200.00μg/mL范围内线性良好,精密度、准确度、基质效应、方法回收率和稳定性均符合要求。IMP在ARC患者体内的半衰期为(0.97±0.06)h,血药浓度-时间曲线下面积(AUC)为(48.49±14.93)mg/(L·h),表观分布容积为(16.15±7.90)L,肌酐清除率为(18.30±5.70)L/h,达峰浓度为(15.63±4.60)μg/mL。结论UPLC-MS/MS法准确度高、灵敏度强,可有效用于测定ARC患者血浆中IMP浓度。ARC患者体内IMP的代谢速率和清除率可能发生变化,为临床用药提供重要参考。