重叠延伸PCR法构建人肿瘤坏死因子前体水解酶系列突变重组体及稳定转染HeLa细胞株的建立

目的构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系。方法以THP1细胞cDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长cDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体。在此基础上,应用重叠延伸PCR扩增出缺失解整合素区的TACE重组cDNA和缺失酶区的TACE重组cDNA,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pIRES2.0-EGFP中,同时TACE全长也构建入pIRES20.-EGFP。这3种真核表达载体经酶切和测序鉴定后,用脂质体法转染HeLa细胞,经过G418筛选,获得稳定转染的HeLa细胞株,采用RT-PCR、Westernblot及荧光法检测表达。结果成功构建了pIRES2.0-EG-FP/FL-TACE、pIRES20.-EGFP/disΔ-TACE、pIRES20.-EGFP/metΔ-TACE真核表达载体,并建立了稳定转染的HeLa细胞株,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染HeLa细胞株的建立为进一步研究TACE功能奠定了必要的实验基础。

苯磺酸瑞马唑仑与丙泊酚用于无痛结肠镜检查的有效性及安全性的随机、单盲、平行对照研究

目的比较注射用苯磺酸瑞马唑仑和丙泊酚用于结肠镜诊疗时的有效性和安全性。方法采用随机、单盲的对照研究方法,选择2018年5—6月门诊无痛结肠镜的患者64例,随机分为为两组:注射用苯磺酸瑞马唑仑组(试验组)、丙泊酚组(对照组)。所有受试者静脉注射芬太尼50μg进行镇痛预处理,试验组静脉给予注射用苯磺酸瑞马唑仑7 mg,对照组静脉给予丙泊酚中长链脂肪乳注射液1.5 mg/kg,操作中根据实际情况试验组以2.5 mg/次追加注射用苯磺酸瑞马唑仑,对照组以0.5 mg·kg-1·次-1追加丙泊酚中长链脂肪乳注射液。记录入室后直至操作结束受试者生命体征稳定后的HR、BP、RR、SpO2;围术期不良事件,其他用药或治疗;改良警觉/镇静评分(MOAA/S)历时性变化;患者苏醒及离院时间。结果两组镇静成功比例均为100%;给药后不良事件率对照组86.7%高于试验组42.6%(P<0.05),其中发生率较高的为血压下降,试验组12.8%低于对照组26.7%(P<0.05);试验组注射痛发生率2.1%低于对照组60%(P<0.05);试验组和对照组受试者最后一次给药结束至受试者满足离院标准的平均时间试验组15.23 min短于对照组18.13 min(P<0.05)。结论本研究发现注射用苯磺酸瑞马唑仑和丙泊酚用于结肠镜诊疗镇静成功比例相当,均可为结肠镜检查提供安全有效的镇静,但注射用苯磺酸瑞马唑仑用于结肠镜检查的安全性优于对照药物丙泊酚。

吗啡-6-β-D-葡萄糖醛酸苷的合成工艺

目的:对吗啡-6-β-D-葡萄糖醛酸苷的合成工艺进行研究。方法:以硫酸吗啡为原料,经酯化反应得到中间体3-苯甲酰吗啡4;以1,2,3,4-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯为原料,经一步酯交换反应,得到中间体1-三氟乙酰基-2,3,4-三-O-乙酰基-β-D-葡萄糖醛酸甲酯6;中间体4和6经糖苷化反应得中间体7,再经水解反应制得吗啡-6-β-D-葡萄糖醛酸苷。结果:目标化合物经1H-NMR、13C-NMR、高分辨MS和X射线单晶衍射等方法确证结构,总收率为40.3%,HPLC测定纯度达99.8%。结论:该制备方法所用原料易得、操作简便、总收率较高、糖苷化反应步骤的收率和质量稳定、成品质量好,适合工业化生产。