硬组织切片技术在组织工程骨研究中的应用

目的 改进硬组织切片技术以适应骨组织工程研究。 方法 组织工程骨修复兔桡骨的术后标本和四环素标记大鼠股骨标本的观察。通过对硬组织切片中组织包埋、切片的方法、步骤及染色法 ,确定操作过程中的关键技术和需注意的问题 ,重点解决硬组织切片易于脱片的缺点。 结果 经改进后的硬组织切片技术能保持其原有组织结构 ,可进行 HE、Masson法以及免疫组织化学染色 ,染色后组织结构完整 ,细胞形态清晰 ,切片质量好。荧光显微镜观察骨组织结构完整。克服了普通硬组织切片技术容易发生脱片的缺点。 结论 改进的硬组织切片技术适合骨组织工程研究。

民间规则作为司法裁判的渊源——一个司法中心的立场

由于受立法中心传统的影响,人们往往把法官的裁判渊源局限于国家法。而在司法实践中民间规则作为裁判渊源,已被广泛运用。因此,要承认民间规则的法源地位,研究立场必须从立法中心向司法中心转换,必须从法官裁判的可接受性理解民间规则的司法化。

综合性护理干预对经尿道前列腺电切术后患者的临床应用

目的探讨综合性护理干预对经尿道前列腺电切术后的临床效果。方法将106例良性前列腺增生(BPH)患者随机分为观察组与对照组,两组患者均进行经尿道前列腺电切术(TURP),对照组患者进行常规护理干预,观察组进行综合性护理干预,干预方法有:心理护理、饮食指导及排尿指导、排便及盆底肌功能锻炼及并发症的预防。结果观察组与对照组的IPSS评分分别为(15.8±1.6分vs 14.2±1.3分),QOL评分为(4.3±0.3分vs 3.6±0.4分),观察组与对照组的术后继发性出血发生率为(5.7%vs 17.0%),膀胱痉挛发生率(3.8%vs 13.2%),尿失禁发生率(1.9%vs 9.4%),泌尿系统感染发生率为(7.5%vs 20.8%),下肢深静脉血栓发生率为(0.0%vs 7.5%),两两比较,P<0.05。结论综合性护理干预可有效改善BPH患者TURP术后前列腺相关症状,提升生活质量,降低住院期间并发症发生率。

法律论证的正当性标准

法律论证是寻求法治合法性的一种理论追求,它承载着一项重要的使命,即寻求达致司法公正,实现社会正义之方法。通过运用论证方法,实现个案裁判之公正,彰显法治之目标。实践中,由于论证理路之不同,如何把握论证正当性标准便产生了不同观点。颇具代表性的有逻辑有效性、可接受性、融贯性。但由于每一种标准都具有一定的适用场域,它们有的是程序正义中的标准,有的是实体正义中的标准。因此,任何一种标准都不能单独作为法律论证的正当性标准,应当把它们综合运用到法律论证当中去。

司法中的利益衡量——一个博弈论的分析

利益衡量作为法律方法的一种黄金方法,在个案衡平中经常运用它,但是对于它发挥作用的机制长期以来只是进行形而上的研究,没有走向形而下,这样就制约了该方法作用的发挥。从经济分析的视角,法官通过对双方当事人之间的利益进行博弈分析,可以直观的显示法官利益衡量的方法与步骤,同时也体现出司法中进行利益衡量的必要性。

改良的悬滴培养法

改良的悬滴培养法李秀群，薛庆善，保天然，廖德阳，吴良芳华西医科大学成都６１００４１悬滴培养法（ｈａｎｇｉｎｇｄｒｏｐｃｕｌｔｕｒｅ）是组织和器官培养的常规方法，最早是由Ｈａｒｒｉｏｎ和Ｃａｒｒｅｌ创立的，系单盖片悬滴培养法，其后是Ｍａｘｉｍｏｗ将单盖...

石蜡油辅助男性患者导尿管插管的临床应用

目的:探讨石蜡油辅助男性患者导尿管插管的应用价值。方法:620例行导尿管插管的患者按照入院时间不同分为观察组(n=338例)与对照组(n=282例),对照组患者将导尿管浸润石蜡油后插管,观察组患者采用无菌注射器抽吸3ml无菌石蜡油注入男性尿道内,后将导尿管浸润石蜡油插管,比较两组患者的插管反应、一次性插管成功率、尿道损伤及插管操作时间。结果:观察组插管轻度反应255例(71.2%),中度插管反应70例(16.0),重度插管反应13例(2.4);对照组插管轻度反应58例(20.6%),中度插管反应164例(58.2%),重度插管反应60例(21.2%),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组的一次性插管成功率分别为(95.0%vs70.2%),尿道损伤率为(0.59%vs3.90%),插管操作时间分别为(12.46±2.13 minmin vs16.84±1.50),两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:石蜡油通过全程润滑男性患者尿道,使尿道插管更加顺利,有效地降低插管反应、尿道损伤率,提升一次性插管成功率,减少插管操作时间。

生物衍生组织工程骨植骨的初步临床应用

目的 总结生物衍生组织工程骨用于骨科临床的初步结果。方法 2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 2年 1月 ,用同种异体骨膜来源的成骨细胞 1× 10 6 / ml与生物衍生骨支架材料构建的组织工程骨 ,经体外培养 3～ 7天后 ,植入修复 5 2例各种类型的骨缺损 ,其中骨囊性病变 7例 ,陈旧性骨折不愈合或畸形愈合 2 2例 ,新鲜粉碎性骨折伴骨缺损 15例 ,脊柱骨折后路植骨融合术 4例 ,牙槽骨植骨 3例 ,足跗中关节植骨融合 1例。植入组织工程骨总量为 349g,平均每例植入6 .7g。结果 术后全部病例获得随访 ,随访时间 10～ 2 8个月 ,平均随访 18.5个月。除 1例术后伤口乙级愈合外 ,5 1例均为甲级愈合。除 2例植骨延迟愈合外 ,其余 5 0例均在 3.0～ 4 .5个月内愈合。有 6例进行了 CD3、CD4、CD8及 ICAM- 1和 VCAM- 1检测 ,均未发现明显异常。结论 生物衍生组织工程骨具有良好的成骨能力 。

组织工程化骨修复猕猴长段骨缺损的实验研究

目的 探讨用生物衍生骨材料和骨髓基质干细胞 (MSCs)复合后构成的组织工程化骨对异体猕猴长段骨缺损的修复作用。 方法 于猕猴胫骨结节抽取 MSCs并使诱导分化为成骨样细胞 ,用 5 -溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U )标记 ,培养后与人源生物衍生骨材料体外复合构成组织工程化骨 ,植入 15只异体猕猴修复桡骨 2 .5 cm长段骨缺损作为实验组 ;用单纯生物衍生骨材料修复对侧同样骨缺损作为对照组 ;另取 2只猕猴双侧桡骨同样部位和大小骨缺损旷置作为空白组。术后 1、2、3、6和 12周时各处死 3只动物取材 ,空白组 12周取材 ,行大体观察、组织学和免疫组织化学检测。 结果 实验组和对照组术后 1、2和 3周移植物周围组织反应较明显 ,6周后明显减轻 ,12周时基本消失。实验组标记成骨样细胞于术后 6周仍存在 ,术后 12周基本消失 ;骨缺损部位骨样组织、软骨、编织骨和板层骨出现时间均较对照组早 ,且骨愈合时间提前 3～ 6周。实验组骨缺损以多点方式直接成骨 ,对照组则从两端以“爬行替代”方式成骨。空白组术后 12周骨缺损均无愈合。 结论 生物衍生骨材料和 MSCs复合构建的组织工程化骨异体植入修复猕猴长段骨缺损可超越骨段移植的“爬行替代”过程 ,使骨缺损能较快愈合。生物衍生骨材料和同种异体 MSCs复合组织工程?

三种生物骨衍生材料修复节段性骨缺损的实验研究

目的 评价 3种生物骨衍生材料修复节段性骨缺损的成骨作用。 方法 将 6 0只健康日本大耳白兔双侧桡骨中段制成 10 mm节段性骨缺损 ,并随机分为 A、B、C、D和 E组 ,每组 12只 ,其中 A组植入复合型完全脱蛋白骨 (composite fully deproteinised bone,CFDB)、B组植入部分脱蛋白骨 (partially deproteinised bone,PDPB)、C组植入部分脱钙骨 (partially decalcified bone,PDCB)修复兔桡骨节段性缺损 ,D组自体髂骨移植 ,E组以空白缺损为对照 ,于术后4、8、12及 2 4周取材 ,通过 X线摄片和不脱钙硬组织切片检测 ,评价 3种材料的成骨作用。 结果 X线摄片观察 :A、B与 C组 4周时材料密度较高 ;8周时材料与宿主骨交界处模糊 ;12周时材料边缘部分区域密度接近宿主骨 ;2 4周时 B组髓腔再通 ,C组缺损区域密度大部分接近宿主骨 ,有少许高密度影 ,A组缺损区域有较多高密度影。 X线片评分 4周和8周时各材料组无统计学差异 (P>0 .0 5 ) ;12周时 B组和 C组高于 A组 (P<0 .0 5 ) ;2 4周时 D组 >B组 >C组 >A组(P<0 .0 5 )。经组织学形态观察可见 4周和 8周时新骨贴附材料生长 ;以后新骨增多 ;材料随着时间的推移逐渐降解吸收 ;2 4周时成骨量 D组 >B组 >C组 >A组 (P<0 .0 5 )。 结论 PDPB修复节段性骨缺损的效果佳 ,

小肠黏膜下层细胞相容性的研究

评价猪小肠黏膜下层与人胚骨膜成骨细胞 (Human embryonic periosteal osteoblasts,HEPOB)、人胚皮肤成纤维细胞 (Hum an em bryonic skin fibroblasts,HESFB)及兔肾血管内皮细胞 (Rabbitrenal vascular endothelialcells,RRVEC)的细胞相容性。制备猪小肠黏膜下层 (Sm all intestinal submucosa,SIS) ,将 HEPOB、HESFB和RRVEC与小肠黏膜下层体外复合培养 ,采用相差显微镜观察细胞的黏附和生长 ,并用 MTT法测定细胞增殖 ,用流式细胞仪检测复合培养细胞在不同培养时间的细胞周期、细胞凋亡。结果表明三种细胞均可在 SIS上黏附生长 ,SIS可促进 RRVEC的增殖 ,SIS对三种细胞的细胞周期和细胞凋亡率无影响。 SIS有良好的细胞相容性 ,其孔径、结构有助于 HEPOB、HESFB和 RRVEC细胞的黏附和生长 ,是良好的组织工程生物衍生材料。

脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研究

目的 制备脱细胞人羊膜 (HAAM) ,检测其细胞相容性和组织相容性 ,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。 方法 新鲜人羊膜经漂洗后戊二醛交联 ,0 .5 % SDS震摇 2 4小时 ,胰蛋白酶消化 4小时 ,充分漂洗 ,冷冻干燥 ,分装 ,环氧乙烷消毒备用。倒置相差显微镜和扫描电镜观察表面结构 ,测量孔径 ,并作 HE、Mallory染色。体外培养人成纤维细胞并复合于 HAAM,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附、生长 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定 HAAM浸提液对培养的人成纤维细胞的细胞毒性。将 HAAM植入 SD大鼠背部皮下 ,观察其组织相容性。 结果 HAAM的一面为网状结构 ,孔径为 10～ 80 nm,另一面为致密纤维结构。HE、Mallory染色表明材料无细胞残留 ,均为胶原组成。成纤维细胞能在 HAAM上黏附、增殖。 MTT示材料细胞毒性为 0或 1级 ,动物埋置实验无异常反应。 结论 应用去垢剂 -酶消化法处理新鲜人羊膜 ,能有效去除组织中的细胞和可溶性成分 ,可进一步降低其免疫原性 ,保留基质及网状结构 ,有良好的细胞相容性和组织相容性 ,可作为组织缺损的修复材料及组织工程的膜支架材料。

WO-1生物衍生骨缓释材料抗感染的实验研究

目的 研制具有抗感染作用的WO- 1生物衍生骨缓释材料。 方法 应用 型胶原和同种骨制备胶原生物衍生骨复合材料,将WO- 1吸附于胶原生物衍生骨构建成WO- 1生物衍生骨缓释材料,扫描电镜观察其形貌特征;将3H-四环素( 4 5 .1GBq/ mmol)以WO- 1标准品溶液稀释,吸附于胶原生物衍生骨,测定缓释材料中WO- 1的体外释放;将WO- 1生物衍生骨缓释材料置入接种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌的培养基中,检测其体外抑菌能力。将WO- 1生物衍生骨植入2 4只新西兰大白兔桡骨缺损处,术后9、16、2 3及30 d各处死2只兔测定血中WO- 1的浓度,以及材料周围肌肉与骨中的WO- 1的浓度。 结果 WO- 1生物衍生骨复合材料保留了天然骨的三维结构,表面有胶状膜覆盖;在体外释放实验中第1天呈暴发释放,以后呈恒定释放;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等骨感染的常见致病菌有持久稳定的抑菌能力。体内实验中周围骨组织及肌肉组织中WO- 1在各时间点均保持较高的浓度,组间比较差异无统计学意义( P>0 .0 5 ) ,而动物血中WO- 1浓度较低,与骨及肌肉组织中WO- 1浓度相比,差异有统计学意义( P<0 .0 5 )。 结论 WO-

脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分,观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱,获取髓核,0.2%Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养组(A组)及脊索细胞、软骨样细胞(1∶1)共培养组(B组)。倒置相差显微镜观察两组细胞生长情况,测定两组原代及传代细胞成活率,MTT法测定两组第2代细胞增殖曲线,并以甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色鉴定两组原代及传代细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果成功分离、纯化脊索细胞和软骨样细胞。细胞培养观察,原代脊索细胞直径10～15μm,胞浆内富含大小不等的囊泡;原代软骨样细胞直径4～6μm,胞浆内无囊泡。各代细胞成活率A组为89.0%～95.3%,B组为91.3%～96.3%,各代细胞成活率两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组细胞培养3～4d进入对数生长期,B组细胞培养2d后进入对数生长期;培养4d后,B组细胞增殖能力高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组3代以内细胞表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原,B组细胞表型维持至5代。结论脊索细胞能促进髓核软骨样细胞的增殖及表型维持;脊索细胞可能在防止椎间盘退变中具有重要意义。

人端粒酶逆转录酶真核表达质粒转染人成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 分析人端粒酶逆转录酶 (h TERT)真核表达质粒 p GRN14 5转染人成纤维细胞的生物学特性。方法 体外分离培养小儿包皮成纤维细胞 ,脂质体法将构建的 p GRN14 5转染人成纤维细胞 ,经潮霉素 B筛选 ,扩增培养阳性克隆。 RT- PCR法、TRAP- PCR法分析细胞端粒酶活性。流式细胞术检测细胞增殖周期及细胞凋亡率 ,对转染后细胞行染色体核型分析及免疫组织化学法检测胶原分泌能力。结果 转染后培养的人成纤维细胞形态与转染前相比无明显改变 ,转染细胞稳定地表达端粒酶活性 ,流式细胞术分析转染前后成纤维细胞的增殖周期无明显改变 ,细胞凋亡率较转染前降低。经 p GRN14 5转染的人成纤维细胞保持正常的二倍体核型 ,具有正常分泌 、 型胶原的能力。结论 p GRN14 5转染的人成纤维细胞稳定地表达端粒酶活性 ,细胞寿命明显延长。

生物衍生材料构建组织工程肌腱体内植入的实验研究

目的 探讨用同种异体肌腱细胞与生物衍生肌腱材料体外联合培养后植入体内 ,构建组织工程肌腱的可行性。 方法 选用四川猕猴 15只 ,手术造成纤维鞘管内屈指深肌腱 2 .5 cm缺损后 ,分三组。A组 :生物衍生肌腱材料构建的组织工程肌腱移植组 ;B组 :单纯生物衍生肌腱材料移植组 ;C组 :自体肌腱移植组。术后 1、2、3、6和 12周分期观察植入物的大体形态、组织学和超微结构 ,Brd U标记表达。 结果 A组植入体内后肌腱细胞能继续增殖 ,细胞形态随着时间增加而逐渐趋于正常 ,形成的肌腱呈白色且有光泽、致密 ,组织学可见胶原纤维排列较为规则 ,12周肌腱细胞仍成活并分泌胶原 ,Brd U表达为阳性 ;B组植入体内 3周后材料逐渐变细 ,12周后材料被逐渐降解吸收出现中断 ;C组植入体内 2周后桥接部有纤维连接 ,排列较为规则 ,肌腱愈合。A组分别于 3、6、12周进行扫描电镜观察可见肌腱细胞排列均匀 ,胶原纤维相互连接形成网状 ,主体趋势与肌腱走行方向一致 ;透射电镜下可见细胞核仁清晰 ,细胞器丰富。随时间的增加 A、C组与 B组的差异明显增大。 结论 同种异体肌腱细胞与生物衍生肌腱材料复合构建的组织工程肌腱 ,植入免疫功能正常的动物体内能够再生出肌腱样组织 ,植入的肌腱细胞具有生命力 。

骨髓基质干细胞与生物衍生骨复合修复山羊胫骨缺损的研究

目的 探讨骨髓基质干细胞 (marrow stromal stem cells,MSCs)与生物衍生骨复合修复山羊胫骨的长段骨 -骨膜缺损的可行性。 方法 将 12月龄山羊 35只双侧胫骨制备成中段 2 0 mm的骨 -骨膜缺损 ,其中 33只 ,将MSCs与生物衍生骨于体外复合培养后 ,将其植入右侧缺损处 ,常规钢板螺钉内固定作为实验组 ,以单纯生物衍生骨植入左侧作为对照组 ,另 2只为空白组不植入任何材料 ,在 2、4、6、8、12、16及 2 4周各时间点分别行大体标本、组织学观察 ,以及生物力学测试 ,比较 3组骨缺损修复的能力。 结果 4周时实验组支架材料部分吸收 ,植入物表面有纤维骨痂形成 ,对照组支架材料少量吸收 ,植入物表面有少量骨样组织形成 ;8周时 ,大体标本、组织学观察 ,实验组中的支架材料已完全降解 ,骨缺损部分修复 ,对照组中植入物两端少量新骨形成 ,材料中为纤维骨样组织 ,但 8周时 ,实验组与对照组的生物力学强度差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;12周时 ,实验组骨缺损完全修复 ,对照组植入物两端有新骨包绕 ,与骨端连接紧密。 12～ 2 4周实验组弯曲应力大于对照组有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;2 4周时空白组骨缺损未修复。 结论 所构建的组织工程骨修复能力较强 ,成骨迅速 ,且量大 。