脂肪酸结合蛋白5结合Vimentin蛋白在肝癌中的作用机制

目的 筛选和验证与脂肪酸结合蛋白5(FABP5)结合的互作蛋白,同时研究FABP5与候选蛋白的调控关系,进一步探讨FABP5在肝癌中的作用机制。方法 采用免疫沉淀联合串联质谱分析方法(IP-MS)筛选出与FABP5相互结合的蛋白;通过免疫共沉淀实验(Co-IP)从外源性和内源性层面验证FABP5与候选互作蛋白的结合关系;利用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法观察敲低FABP5对肝癌细胞中波形蛋白(Vimentin)转录和翻译水平的影响;通过鬼笔环肽染色实验观察过表达FABP5对肝癌细胞骨架的影响。结果 IP-MS鉴定出336个与FABP5相互结合的潜在靶蛋白,结合文献,挑选出5个与肿瘤相关的候选蛋白,分别为PRDX1、PRSS3、PKM、HSP90AA1和Vimentin蛋白。通过外源性和内源性Co-IP实验证实FABP5与Vimentin蛋白存在结合关系。敲低FABP5对肝癌细胞中Vimentin mRNA的表达没有显著作用,但可抑制Vimentin蛋白的表达,而过表达FABP5会影响肝癌细胞的骨架。结论 FABP5促进肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与FABP5结合调控Vimentin蛋白和影响细胞骨架重塑有关,有望成为抗肝癌的潜在靶点,为肝癌的治疗提供新的思路。

肝动脉化疗栓塞术后原发性肝癌患者的肠道菌群变化

目的对比分析原发性肝癌患者及经肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗前后肠道菌群的多样性变化及菌群结构差异。方法选取2018年9月-2019年1月广西医科大学附属肿瘤医院原发性肝癌患者65例(其中接受TACE治疗20例),健康体检者27例。高通量16S rDNA测序方法分析患者便菌群结构,Anosim、LEf Se软件与R语言stats包分析菌群组间物种相对丰度、组间物种多样性、群落差异、进化分支等差异。符合正态性及方差齐的计量资料两组间比较采用t检验;不符合正态分布计量资料组间比较采用Kruskal-Wallis U检验;计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采取Spearman秩相关性分析。结果在门水平,各组的最大优势菌均为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes),两者占比之和在健康组>90%,在原发性肝癌组及TACE治疗组中占比均>80%。拟杆菌门在健康组、原发性肝癌组、TACE治疗组占比分别为48.44%、44.96%、48.60%,厚壁菌门在各组占比分别为47.09%、38.15%、33.93%,拟杆菌门、厚壁菌门相对丰度在肝癌组均低于健康组;此外,变形菌门(Proteobacteria)及梭杆菌门(Fusobacteria)相对丰度在肝癌组及TACE治疗组中占比均高于健康组;其余菌门虽有所变化,但占比均<0.5%。健康组物种丰富度Observed species(264±47 vs 230±64,t=2.499,P=0.014)及ACE值(284.11±50.82 vs 252.96±67.58,t=2.158,P=0.034)均大于原发性肝癌组。Between组(原发性肝癌组+健康组)的秩较原发性肝癌组及健康组高,R>0,健康组及原发性肝癌组肠道菌群组间结构差异大于组内差异(P<0.05);Between组(TACE术前+术后)的秩低于TACE术前组,R<0,TACE治疗前与治疗后组内结构差异大于组间结构差异(P>0.05)。原发性肝癌患者肠内机会致病菌与Child-Turcotte-Pugh评分、TBil、ALT、AST存在相关性(r值分别为0.245、0.421、0.327、0.446,P值分别为0.049、<0.001、0.008、<0.001),潜在益生菌与Child-Turcotte-Pugh评分、TBil、Alb、ALT、AST存在相关性(r值分别为-0.314、-0.490、0.285、-0.374、-0.528,P值分别为0.011、<0.001、0.022、0.002、<0.001)。差异菌中的机会致病菌相对丰度随着肝功能Child-Pugh分级递增而增加,C级高于A级(Z=4.301,P=0.038)与B级(Z=4.063,P=0.044)。而潜在益生作用菌的相对丰度随着肝功能Child-Pugh分级的增加呈现减少趋势,C级低于A级(Z=3.882,P=0.049)。结论原发性肝癌患者与健康者肠道菌群多样性及结构不同,而原发性肝癌患者TACE治疗前后肠道菌群相近,TACE治疗对肠道菌群影响较小。肠道菌群失调与原发性肝癌临床分级存在关联,随着肝功能Child-Pugh等级的递增,菌群失调程度更为明显,潜在益生作用菌减少,而机会性致病菌增加。

广西不同地域五、七叶绞股蓝中三萜皂苷含量差异研究

目的:探讨影响绞股蓝药用有效成分三萜皂苷含量的因素,为绞股蓝种植、制药提供科学建议。方法:采用超声波提取和分光光度法,分析比较不同品种、不同组织、不同产地绞股蓝间总三萜皂苷含量的差异。结果:七叶绞股蓝叶片三萜皂苷含量(6.78%)显著高于五叶绞股蓝(3.69%),绞股蓝叶片中三萜皂苷的平均含量(4.72%)显著高于茎的平均含量(1.85%),广西南部产五叶绞股蓝叶片三萜皂苷含量(4.1%)高于广西北部产五叶绞股蓝(3.6%)。结论:为获得含量更高的三萜皂苷,实现最大经济效益,建议药农种植七叶绞股蓝,药材收购时宜叶茎分开。

广西肝癌高发区不同水源微囊藻毒素含量调查

目的了解广西肝癌高发区扶绥县饮用水水体微囊藻毒素(microcystin,MC)污染状况。方法采集扶绥县11个自然村水源水样及28个自然村的末梢水水样,同时记录采样时水温及p H值。采用酶联免疫吸附法测定水样中的MC含量。结果(1)水源水和末梢水之间温度和p H值差异无统计学意义(P>0.05)。(2)水源水和末梢水MC平均浓度分别为(15.64±2.08)ng/L、(14.42±2.28)ng/L,两者差异无统计学意义(P>0.05)。水源水中河水MC浓度最高,为16.69 ng/L,其他依次为地下河水和井水,各种水源水间MC浓度差异无统计学意义(P>0.05)。末梢水中MC浓度从高到低依次为水库水、井水、地下河水和河水,来源不同的末梢水间MC浓度差异无统计学意义(P>0.05)。(3)经水厂处理和未经水厂处理的末梢水水样MC平均浓度分别为(13.90±2.62)ng/L、(14.71±2.09)ng/L,两者差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论广西肝癌高发区扶绥县饮用水MC浓度均未超过WHO推荐的安全限值,不同水源水间的MC浓度无明显差异。

采用随机引物组合对绞股蓝作RAPD分析及SCAR鉴定

为寻找简单、可重复的分子鉴定方法,对绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.) Makino)新鲜品、药材干品及其混淆品乌蔹莓(Cayratia japonica(Thunb.) Gagnep)进行了鉴定。首先从2000余条10碱基的随机引物中筛选出20条,并以5条为1组随机分成4组,然后采用RAPD方法对7份不同来源的绞股蓝新鲜品进行扩增,对扩增得到的绞股蓝特征条带进行基因克隆、测序,分析序列特征,再设计特异性引物,最后,用绞股蓝新鲜品、药材干品及其混淆品乌蔹莓等样品进行PCR验证。结果显示:RAPD扩增能够得到7份绞股蓝新鲜品重复的共有特征条带;经基因克隆、测序并设计特异性引物后进行PCR验证,获得了绞股蓝特异序列扩增区域标志(Sequence-characterized amplified region maker,SCAR)。初步建立了区分绞股蓝及其混淆品乌蔹莓的分子鉴定标准,并首次将SCAR应用于绞股蓝分子鉴定中。

8份广西产绞股蓝种质的RAPD引物筛选及其遗传多样性分析

本研究的目的在于筛选合适的RAPD随机引物,应用RAPD技术对药用植物绞股蓝进行遗传多样性分析,并构建DNA指纹图谱。研究结果表明,我们利用生物信息学方法挑选出的20条引物中有19条引物的扩增条带清晰且多态性好;在清晰稳定出现的354条带中,294条具有多态性;其中有3条引物的扩增条带可清楚区分绞股蓝与混淆品种乌蔹莓,可建立其DNA指纹图谱。按UPGMA法进行聚类分析,计算其遗传相似系数,结果显示,8份绞股蓝供试材料聚为两类,聚类结果与其地理区域远近和生长环境一致。本研究中筛选出的19条引物适用于绞股蓝遗传多样性分析,且获得的DNA指纹图谱可用于鉴别绞股蓝。

基于RNA-Seq技术的跨种属跨病因肝癌差异表达基因的筛选

目的:运用全转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)技术和跨种属、跨病因筛选策略,定位出影响肝癌发生发展的关键因子.方法:运用RNA-Seq技术,对人肝癌、癌旁和正常肝组织,以及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和黄曲霉毒素B1(aflatoxins,AFB1)诱发的树鼩肝癌、癌旁和正常肝组织标本进行全转录组测序、基因表达水平分析和比较;分别筛选出人肝癌差异表达分子、HBV和AFB1致癌的树鼩肝癌差异表达因子,最后定位出跨人和树鼩两个物种、跨HBV和AFB1两种致癌因素的肝癌共同差异表达分子.结果:各标本总RNA提取质量合格,RNASeq测序数据质量合格,测序数据与参考基因对比匹配率合格,样品间基因表达相关性合格.人肝癌差异表达基因有68个,其中上调基因14个,下调基因54个;HBV诱发的树鼩肝癌差异表达基因有314个,AFB1诱发的树鼩肝癌差异表达基因有20个,HBV和AFB1诱发的树鼩肝癌共同差异表达基因11个,均为下调基因.人肝癌和树鼩肝癌共同差异表达基因为2个,分别是载脂蛋白F(apolipoprotein F,APOF)和人胰岛素样生长因子酸不稳定亚基(insulin-like growth factor binding protein,acid labile subunit,IGFALS),其mRNA表达水平在肝癌中均下调.结论:运用RNA-Seq技术,跨种属、跨病因筛选肝癌关键基因的研究策略有可能推动肝癌关键基因的定位;APOF和IGFALS有可能是影响肝癌发生发展的重要分子.

广西和云南树鼩群体遗传多样性的比较分析

目的比较分析我国广西、云南两个树鼩群体的遗传差异和分化程度,推动树鼩优良品系的培育和优化实验动物模型。方法提取广西和云南各32只树鼩的全血基因组DNA,分别采用9对荧光标记微卫星引物进行PCR扩增,通过毛细管电泳技术检测扩增片段,并利用POPGENE等软件比较两个树鼩群体的遗传相关指标。结果广西和云南两个树鼩群体平均期望杂合度(He)为0.703,平均多态信息含量(PIC)为0.725,Fis均值>0。CCBL1B、CCDC61、EDA1和OPA3四个位点表现为极显著偏离哈迪-温伯格平衡。两群体的遗传距离及无偏遗传距离分别为1.277和1.268,遗传相似系数约为0.28。遗传结构变异的分布情况显示61.57%的微卫星遗传变异来自于群体内部,38.43%存在于群体之间。STRUCTURE分析发现广西和云南树鼩为中缅树鼩群体的两个不同的亚种。结论广西和云南树鼩两个群体的遗传多样性都较丰富,两个群体间具有较大的遗传差异和分化程度,遗传变异主要来源于群体内部。

3种广西钩藤属药用植物的RAPD多态性分析

目的运用随机扩增多态性技术探索广西钩藤属药用植物的遗传多态性,为其种质鉴定提供依据。方法采用优化的试剂盒提取法提取大叶钩藤、白钩藤、毛钩藤3种植物的总DNA。用经过筛选的18条10个碱基的随机引物进行PCR扩增。结果优化后的试剂盒提取法可有效获取3种钩藤属植物的基因组DNA,18条随机引物扩增得到条带共260条,其中多态性条带231条,多态率达到88.9%,扩增效果好。按UPGMA法进行聚类分析,计算其遗传相似系数,结果显示,5份钩藤供试材料聚为3类。结论 3种广西钩藤属药用植物的聚类结果与其种和地理区域远近一致,与形态学观察可能存在差异。所得RAPD标记可用于钩藤属药用植物的多态性研究,并为今后开发遗传鉴定的分子标记奠定基础。

结直肠癌KRAS和BRAF基因突变及其与临床病理的相关性

目的探讨结直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变与临床病理特征的关系。方法应用实时荧光TaqMan探针法检测322例结直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变情况,分析患者不同年龄、性别、肿瘤大小、分化程度等不同组别的基因突变情况与临床病理特征的关系。结果 322例结直肠癌患者中,结肠癌患者182例,直肠癌患者140例,KRAS基因突变105例(32.6%),BRAF基因突变13例(4.0%)。结肠癌患者和直肠癌患者在性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期指标比较差异无统计学意义(P>0.05);但结肠癌患者T_3+T_4的比例高于直肠癌患者(P=0.004)。结肠癌和直肠癌患者KRAS和BRAF基因突变情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。在105例KRAS基因突变中,G12D突变40例(38.1%),G12S突变38例(36.2%), G12A突变12例(11.4%),G12V突变9例(8.6%),G13A突变6例(5.7%)。13例BRAF基因突变型均为V600E型。右半结肠癌的KRAS基因突变率显著高于左半结肠癌和直肠癌(P=0.010);BRAF基因突变的患者年龄高于未突变者(P=0.022),突变患者发生淋巴结转移的比例比未发生转移的比例低(P=0.020);突变患者Ⅲ+Ⅳ期的比例低于未突变患者(P=0.044)。结论结直肠癌患者存在较高的KRAS基因突变率,而BRAF基因突变率较低。KRAS基因突变与肿瘤的原发部位密切相关,且与BRAF基因突变无直接相关性。

IGFBP4和PAPPA在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的研究IGFBP4和PAPPA基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达水平,并分析其临床意义。方法提取55例手术治疗的NSCLC癌组织及癌旁组织的RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测组织中IGFBP4和PAPPA的表达水平。结果 IGFBP4基因在NSCLC癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05),但高于正常肺组织(P<0.05),在鳞癌组织中的表达明显高于腺癌组织,其表达水平在年龄、性别、临床分期、有无淋巴结转移中无明显差别(P>0.05),IGFBP4高表达组患者的生存期明显高于低表达组(P<0.05)。PAPPA基因在NSCLC癌组织中的表达高于癌旁组织和正常肺组织(P<0.05),其在癌旁组织和正常肺组织中的表达水平无差异(P>0.05),在腺癌组织中的表达明显高于腺鳞癌组织,在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),其表达水平在年龄、性别、临床分期中无明显差别,PAPPA高表达组患者生存期明显低于低表达组(P<0.05)。IGFBP4与PAPPA在NSCLC组织中的表达水平呈显著正相关(r=0.512,P=0.000)。结论 IGFBP4和PAPPA基因的表达与NSCLC的生长有关,可以作为判断NSCLC预后的参考指标。

沉默MCM7基因后肝癌SMMC-7721细胞差异表达基因的筛选

目的:探究微小染色体维持蛋白7(minichromosome maintenance protein 7,MCM7)基因在调节肝癌细胞生长的相关机制.方法:通过s i R N A干扰技术沉默人肝癌SMMC-7721细胞中的MCM7基因表达,采用人全基因组表达谱芯片,筛查MCM7沉默后差异表达基因,进行生物信息学分析,并对部分差异表达基因进行蛋白免疫印迹法(Western blot)验证.结果:芯片筛选出在人肝癌SMMC-7721细胞中沉默MCM7基因后差异表达基因1010个,其中上调基因391个,下调基因619个.这些基因主要涉及生物大分子代谢、细胞周期调控、细胞增殖、细胞凋亡等方面,参与胞吞、肿瘤相关通路、P53信号通路、mTOR信号通路等通路的改变.Western blot对部分差异基因表达验证的结果显示CCND1、SKP2和JUP蛋白表达均下调,与芯片检测结果一致.结论:应用人基因表达谱芯片,成功筛选出沉默MCM7基因后人肝癌细胞SMMC-7721差异表达基因,为探究MCM7基因影响肝癌细胞生长提供了有效线索.

基于巴塞罗那分期与香港分期肝细胞肝癌患者不同治疗方案生存率的比较

目的比较接受巴塞罗那临床肝癌分期系统(BCLC)或香港的分期系统(HKLC)推荐治疗方案对肝细胞肝癌(HCC)患者生存率的影响。方法回顾性分析436例初治肝癌患者的临床资料,根据HKLC和BCLC进行肿瘤分期,按是否最终接受两个分期系统推荐的治疗方案分组。比较患者是否接受BCLC或HKLC分期推荐方案治疗对生存率的影响,并评估拒绝BCLC或HKLC推荐方案对预后可能产生的影响。结果接受BCLC推荐治疗方案的患者5年生存率显著高于拒绝推荐治疗方案的患者(48% vs. 30%, P<0.001)。与拒绝推荐治疗方案的患者相比,接受HKLC推荐治疗方案的患者亦有较高的5年生存率(41% vs. 29%, P<0.001)。对BCLC和HKLC交叉亚组分析,BCLC-B/HKLC-Ⅰ+Ⅱa+Ⅱb、BCLC-B/HKLC-Ⅲa+Ⅲb和BCLC-C/HKLC-Ⅲa+Ⅲb亚组中,接受手术切除的HCC患者显著高于接受TACE、索拉非尼或最佳支持治疗的患者5年生存率均较高(均P<0.05)。结论接受BCLC和HKLC分期系统推荐治疗方案可以提高HCC患者的存活率,但对于中晚期肝癌患者指导作用减弱。部分BCLC-B/HKLC-Ⅰ+Ⅱa+Ⅱb、BCLC-B/HKLC-Ⅲa+Ⅲb和BCLC-C/HKLC-Ⅲa+Ⅲb的患者通过积极的根治性治疗可以获得更好的生存。

基于肝癌临床特征构建的logistic回归模型对原发性肝癌中医证型的判断效能

目的探究肝癌患者白蛋白-胆红素(ALBI)评分、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)等临床特征与原发性肝癌中医证型的相关性,建立原发性肝癌中医辨证分型的临床判断模型。方法选取2016年11月1日-2018年10月31日在广西医科大学附属肿瘤医院收治的经病理或临床诊断为原发性肝癌的初治患者289例,并对患者进行中医辨证分型。符合正态分布的计量资料采用单因素方差分析;不符合正态分布的计量资料采用Kruskal-Wallis H检验;计数资料组间比较采用χ^2检验。将单因素分析显示存在显著差异的资料进行logistic回归分析,采用ROC曲线评价这些临床特征对肝癌中医辨证分型的判断效能。结果ALBI(F=5.487,P<0.001)、NLR(χ^2=30.146,P<0.001)、BCLC分期(χ^2=71.973,P<0.001)、Alb(χ^2=18.887,P<0.001)、TBil(χ^2=12.138,P=0.007)、ALT(χ^2=18.001,P<0.001)、AST(χ^2=12.067,P=0.007)、中性粒细胞绝对值(F=6.262,P<0.001)、淋巴细胞绝对值(F=2.934,P=0.034)、肝内原发肿瘤直径(F=4.905,P=0.002)、腹水(χ^2=9.034,P=0.021)、门静脉癌栓(χ^2=13.434,P=0.004)、肝外转移灶(χ^2=2.529,P=0.002)在肝癌各中医证型间比较差异均有统计学意义。Logistic回归分析提示:ALT和BCLC分期是湿热蕴结型的独立判断因素[比值比(OR)=1.002、0.591,95%可信区间(95%CI):1.003~1.021、0.413~0.845,P值均<0.05];ALT和BCLC分期也是肝郁脾虚型的独立判断因素(OR=0.985、3.191,95%CI:0.974~0.997、2.042~4.986,P值均<0.05);TBil、Alb、ALBI是气滞血瘀型的独立判断因素(OR=0.966、1.259、0.088,95%CI:0.937~0.995、1.064~1.490、0.013~0.607,P值均<0.05)。ROC曲线分析结果:ALT和BCLC分期判断湿热蕴结型的ROC曲线下面积为0.662(95%CI:0.605~0.717,敏感度69.4%,特异度58%),ALT截断值为36 U/L,BCLC分期截断值为C期;ALT和BCLC分期判断肝郁脾虚型的ROC曲线下面积为0.753(95%CI:0.699~0.801,敏感度72.7%,特异度68.2%),ALT截断值为64 U/L,BCLC分期截断值为B期;TBil、Alb和ALBI判断气滞血瘀型的ROC曲线下面积为0.634(95%CI:0.576~0.690,敏感度56.7%,特异度65.3%),TBil截断值为28.4μmol/L,Alb截断值为37.8 g/L,ALBI截断值为1.95。结论基于ALT、BCLC分期、TBil、Alb和ALBI构建的临床判断模型可区分肝癌中医证型的湿热蕴结型、肝郁脾虚型和气滞血瘀型,该判断模型简便、客观,值得临床关注。

岩黄连水提物对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及其可能机制

目的观察岩黄连水提物对原发性肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将含不同浓度(0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL)的岩黄连水提物100 m L作用于肝癌HepG2细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌HepG2细胞为对照组。采用CCK-8法检测肝癌HepG2细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot和荧光定量PCR分别检测NF-κBp65蛋白和m RNA的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示,24 h、48 h和72 h不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞的增殖抑制率组内差异均有统计学意义(P<0.01),且0.8 mg/mL、1.6 mg/mL干预的细胞增殖抑制率均高于0.4 mg/mL(P<0.01)。Transwell实验结果显示,不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞48 h后的细胞迁移数均低于对照组(P<0.001),且可上调NF-κBp65蛋白和mRNA的表达(P<0.001)。结论岩黄连水提物能抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力,其作用机制可能与上调NF-κBp65表达有关。

荧光标记微卫星分析广西树鼩群体的遗传多态性

选取10个微卫星位点,结合荧光标记(FAM)PCR扩增技术,运用毛细管电泳检测扩增产物,利用Microsatellite Toolkit、PopGene软件计算遗传相关指标,探讨广西树鼩群体的遗传多态性。结果发现,在10个微卫星基因座中,共检测到64个等位基因,平均等位基因数为6.4个,平均有效等位基因数为3.7892,平均观察杂合度和平均期望杂合度为0.6156和0.6963,平均多态信息含量为0.6367,其中7个是高度多态位点,3个属中度多态位点。此外,在10个微卫星基因座中,有5个位点偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。结果表明广西树鼩遗传多态性较丰富,所选微卫星位点基本可用于评估广西树鼩群体遗传多样性。

特异性下调LKB1的表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的研究特异性下调LKB1的表达对肝癌细胞系SK-hep-1迁移侵袭能力的影响。方法 Real-time PCR和Western Blot检测人肝癌细胞株和人正常肝细胞HL7702中LKB1表达情况。设计并合成LKB1特异性双链小干扰RNA(LKB1-siRNA),转染到高表达LKB1的人肝癌细胞株SK-hep-1中靶向沉默LKB1基因表达,并设置阴性对照组(NC组)。Real-time PCR和Western Blot检测LKB1基因的mRNA水平与蛋白表达水平的变化。利用CCK-8法检测肝癌细胞增殖能力。通过体外Transwell小室基质侵袭和迁移实验,观察LKB1表达沉默后对人肝癌细胞株SK-hep-1侵袭迁移能力的影响。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常人肝细胞HL7702相比,LKB1基因和蛋白在人肝癌细胞SK-hep-1中高表达(P值均<0.05)。与NC组相比,siLKB1-1处理组SK-hep-1细胞中的LKB1基因和蛋白表达均明显降低(P值均<0.05)。与NC组相比,siLKB1-1转染的SK-hep-1细胞增殖速度明显加快、侵袭和迁移能力明显增强(1.393±0.022 vs 1.128±0.032、147±19 vs 83±21、113±13 vs 75±17;t值分别为15.313、14.879、8.791;P值均<0.001)。结论 LKB1有可能参与抑制肝癌增殖、侵袭迁移的过程并影响肝癌的预后。

健脾消积方水提物对人肝癌SMMC7721细胞自噬的调控机制

目的探讨健脾消积方水提物抗肝癌机制以及对细胞自噬流和自噬相关蛋白的影响。方法提取健脾消积方水提物,作用于SMMC7721细胞,使用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞学检测细胞的凋亡率,使用Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达,并监测自噬体的形成及自噬体与溶酶体的融合过程。计量资料两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果CCK8检测显示,细胞加药后24 h、48 h、72 h、96 h,增殖均受到了明显抑制,与对照组相比差异均有统计学意义(t值分别为28.458、81.093、85.328、100.158,P值均<0.001)。流式细胞学凋亡检测结果显示,加药组肝癌SMMC7721细胞凋亡较对照组显著增加(t=-42.629,P<0.001)。Western Blot结果显示,与对照组相比,加药组Beclin1蛋白表达下调,自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达上调,P62表达上调。加药组细胞的自噬体向自噬溶酶体的流动受到了阻滞,与对照组相比,差异有统计学意义(F=31.155,P<0.001)。结论健脾消积方水提物能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,促进细胞凋亡;同时能上调Beclin1的表达,下调LC3和P62的表达并阻滞自噬流的形成。

4种不同浓度的水凝胶在小鼠脑、肝、肾组织透明化中的应用效果比较

目的比较4种不同浓度水凝胶在小鼠脑、肝、肾组织透明化中的应用效果。方法根据丙烯酰胺(A)、甲叉双丙烯酰胺(B)、多聚甲醛(P)的终浓度比,制备A4B4P4(A∶B∶P=4%∶0. 05%∶4%)、A2B2P4(A∶B∶P=2%∶0. 025%∶4%)、A1B1P4(A∶B∶P=1%∶0. 0125%∶4%)、A4B4P0(A∶B∶P=4%∶0. 05%∶0)水凝胶。选取8只昆明小鼠随机分为4组,每组2只,分别采用A4B4P4、A4B4P0、A2B2P4、A1B1P4水凝胶进行灌注,然后行组织固定及透明化处理。计算经4种水凝胶处理后小鼠脑、肝、肾组织的相对透明度及蛋白损失量。结果 A2B2P4组、A1B1P4组小鼠脑组织相对透明度均高于A4B4P4、A4B4P0组(均P <0. 05); A1B1P4组小鼠肝组织的相对透明度高于其他3组(均P <0. 05); A2B2P4、A1B1P4组小鼠肾组织的相对透明度均高于A4B4P4、A4B4P0组(均P <0. 05)。A4B4P0组小鼠脑、肝、肾组织蛋白损失量均大于其他3组(均P <0. 05),A2B2P4组小鼠肝、肾组织蛋白损失量均低于A1B1P4组(均P <0. 05)。结论 A2B2P4、A1B1P4水凝胶在小鼠脑组织透明化中的应用效果最佳,A1B1P4、A2B2P4水凝胶分别在小鼠肝组织、肾组织透明化中的应用效果最佳。

通过新生树鼩乙型肝炎病毒感染模型动态观察宿主体内TLR-4和IL-6的表达

目的通过观察接种乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)后新生树鼩体内细胞因子TLR-4和IL-6的变化,初步探讨HBV感染过程中宿主体内的免疫反应。方法将31只树鼩幼崽分为实验组(n=25)和对照组(n=6)。实验组接种人HBV,接种后第8周至第24周定期检测树鼩外周血中乙肝表面抗原(HBsAg)和HBV-DNA,根据检测结果将实验组分为慢性感染组7只(血清HBsAg或HBV-DNA持续阳性时间达到24周)和疑似慢性感染组5只(血清HBsAg或HBV-DNA不连续出现2次或2次以上阳性),其余13只Hbs Ag和HBV-DNA均阴性,不纳入研究;对照组不做任何处理。采用双抗体夹心法检测树鼩外周血TLR-4、IL-6蛋白表达水平,RT-PCR法检测树鼩肝组织中TLR-4、IL-6 mRNA的表达水平。结果观察期间内,慢性感染组和疑似慢性感染组外周血TLR-4与IL-6蛋白的表达均高于对照组(P<0.05);肝组织中IL-6的mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);慢性感染组TLR-4 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05)。结论 TLR-4、IL-6在树鼩HBV感染模型中表达升高,可能在HBV感染过程中起重要作用。