机械敏感性离子通道Piezo1介导高静水压诱导大鼠冠脉平滑肌细胞表型改变

目的探究Piezo1在高静水压诱导的冠脉平滑肌细胞(CASMCs)表型改变中的作用机制。方法分别于0、120和180 mmHg压力下干预原代Wistar大鼠CASMCs 24 h,Western blot检测Piezo1、收缩表型相关蛋白Cav1.2、SM-MHC、α-SMA和合成表型相关蛋白OPN、MMP-2、Col1a1的表达,激光共聚焦检测压力对Piezo1介导的钙离子内流的影响;分别用Piezo1激动剂Yoda1、抑制剂GsMTx4处理CASMCs以及siRNA敲低Piezo1,Western blot检测收缩表型及合成表型相关蛋白的表达。结果与0 mmHg相比,120和180 mmHg干预CASMCs后,Piezo1、OPN、MMP-2、Col1a1表达增加,Cav1.2、SM-MHC、α-SMA表达减少。180 mmHg高压干预后,Piezo1介导的钙离子内流强于常压对照组,但敲低Piezo1后有所下降。在常压下,用Yoda1处理CASMCs后,收缩表型相关蛋白表达减少,合成表型相关蛋白表达增加。与对照组相比,180 mmHg下分别用GsMTx4抑制和siRNA敲低Piezo1后,收缩表型相关蛋白表达增加,合成表型相关蛋白表达减少。结论Piezo1在高静水压诱导CASMCs由收缩表型向合成表型转变中起促进作用。

光响应茶皂苷元纳米囊的制备及其抗耐药菌活性研究

为了提高茶皂苷元的稳定性和抗耐药菌活性,采用复乳法制备光响应茶皂苷元纳米囊。以大豆卵磷脂、胆固醇和脱镁叶绿酸(质量比为50:10:1)为囊材,制得茶皂苷元纳米囊的包封率、载药量、平均粒径、Zeta电位分别为:87.3%±4.6%、13.5%±1.2%、(155±5)nm、(-43.3±2.0)m V。该纳米囊在无光照下具有缓释作用,而在650 nm光照下可加速释放。对耐药金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的50%抑菌浓度分别是52.5和85.4μg?m L-1,而与庆大霉素(10μg?m L-1)联合用药时,降至22.6和45.7μg?m L-1,表明它可降低并逆转细菌对庆大霉素的耐药性。分子对接显示茶皂苷元和细菌的甘露醇脱氢酶和黏肽合成酶有显著相互作用,与其抗耐药菌机制相关。

钙感受器STIM1在小鼠主动脉平滑肌收缩反应中的作用研究

目的探讨钙感受器STIM1在小鼠主动脉平滑肌收缩反应中的作用。方法采用Cre-lox重组技术制备平滑肌特异性STIM1敲除小鼠(sm-STIM1-KO);采用离体血管张力测定方法,测定sm-STIM1-KO小鼠主动脉对不同血管收缩剂反应,并给予不同的钙通道阻断剂,观察血管收缩变化。结果sm-STIM1-KO小鼠制备成功。sm-STIM1-KO小鼠钙库操纵的钙通道(SOCC)介导的血管收缩消失;与野生型相比,sm-STIM1-KO小鼠对Phe、5-HT和U46619总的收缩反应无明显变化,但在有钙和无钙的K-H溶液中,经硝苯地平孵育后,两组血管收缩均被抑制,且sm-STIM1-KO小鼠收缩明显低于野生型小鼠(P<0.01);在含硝苯地平的高钾溶液中,Phe引起的快相收缩没有变化,慢相收缩下降(P<0.01);sm-STIM1-KO小鼠肌浆网钙释放介导的血管收缩达峰速度和下降速度明显加快(P<0.05)。结论STIM1是SOCC介导的血管收缩的必须组成成分,且参与肌浆网钙释放介导的血管收缩反应。

钙感受器STIM1参与主动脉平滑肌细胞衰老的作用研究

目的:探讨钙感受器基质相互作用分子1(STIM1)参与主动脉平滑肌细胞衰老的作用研究。方法:采用过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导人主动脉平滑肌细胞建立细胞衰老模型,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老变化;利用Cre-loxP基因重组技术,制备平滑肌特异性STIM1基因敲除(sm-STIM1-KO)小鼠;体内及体外干预STIM1表达,观察主动脉平滑肌细胞衰老变化。结果:在200μmol/L H_(2)O_(2)诱导的主动脉平滑肌细胞衰老模型中,SA-β-Gal染色细胞阳性率显著升高,同时钙库操纵性钙通道相关蛋白STIM1和ORAI1的表达显著下调(P<0.05)。另外,成功构建了sm-STIM1-KO小鼠,该小鼠主动脉的衰老相关蛋白p53、p21及p16表达上调(P<0.05)。用STIM1 siRNA敲减主动脉平滑肌细胞STIM1,衰老相关蛋白p21和p16显著上调(P<0.05)。在衰老细胞模型中,用腺病毒过表达STIM1则衰老相关蛋白p21和p16显著下调(P<0.01)。结论:钙感受器STIM1下调可加速血管平滑肌细胞的衰老,并参与血管老化的进展。

1型糖尿病小鼠心房肌细胞电重塑及AGE对其的影响

目的探讨1型糖尿病小鼠及AGE参与心房肌细胞电重塑机制研究。方法STZ腹腔注射小鼠,诱导1型糖尿病模型;全细胞膜片钳技术检测糖尿病小鼠心房肌细胞动作电位时程、I Ca,L、I to及I kur电流变化;Western blot检测心房肌组织AGE、RAGE及通道蛋白表达水平;AGE/RAGE处理HL-1细胞,检测离子通道蛋白的表达。结果与对照组相比,糖尿病小鼠随机血糖水平明显上升,心房肌细胞动作电位时程明显延长,I Ca,L、I to、I kur电流密度及通道蛋白Cav1.2、Kv4.3、Kv1.5表达均明显降低,AGE、RAGE蛋白水平增加;AGE诱导HL-1细胞离子通道蛋白明显下调,Anti-RAGE预处理可逆转其作用。结论1型糖尿病心房肌细胞动作电位明显延长,I Ca,L、I to、I kur电流及其通道蛋白表达降低;AGE参与HL-1心房肌细胞电重塑。

钙调控参与糖尿病小鼠冠状动脉平滑肌收缩变化的机制

目的探讨钙调控参与糖尿病小鼠冠状动脉收缩反应性变化的机制。方法C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型。通过小血管张力技术,测定收缩剂诱导糖尿病小鼠冠状动脉的张力变化及不同阻断剂对其的影响。结果冠脉的平滑肌收缩主要由经L-型钙通道内流和肌浆网钙释放的钙离子介导,SOC通道不参与其收缩。5-HT和U46619呈浓度依赖性诱导冠脉收缩,与对照组相比,模型组明显减弱(P<0.01);硝苯地平孵育后,5-HT和U46619诱导冠脉的收缩反应均明显减小(P<0.01),且对模型组的抑制幅度明显低于对照组(P<0.01)。在无Ca^2+K-H溶液状态下,硝苯地平孵育后,与对照组相比,模型组对不同收缩剂引发的收缩反应性明显减弱(P<0.01)。高钾刺激模型组冠脉引起的收缩反应明显低于对照组(P<0.01)。结论糖尿病小鼠冠状动脉对血管收缩剂的反应性明显减弱,与L-型钙通道和肌浆网钙释放功能下调有关。

Orai1通道在高血压大鼠心房纤维化中的作用机制研究

目的:明确Orai1通道对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房纤维化及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法:采用45~46周龄的Wistar大鼠(n=16)及SHR(n=13)分别作为对照组和实验组,快速起搏心房观察两组大鼠AF的可诱发性。HE和Masson染色观察两组大鼠心房组织的纤维化程度。Western blot检测两组大鼠心房组织纤维化相关的Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Col3)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9,以及钙信号通路相关蛋白Orai1、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T cells 3,NFAT3)的表达。在原代培养的乳大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)上,利用腺病毒转染使其过表达Orai1后,采用Western blot检测细胞中纤维化相关因子的表达变化,并观察CaN抑制剂环孢素A(cyclosporine A,CsA)对其表达的影响;用Fluo4 AM荧光探针法观察过表达Orai1的CFs中钙浓度的变化。结果:与Wistar大鼠相比,SHR的AF诱发率显著增加(P<0.05),心房组织中纤维化相关因子MMP2、MMP9、Col1和Col3蛋白表达显著上调(P<0.05),Orai1、CaN和NFAT3亦显著上调(P<0.05)。过表达Orai1可促进CFs中纤维化相关因子MMP2、MMP9、Col1和Col3的表达(P<0.05),同时,Orai1通道介导的钙离子内流明显增加(P<0.05);CsA可明显逆转CFs中Orai1过表达的效应(P<0.05)。结论:Orai1通道上调可激活Ca^(2+)/CaN/NFAT3通路,促进CFs纤维化相关因子分泌;高血压大鼠心房纤维化增加可能与Orai1通道上调有关。

钙非依赖性磷脂酶A_(2)在肾内动脉平滑肌收缩反应中的作用

目的探讨钙非依赖性磷脂酶A_(2)(calcium-independent phospholipase A_(2),iPLA_(2))在肾内动脉平滑肌收缩钙调控中的作用。方法利用离体小动脉张力测定方法,研究iPLA_(2)特异性抑制剂溴烯醇内酯(bromoenol lactone,BEL)对不同钙通道诱导小鼠肾内动脉张力影响,同时利用激光共聚焦测钙技术,探索BEL对花生四烯酸调节钙(arachidonate-regulated Ca^(2+),ARC)通道介导细胞内钙离子内流的影响。结果BEL可抑制血管收缩剂苯肾上腺素和5-羟色胺诱导的肾内动脉浓度依赖性收缩反应(P<0.01);BEL对CaCl_(2)诱导的收缩曲线也有抑制作用(P<0.05);在硝苯地平孵育后的无钙K-H溶液中,BEL对肌浆网钙释放和CaCl_(2)诱导SOC通道钙内流引起的肾内动脉血管收缩均有抑制作用(P<0.05);BEL可明显抑制硝苯地平孵育后人主动脉平滑肌细胞株的ARC通道介导的外钙内流(P<0.01)。结论iPLA_(2)通过调节L型钙通道、肌浆网钙释放、SOC通道及ARC通道功能介导肾内动脉血管的收缩反应。

磷酸铁锂废料中FePO_(4)·2H_(2)O提取及其杂质形成机理

采用化学共沉淀方法从磷酸铁锂废料中提取FePO_(4)·2H_(2)O,并研究了回收过程中杂质形成的机理。在热力学计算基础上绘制了298和363 K时Fe-P-Li-H_(2)O体系的电势(φ)-pH图,结果表明当pH≤5.0时,Fe(OH)_(3)相可以自发地转成FePO_(4)·2H_(2)O相,从而得到高纯的FePO_(4)·2H_(2)O。但实验结果发现当溶液中铁、磷的物质的量之比(nFe∶nP)为1∶1,合成pH为1.5~2.2时得到的FePO_(4)·2H_(2)O中存在Fe(OH)_(3)杂质,这是因为在共沉淀过程中少量Fe^(3+)以Fe(OH)_(3)快速沉淀,而陈化时Fe(OH)_(3)相转化速率慢,因此FePO_(4)·2H_(2)O中含有Fe(OH)_(3)杂相,而在后续的煅烧过程中Fe(OH)_(3)会与FePO_(4)·2H_(2)O进一步反应生成Fe_(3)PO_(7)。FePO_(4)·2H_(2)O中Fe(OH)_(3)的含量随合成的pH值和温度升高而快速增加。而nFe∶nP=1∶2时,溶液中部分H_(3)PO_(4)与NaOH反应生成NaH_(2)PO_(4),煅烧时NaH_(2)PO_(4)与FePO_(4)·2H_(2)O反应生成Na FeP_(2)O_(7)杂相,进一步降低磷酸铁的纯度。当溶液中nFe∶nP=1∶1,共沉淀温度为333 K,反应终点pH值为1.5时,可以制备出纯度为99.97%的FePO_(4)·2H_(2)O。用此FePO_(4)·2H_(2)O合成的LiFePO_(4)正极材料,其放电比容量为154.1 mAh·g^(-1),以0.2C(1C=180 mA·g^(-1))充放电循环100周后容量保持率为96.79%,具有优异的电化学性能,可用于制备磷酸铁锂电池。

建筑节能设计中的围护结构影响因素探讨

在现代建筑设计中,节能成为发展的趋势,影响建筑节能设计的因素是多方面的,本文阐述了围护结构对建筑节能设计的影响因素。