茵陈蒿汤对自身免疫性肝炎小鼠肝细胞铁死亡的抑制作用及其机制分析

目的 探讨茵陈蒿汤对自身免疫性肝炎小鼠肝细胞铁死亡的抑制作用及机制。方法 选取SPF级雌性C57BL/6小鼠18只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、治疗组,每组6只。模型组和治疗组采用刀豆蛋白A(Con A)尾静脉注射制备自身免疫性肝炎小鼠模型,正常组注射生理盐水。治疗组于造模前14天,给予茵陈蒿汤(4.68 g生药/kg)预防性灌胃治疗,末次灌胃给药后注射Con A。分别检测ALT、AST、IFN-γ、TNF-α、铁离子、GSH、ROS、ATP、MDA水平,计算肝脏指数、脾脏指数,并观察GPX4、SLC7A11的表达;比较各组小鼠肝脏病理组织变化。正态分布的计量资料3组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与正常组比较,模型组肝脏指数、脾脏指数、ALT、AST、IFN-γ、TNF-α、铁离子、ROS、MDA水平均升高(P值均<0.05),GSH、ATP含量及GPX4、SLC7A11蛋白表达水平降低(P值均<0.05)。与模型组比较,治疗组肝脏指数、脾脏指数、ALT、AST、IFN-γ、TNF-α、铁离子、ROS、MDA水平均降低(P值均<0.05),GSH、ATP含量及GPX4、SLC7A11蛋白表达水平升高(P值均<0.01)。HE染色结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肝脏出现大面积肝细胞变性、坏死、门管区炎细胞聚集,治疗组处理的小鼠肝脏坏死和炎性浸润程度较模型组有所减轻。结论 Con A诱导肝组织损伤可能与铁死亡有关。茵陈蒿汤可以增加SLC7A11/GPX4蛋白的表达水平进而抵抗Con A诱导的肝细胞铁死亡。

环状RNA参与自身免疫性肝炎小鼠肝损伤的相关性分析

背景:自身免疫性肝炎的发病机制尚未明确阐明,环状RNA(CircRNAs)是RNA领域的一个研究热点,参与了许多自身免疫性疾病的发病,但CircRNAs在自身免疫性肝炎中的作用尚不清楚。目的:探讨CircRNAs与刀豆蛋白A诱导自身免疫性肝炎小鼠肝损伤的关系。方法:对前期微阵列技术筛选出差异表达的CircRNAs谱进行生物信息学分析,包括基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,探讨上述差异表达基因潜在的生物学功能。采用随机数字表法将12只C57BL/6小鼠分为正常组和模型组,每组6只,模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A建立自身免疫性肝炎模型,造模12 h后处死小鼠,提取小鼠肝脏及外周血,利用qRT-PCR技术验证部分CircRNAs的表达水平,通过比色法检测小鼠血清中肝损伤指标谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平,通过微孔板法检测小鼠肝脏中氧化应激指标丙二醛和NO的水平,并将肝损伤指标和氧化应激水平的相关性进行分析。结果与结论:①GO分析结果显示,表达上调CircRNAs的靶基因参与的生物过程主要为“SNARE复合装配的调节”(P=0.004)等,分子功能主要为“金属离子结合”(P=0.00029)等,主要富集在“CORVET复合体”(P=0.075)等细胞组分;表达下调circRNAs的靶基因参与的生物过程主要为“胰液分泌的负调节”(P=0.00042)等,分子功能主要为“转录激活因子活性”(P=0.025)等,主要富集在“膜外组分”(P=0.006)等细胞组分;②KEGG富集分析结果显示,表达上调CircRNAs的靶基因主要富集于“碱基切除修复”(P=0.026)等信号通路;③与正常组比较,模型组小鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶及肝组织中丙二醛和NO的水平升高(P<0.01),mmu-circ-0001520和mmu-circ-0001577的表达升高(P<0.05);④Spearman相关分析显示,mmu-circ-0001520和mmu-circ-0001577的表达与谷丙转氨酶、谷草转氨酶、丙二醛、NO存在正相关关系;⑤结果显示,CircRNAs的差异表达与自身免疫性肝炎小鼠肝损伤过程具有相关性,其中mmu-circ-0001520和mmu-circ-0001577有望成为自身免疫性肝炎诊断的生物标志物及治疗靶点。