检测磷脂酶A_2的气相色谱法的建立与应用

磷脂酶A2(Phospholipase A2,PLA2),即磷脂2酰基水解酶(EC 3.1.1.4),广泛存在于生物体内,是磷脂分解代谢中起重要作用的酶.它催化甘油磷脂C2位脂肪酸的水解反应,生成溶血磷脂和脂肪酸.PLA2具有重要的生理意义,在代谢过程中能够消化磷脂分子,而且在激素的信号传递以及发炎过程等方面都起重要作用.PLA2也具有广泛的应用价值,可以用于生物膜构造和机能的研究、溶血磷脂的制造、油脂精炼、疾病治疗、饲料添加剂制造等方面[1,2]

紫红链霉菌2917磷脂酶A_2基因的克隆及序列分析

用探针从紫红链霉菌 2 917基因组文库中克隆出磷脂酶A2 基因 ,经双向测序 ,确定了其基因的全序列 ,并由此推导出其氨基酸序列 将此序列与其他来源的磷脂酶A2 基因序列进行了比较研究 ,结果显示 ,与天蓝色链霉菌A3(2 )中磷脂酶A2 的同源性为 98% ;与蛇毒的磷脂酶A2 的同源性小于 10 % ,但有类似的质子传递系统、Ca2 + 结合环以及疏水通道等结构 这个基因的克隆为磷脂酶A2 结构与功能的研究提供更多的信息 ,也为利用重组微生物生产磷脂酶A2

利用磷脂酶A_2提高动物对饲料的利用率

介绍了动物饲料中磷脂的消化过程、磷脂酶A2 在磷脂消化过程中所起的作用以及磷脂酶A2 作为饲料添加剂的应用前景。

大豆卵磷脂的酶法改性研究

利用实验室自制的液态磷脂酶A2,水解大豆卵磷脂得到溶血卵磷脂。设计了正交实验研究该磷脂酶A2在水浴中静止水解大豆卵磷脂的最佳工艺条件:底物浓度为4%,反应温度30℃,起始pH值7.5,Ca2+浓度0.10%,反应时间13 h。在最佳条件下,得到的产物经酸碱滴定法及HPLC检测,大豆卵磷脂的转化率为86.30%。

猪脂肪沉积相关的生化特征研究

以遗传瘦肉型的斯格猪和长白猪以及遗传脂肪型的通城猪和太湖猪为动物样本 ,分析了血清中激素敏感脂酶 ,肌肉组织中氨基酸组成、含量和克分子比 ,分离纯化了肌细胞和脂肪细胞质和膜 ,并对其膜蛋白进行了SDS PAGE比较分析。结果表明 ,脂肪型的通城猪血中激素敏感脂酶活性比瘦肉型的长白猪高近 3倍 ,2猪种中雌雄差异不显著。脂肪型的通城猪与太湖猪肌细胞蛋白质中的氨基酸组成及含量十分相似 ,瘦肉型的斯格和长白猪的氨基酸含量却显著地高于脂肪型的通城和太湖猪。氨基酸组分中 ,瘦肉型猪的 3种碱性氨基酸 (Lys、Arg和His)、2种典型的疏水氨基酸 (Leu和Ile)、易形成疏水核的苯丙氨酸以及形成二硫键的半胱氨酸均显著的高于脂肪型 ,这与瘦肉型猪蛋白质的溶解性能较差相关。蛋白质的SDS PAGE分析发现 ,脂肪型猪肌细胞质中存在一种分子量约 4 4 7kDa ,与脂肪沉积相关的蛋白质。脂肪细胞膜中的 94kDa蛋白也显示与脂肪沉积的遗传特征相关 ,另外 ,脂肪型的通城猪性成熟前后肌细胞膜上存在蛋白质组分差异。

细胞表面展示有机磷水解酶的恶臭假单胞菌工程菌的构建及全细胞酶活性分析

利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacteriumsp.)的有机磷水解酶基因opd构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体pYMBP,然后导入恶臭假单胞菌(P.putida)野生型菌株AB92019,获得了能在其细胞表面展示有机磷水解酶并具有全细胞酶催化活性的重组工程菌MMBL-opd。SDS-PAGE结果表明,融合基因能表达产生80 ku的蛋白质。重组菌MMBL-opd在无抗性LB固体培养基上能稳定生长,所携带的外源质粒的稳定性达到100%;在添加100μmol/L Co2+培养基上28℃培养48 h,表面展示的有机磷水解酶具有最高全细胞酶活性,为0.036 U/mg。用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低92%。重组菌在PBS缓冲液中于4℃条件下保存30 d,仍能保持93%的全细胞酶活。

磷脂酶A_2用于菜籽油脱胶

利用磷脂酶A2对菜籽油进行脱胶工艺研究,采用正交实验对磷脂酶脱胶的工艺条件进行了优化。结果表明,酶用量90μL/kg,pH6.0,含水量2%,反应温度40℃,反应时间3 h,最终含磷量小于10 mg/kg,达到了理想的脱胶效果。

卵磷脂的性质及其应用

综述了卵磷脂的组成和性质,及在医药、化妆品、食品和饲料工业等方面的应用。

大豆粉末磷脂的酶解工艺及产物性能研究

研究了放线菌型磷脂酶A2在水相中酶解大豆粉末磷脂的工艺条件,确定了最佳工艺组合为底物浓度10%,Ca2+浓度10mmol,温度40℃,初始pH值7.5,水解时间19h,磷脂转化率达43.3%;同时从宏观和微观两角度对酶解磷脂的乳化性能进行了研究,结果表明:酶解磷脂的乳化稳定性约为粉末磷脂的3倍,相同乳化能力下用量可减少50%,达到氧化平衡时的过氧化值为粉末磷脂的41.0%。

米糠油酶法脱胶的研究

利用自制的磷脂酶A2(PLA2)对米糠毛油进行脱胶工艺研究,采用单因素实验及正交实验对PLA2脱胶的工艺条件进行了优化。结果表明,加入2.5 mol/L柠檬酸0.066%处理米糠毛油30min后,再加入5 mol/L的NaOH 0.07%3、%蒸馏水0、.015%PLA2,高速搅拌后,将反应体系静置于45℃下反应2 h,最终脱胶后米糠油中磷含量为9.15 mg/kg,对物理精炼米糠油的顺利进行提供了保障。

磷脂酶A_2水解菜籽油脚的研究

油脚中含有丰富的磷脂,磷脂的酶改性产物溶血磷脂有极广的应用。以菜籽油脚为底物,以实验室自制的磷脂酶A2为水解酶,采用水相反应方式,通过单因素实验和多因素正交实验,分别对底物用量、Ca2+添加量、反应温度、起始pH等因素进行了系统的研究。结果表明,菜籽油脚酶解的最佳条件为:底物浓度20%,钙离子浓度0.3%,温度50℃,起始pH8.0。在最佳条件下,FFA生成量可达到172.3μmol/g。

食用菌4个主产区常见农药的残留量分析

从湖北、浙江、河南和福建4省的平菇、香菇、双孢蘑菇和木耳上共采集33个子实体样品,进行了23种农药残留检测。分析结果表明,3.03%样品农药残留量超过欧盟规定标准,27.27%样品农药残留量超过日本规定标准,但没有样品超过我国现行标准。从样品中所检出农药主要是甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、乐果、甲拌磷、甲基对硫磷、马拉硫磷和倍硫磷7种农药。在检测的农药中,倍硫磷在双孢蘑菇、平菇和木耳的7个样品中被检出,三氟氯氰菊酯在平菇6个样品中均被检出,乐果在双孢蘑菇10个样品中均被检出,甲胺磷、久效磷和甲基对硫磷等高毒农药在双孢蘑菇个别样品中被检出,需要引起高度重视。

溶血磷脂的乳化性能研究

研究了溶血脂的乳化性能,研究表明:溶血磷脂乳化油脂的能力是普通磷脂的5倍左右;随磷脂浓度的升高,溶血磷脂的乳化稳定性大幅度提高;普通磷脂和溶血磷脂在酸性条件下的乳化稳定性均较差,在碱性条件下溶血磷脂的乳化稳定性更好;溶血磷脂在高温和低温下的乳化稳定性都大于普通磷脂。

紫红链霉菌2917磷脂酶A_2在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达与复性

通过化学合成紫红链霉菌2917分泌型磷脂酶A2全基因序列后插入融合表达载体pGEX-6P-1中,经酶切和测序鉴定无误后转化E.coli Rosetta(DE3)菌株,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得目的蛋白后对包涵体形式的重组蛋白进行稀释复性,同时对复性后的蛋白进行酶学研究.结果表明磷脂酶A2基因在大肠杆菌中获得了高效表达(占总细胞蛋白30%),复性后酶液酶活性为0.15U/mL。这将为包涵体的复性研究以及磷脂酶A2结构和功能的研究打下良好的基础。

消除猪喘平水针剂中脂肪样晕圈的方法

为消除猪喘平水针剂中脂肪样晕圈悬浮物，对其含卡那霉素硫酸盐母液进行了三种处理，其中仅添加０．１５％左右的ＥＤＴＡ－２Ｎａ（乙二胺四醋酸二钠）即可完全消除晕圈现象，并对水针剂的其它感官指标有一定的改良作用。经生产运行表明这是一种稳产措施。

CCD检测和图像处理在分子生物学中的应用

本文论述了用ＣＣＤ图像传感器实现核酸电泳凝胶图像的实时检测及图像处理与分析的系统。该系统不仅可以同时检出核酸的分子量和核酸的浓度等往往需要用不同的方法和多种仪器分析和计算才能得到的参数，还提高了测量的精度和实验工作效率，使传统凝胶图像的记录与分析智能化。

虚拟金融对实体经济影响微探

在如今的市场发展体制下,虚拟金融在实体经济的发展乃至整体经济的增长中都扮演着至关重要的角色,但也不能忽视虚拟金融的负面影响。本文叙述了虚拟金融和实体经济的界定,分析了虚拟金融对实体经济发展的正负面影响,提出使虚拟金融和实体经济协调发展的建议措施。

痢菌净注射液配制方法初探

痢菌净注射液配制方法初探郝勃１王平１李维琳１魏四洪２１华中农业大学生命科学技术学院武汉４３００７０；２华中农业大学兽药厂痢菌净注射液为乙酰甲喹灭菌水溶液，对猪密螺旋体型痢疾有独特的疗效［１］，对牛、猪细菌性肠炎的疗效也较好［２］，故此类兽药在市场上一...

秸秆垫料的猪粪异位发酵床微生物群落分析

为了解秸秆垫料对生猪异位发酵床发酵过程的影响,明确不同垫料的微生物群落演替,分别以油菜秸秆+木屑+砻糠为Y组、水稻秸秆+木屑+砻糠为S组及木屑+砻糠为CK组,以对不同垫料组合进行异位发酵床试验,收集不同发酵阶段的垫料样品,进行理化指标的测定和Illumina高通量测序。结果显示,CK组的微生物多样性要明显低于S组和Y组。发酵进程中不同垫料的微生物演替趋势相似,变形菌门的相对丰度都呈下降趋势,但CK组降低了75%,S组和Y组则分别降低了38.0%和23.2%。不同处理发酵床嗜温期主要微生物有芽孢杆菌属、乳杆菌属、鞘铵醇杆菌属、假单胞菌属等,但微生物的丰度存在差异。同时,功能基因预测显示脂类、氨基酸和碳水化合物代谢相关基因拷贝数Y组最高。不同处理在发酵进程中的理化指标变化相似,但Y组垫料的升温速率更快且整体温度更高,同时可溶性氮的含量更高。研究表明,秸秆垫料组的微生物丰富度和多样性都要高于对照组,同时油菜秸秆组的微生物有机质相关代谢更加活跃,更有利于发酵床的高温运行和有机肥形成。