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马铃薯StCYP85A3促进萌芽及根系伸长的功能解析
1
作者
刘洁
蔡诚诚
+6 位作者
刘石锋
邓孟胜
王雪枫
温和
李罗品
严奉君
王西瑶
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期2462-2471,共10页
油菜素内酯(BR)是一类植物甾醇类激素,对植物生长发育及胁迫应答具有显著的调控作用,马铃薯中StCYP85A3作为BR合成酶的编码基因,功能仍待进一步探究。本研究从‘川芋10号’马铃薯中克隆出该基因,生物信息学分析表明该蛋白具有催化BR合...
油菜素内酯(BR)是一类植物甾醇类激素,对植物生长发育及胁迫应答具有显著的调控作用,马铃薯中StCYP85A3作为BR合成酶的编码基因,功能仍待进一步探究。本研究从‘川芋10号’马铃薯中克隆出该基因,生物信息学分析表明该蛋白具有催化BR合成的典型亲氧结合域,属于CYP85As家族成员。通过组织表达分析发现该基因在块茎芽眼及根中表达量最高,且芽眼中的表达量随着储藏时间的延长而增加,在块茎芽眼休眠解除时表达迅速升高。同时发现外源BR可诱导马铃薯芽眼及根中StCYP85A3表达量升高,从而显著促进了种薯萌芽及幼苗根的伸长。通过在拟南芥野生型及cyp85a2突变体中过表达StCYP85A3发现,过表达株系种子萌发及根系伸长都早于野生型,同时回补株系弥补了突变体种子萌发、植株根系生长迟缓的缺陷。此外,外源BR对过表达株系种子萌发、根系伸长无显著促进作用,但显著促进了野生型、突变体及回补株系种子萌发、根系伸长。上述马铃薯及拟南芥试验结果表明, StCYP85A3具有促进萌芽及根系伸长的功能。
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关键词
马铃薯
StCYP85A3
BR合成酶
根系
萌芽
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职称材料
马铃薯蔗糖磷酸合成酶StSPS1的原核表达及抗体制备
2
作者
蔡诚诚
李罗品
+4 位作者
温和
刘石锋
王强
李立芹
王西瑶
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2023年第6期11-17,共7页
为了对马铃薯蔗糖磷酸合成酶(SPS)编码蛋白StSPS1进行原核表达及多克隆抗体制备。从四倍体马铃薯品种川芋10号的块茎中克隆出了StSPS1基因,该基因编码区全长为3165 bp,编码蛋白的长度为1055 aa。随后基于构建的His标签融合表达载体PET30...
为了对马铃薯蔗糖磷酸合成酶(SPS)编码蛋白StSPS1进行原核表达及多克隆抗体制备。从四倍体马铃薯品种川芋10号的块茎中克隆出了StSPS1基因,该基因编码区全长为3165 bp,编码蛋白的长度为1055 aa。随后基于构建的His标签融合表达载体PET30a-StSPS1,进行了StSPS1蛋白的诱导、变性、纯化、复性及兔免疫试验。结果发现,StSPS1蛋白分子量约为119.62 ku,在可溶性上清中的表达极少,主要在不溶的沉淀中表达,最佳的诱导条件为37℃下用0.5或1.0 mmol/L的IPTG诱导4 h。由于StSPS1为包涵体蛋白,故对其进行包涵体变性处理,并利用His标签纯化出了与目的条带大小相符的蛋白,同时通过His抗体进行了蛋白质免疫印迹(WB)试验,发现在119.62 ku处检测到目标条带,说明StSPS1包涵体蛋白纯化成功。最后,通过将透析复性后的StSPS1蛋白注射进兔子皮下组织中,成功免疫出2个StSPS1的抗体,经过WB鉴定发现2个抗体均能在抗原和川芋10号叶片的总蛋白中杂出目标条带。综上,对马铃薯StSPS1蛋白进行了诱导及纯化,并成功制备了StSPS1蛋白的兔多克隆抗体。
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关键词
马铃薯
蔗糖磷酸合成酶
StSPS1
原核表达
多克隆抗体制备
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职称材料
题名
马铃薯StCYP85A3促进萌芽及根系伸长的功能解析
1
作者
刘洁
蔡诚诚
刘石锋
邓孟胜
王雪枫
温和
李罗品
严奉君
王西瑶
机构
四川农业大学西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室
四川农业大学农学院马铃薯研究与开发中心
四川轻化工大学生物工程学院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期2462-2471,共10页
基金
马铃薯种薯活力调控的分子机制与应用研究项目(SKL-ZY202203)
国家现代农业技术体系四川薯类创新团队项目(sccxtd-2023-09)资助。
文摘
油菜素内酯(BR)是一类植物甾醇类激素,对植物生长发育及胁迫应答具有显著的调控作用,马铃薯中StCYP85A3作为BR合成酶的编码基因,功能仍待进一步探究。本研究从‘川芋10号’马铃薯中克隆出该基因,生物信息学分析表明该蛋白具有催化BR合成的典型亲氧结合域,属于CYP85As家族成员。通过组织表达分析发现该基因在块茎芽眼及根中表达量最高,且芽眼中的表达量随着储藏时间的延长而增加,在块茎芽眼休眠解除时表达迅速升高。同时发现外源BR可诱导马铃薯芽眼及根中StCYP85A3表达量升高,从而显著促进了种薯萌芽及幼苗根的伸长。通过在拟南芥野生型及cyp85a2突变体中过表达StCYP85A3发现,过表达株系种子萌发及根系伸长都早于野生型,同时回补株系弥补了突变体种子萌发、植株根系生长迟缓的缺陷。此外,外源BR对过表达株系种子萌发、根系伸长无显著促进作用,但显著促进了野生型、突变体及回补株系种子萌发、根系伸长。上述马铃薯及拟南芥试验结果表明, StCYP85A3具有促进萌芽及根系伸长的功能。
关键词
马铃薯
StCYP85A3
BR合成酶
根系
萌芽
Keywords
potato
StCYP85A3
BR synthetase
root system
germination
分类号
S532 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
马铃薯蔗糖磷酸合成酶StSPS1的原核表达及抗体制备
2
作者
蔡诚诚
李罗品
温和
刘石锋
王强
李立芹
王西瑶
机构
西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室
四川农业大学农学院
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2023年第6期11-17,共7页
基金
西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验室“生物育种”揭榜挂帅项目(SKL-ZY202203)
国家现代农业产业技术体系四川薯类创新团队项目(sccxtd-2023-09)。
文摘
为了对马铃薯蔗糖磷酸合成酶(SPS)编码蛋白StSPS1进行原核表达及多克隆抗体制备。从四倍体马铃薯品种川芋10号的块茎中克隆出了StSPS1基因,该基因编码区全长为3165 bp,编码蛋白的长度为1055 aa。随后基于构建的His标签融合表达载体PET30a-StSPS1,进行了StSPS1蛋白的诱导、变性、纯化、复性及兔免疫试验。结果发现,StSPS1蛋白分子量约为119.62 ku,在可溶性上清中的表达极少,主要在不溶的沉淀中表达,最佳的诱导条件为37℃下用0.5或1.0 mmol/L的IPTG诱导4 h。由于StSPS1为包涵体蛋白,故对其进行包涵体变性处理,并利用His标签纯化出了与目的条带大小相符的蛋白,同时通过His抗体进行了蛋白质免疫印迹(WB)试验,发现在119.62 ku处检测到目标条带,说明StSPS1包涵体蛋白纯化成功。最后,通过将透析复性后的StSPS1蛋白注射进兔子皮下组织中,成功免疫出2个StSPS1的抗体,经过WB鉴定发现2个抗体均能在抗原和川芋10号叶片的总蛋白中杂出目标条带。综上,对马铃薯StSPS1蛋白进行了诱导及纯化,并成功制备了StSPS1蛋白的兔多克隆抗体。
关键词
马铃薯
蔗糖磷酸合成酶
StSPS1
原核表达
多克隆抗体制备
Keywords
Potato
Sucrose phosphate synthase
StSPS1
Prokaryotic expression
Polyclonal antibody preparation
分类号
S532.03 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马铃薯StCYP85A3促进萌芽及根系伸长的功能解析
刘洁
蔡诚诚
刘石锋
邓孟胜
王雪枫
温和
李罗品
严奉君
王西瑶
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
马铃薯蔗糖磷酸合成酶StSPS1的原核表达及抗体制备
蔡诚诚
李罗品
温和
刘石锋
王强
李立芹
王西瑶
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
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