富氢水对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的基于NF-κB/Bcl-2信号通路,研究富氢水对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组与富氢水组,每组24只,两组再分别随机分成缺血前期、缺血期、缺血再灌注期,每期8只大鼠。应用Langendroff灌流装置,对照组采用K-R液灌注,富氢水组采用K-R液+富氢水灌注验完毕后取材,TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡率;采用免疫组织化学法测定各组心肌细胞Bcl-2、Bax、caspase3蛋白表达水平;Western Blot检测各组心肌细胞NF-κB蛋白表达。结果对照组与富氢水组缺血前期均无凋亡,缺血期凋亡明显;对照组缺血再灌注期与缺血期比较,心肌细胞凋亡明显增加(P <0.01);富氢水组缺血再灌注期与缺血期比较,差异无统计学意义;富氢水组缺血再灌注期与对照组缺血再灌注期比较,心肌细胞凋亡明显减少(P <0.01);对照组缺血期与富氢水组缺血期比较,差异无统计学意义。对照组缺血再灌注期与缺血期相比较,Bcl-2蛋白表达水平下降(P <0.05),Bax、caspase3蛋白表达水平增高(P <0.05);富氢水组缺血再灌注期与对照组缺血再灌注期相比,Bcl-2蛋白表达水平增高(P <0.05),Bax、caspase3蛋白表达水平降低(P <0.05)。对照组缺血再灌注期与缺血前期、缺血期比较NF-κB蛋白含量增高,差异有统计学意义(P <0.05);富氢水组缺血再灌注期与缺血前期、缺血期比较NF-κB蛋白含量增高,差异有统计学意义(P <0.05);富氢水组缺血再灌注期与对照组缺血再灌注期相比NF-κB蛋白含量明显降低(P <0.01)。结论富氢水能够通过调节NF-κB/Bcl-2通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡。

富氢水对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的保护作用

背景:近几年来,大量研究发现低浓度氢气或富氢水或氢气饱和生理盐水对多种疾病具有神奇的保护作用,包括心肌缺血再灌注损伤。目的:探讨富氢水对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:将48只Wistar大鼠随机分为对照组与富氢水组,2组再分别随机分成缺血前期、缺血期、缺血再灌注期,每期8只大鼠。取大鼠心脏,按逆灌注10 min,常温旷置20 min,再灌注20 min的方法建立心肌缺血再灌注模型。对照组采用预先用氧平衡(体积分数95%O2+5%CO2)的37℃K-R液灌注,富氢水组采用预先用氧平衡(体积分数95%O_2+5%CO_2)的37℃K-R液+富氢水灌注(0.6 mmol/L,pH 7.3)。实验完毕后取材,苏木精-伊红染色观察两组大鼠心肌组织的心肌病理学改变,测定心肌组织中乳酸脱氢酶、肌酸激酶的活性,双抗夹心ELISA法检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的水平。结果与结论:(1)对照组缺血期与缺血再灌注期心肌乳酸脱氢酶活性均高于缺血前期(P<0.05);富氢水组各期心肌乳酸脱氢酶活性差异无显著性意义;与对照组相比富氢水组缺血再灌注期乳酸脱氢酶活性明显降低(P<0.05);(2)对照组缺血再灌注期肌酸激酶活性均显著高于缺血前期和缺血期(P<0.05);富氢水组各期肌酸激酶活性差异无显著性意义;与对照组比较富氢水组缺血再灌注期肌酸激酶活性明显降低(P<0.05);(3)对照组和富氢水组缺血再灌注期肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β均显著高于缺血期和缺血前期(P<0.05);缺血期高于缺血前期(P<0.05);与对照组相比富氢水组缺血再灌注期两因子水平明显降低(P<0.05),但仍高于缺血前期;(4)结果说明,富氢水对离体大鼠心脏心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是降低肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β水平的表达,即减少了炎症反应。

氢气对缺血再灌注心肌代谢的影响

氢气是一种还原性气体,具有抗氧化、抗炎性反应和抗细胞凋亡等作用。研究发现,氢气对缺血再灌注损伤具有重要的保护作用,对机体新陈代谢有很大的影响。现从糖代谢、能量代谢、氨基酸代谢、脂质代谢等方面阐述氢气对缺血再灌注心肌代谢的影响。

荆防合剂通过抑制JAK2-STAT3信号通路调节荨麻疹小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的平衡

研究荆防合剂对荨麻疹小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响。50只昆明小鼠随机均分为正常组(C)、模型组(V)、荆防合剂0.5 g·kg^(-1)组(JF-L)、荆防合剂1 g·kg^(-1)组(JF-M)、荆防合剂2 g·kg^(-1)组(JF-H)。通过腹腔注射卵白蛋白和氢氧化铝混合液[(0.1 mg+0.1 mL)/只]制备荨麻疹模型,实验结束后取血清检测血清总IgE水平;取皮肤组织,HE染色检测病理变化,Western blot检测p-JAK2(Janus kinase 2)/JAK2和p-STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)/STAT3水平;取脾脏检测脾脏指数,流式细胞术检测脾脏淋巴细胞亚群。结果显示,与C组相比,V组皮肤组织出现明显的病理改变,抓挠次数、脾脏指数和血清总IgE水平增加,皮肤组织JAK2和STAT3磷酸化水平升高,CD4^(+)T、Th1、Treg比例降低,CD8^(+)T、Th2、Th17比例升高,CD4^(+)/CD8^(+)、Th1/Th2、Terg/Th17比值降低。与V组相比,各给药组小鼠皮肤组织的病理形态均有不同程度改善,表皮增厚不明显,真皮网状层胶原纤维结构相对完整,水肿减轻,血管扩张及周围炎细胞浸润减少,抓挠次数、脾脏指数、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平降低;JF-M组和JF-H组血清总IgE水平降低,CD4^(+)T、Th1、Treg比例升高,CD8^(+)T、Th2、Th17比例降低,CD4^(+)/CD8^(+)、Th1/Th2、Terg/Th17比值升高。综上表明,荆防合剂可以通过抑制JAK2-STAT3信号通路调节脾脏T淋巴细胞亚群的平衡来改善荨麻疹小鼠的症状。

首荟通便胶囊对慢性传输性便秘小鼠肠道屏障的影响

目的研究首荟通便胶囊对慢性传输性便秘小鼠肠道屏障的影响。方法48只ICR小鼠随机分成对照组、模型组和首荟通便胶囊(300 mg/kg)组,小鼠ig复方地芬诺酯(10 mg/kg)建立便秘模型,同时给予药物进行干预。实验结束后,检测小鼠肠蠕动和排便功能,采用ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和D-乳酸水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法考察小鼠结肠组织病理变化;采用Western blotting检测小鼠结肠组织紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、Occludin、Claudin 5、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、MMP-2和金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组小鼠排便功能和肠蠕动功能降低(P<0.05、0.01),肠道炎性细胞浸润明显;血清中D-乳酸和TNF-α水平显著升高(P<0.05、0.01);结肠组织Claudin 5、Occludin、ZO-1和TIMP-1蛋白表达水平降低(P<0.05、0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,首荟通便胶囊组小鼠排便功能和肠蠕动功能增强(P<0.05、0.01),肠道炎性细胞浸润减少;血清中D-乳酸和TNF-α水平降低(P<0.05);结肠组织Claudin 5、Occludin、ZO-1和TIMP-1蛋白表达水平升高(P<0.05、0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论首荟通便胶囊能够治疗小鼠便秘,其机制可能与降低便秘小鼠肠道炎症和通透性、调节肠道屏障相关蛋白的表达以及保护肠道屏障有关。

基于UPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS技术的首荟通便胶囊干预慢传输型便秘的代谢组学研究

用代谢组学方法分析首荟通便胶囊(SHTB)对慢传输型便秘小鼠结肠组织内源性代谢产物的影响,探讨SHTB治疗便秘的机制。ICR小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、SHTB组。灌胃复方地芬诺酯建立慢传输型便秘模型,观察碳墨汁推进率、首次排便时间和12 h排便粒数。取结肠,阿利新蓝和过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察黏液细胞。超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪(UHPLC-ESI-QE-Orbitrap-MS)检测结肠组织差异代谢物,分析可能的代谢通路。结果表明,SHTB明显缩短便秘小鼠首次排便时间和排便数量,增加肠蠕动和结肠黏膜层黏液细胞数量。代谢组学研究显示,与正常组相比,模型组结肠共发现左旋尿嘧啶、N6,N6,N6-三甲基-L-赖氨酸、L-甲酰基鸟氨酸、N6-乙酰基-L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、苯乙醛、黄嘌呤、胸苷、甘氨酰-L-亮氨酸、L-半胱氨酸、(R)-1-氨基丙烷-2-醇、脱氧胞苷、γ-谷氨酰-γ-氨基丁醛、D-半乳糖、L-精氨酸、L-脯氨酸、丙酮酸等17个代谢差异物。SHTB组这些代谢差异物有向正常水平回调的趋势。因此推测SHTB治疗慢性传输性便秘可能与调节苯丙氨酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,精氨酸和脯氨酸代谢,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,酪氨酸代谢,丙酮酸代谢,糖酵解,嘧啶代谢,精氨酸生物合成,三羧酸循环和半乳糖代谢等代谢通路有关。

基于ERK/p38 MAPK信号通路探讨荆防颗粒对角叉菜胶所致小鼠尾部血栓的作用研究

研究荆防颗粒对角叉菜胶所致小鼠尾部血栓的抗炎、抗血栓作用机制。32只雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、荆防颗粒给药组、阿司匹林阳性药组,每组8只。腹腔注射角叉菜胶(45 mg·kg^(-1))+低温处理进行血栓模型的制备,于造模前给药7 d。造模后24 h取血检测各组小鼠凝血四项;ELISA试剂盒检测血浆中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症因子活性变化;剪取各组小鼠尾部,观察尾部病变程度并测量血栓长度;利用Western blot检测脾脏组织细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达及磷酸化水平。结果显示,各组小鼠尾部均出现不同程度的暗红色血栓,模型组黑尾长度约占总尾长的40%,凝血酶原时间(PT)显著延长、纤维蛋白原(FIB)含量显著升高、活化部分凝血活酶时间(APTT)明显缩短;与模型组比较,给药组黑尾长度明显缩短;凝血四项有明显改善(P<0.05)。ELISA试剂盒检测表明,模型组小鼠血浆中TNF-α、IL-1β以及IL-6的含量显著升高;与模型组比较,给药组小鼠血浆中TNF-α、IL-1β以及IL-6的含量明显减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示,模型组小鼠脾脏组织中ERK1/2、p38 MAPK蛋白表达及其磷酸化水平明显上调;与模型组相比,给药组ERK1/2、p38 MAPK蛋白表达及其磷酸化水平均有显著下调,差异有统计学意义。荆防颗粒能够缩短角叉菜胶所致小鼠尾部血栓形成,其机制可能与抑制ERK1/2、p38 MAPK信号通路激活相关。

基于网络药理学和实验验证的荆防合剂有效成分抗炎作用机制研究

基于网络药理学及动物实验探讨荆防合剂的网络调控靶标及抗炎作用机制。通过中药系统药理分析平台筛选荆防合剂的活性成分及其对应的靶点,通过检索GeneCards和DisGeNET数据库收集炎症相关的靶点,进而得到荆防合剂活性成分抗炎作用的相关靶点;通过STRING数据库进行蛋白互作分析,并构建蛋白相互作用网络;通过DAVID数据库对活性成分的炎症靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果发现,荆防合剂中159个潜在活性成分,得到276个相关联的靶点,与664个炎症相关靶点取交集,获得90个荆防合剂活性成分抗炎作用的靶点。蛋白相互作用网络分析显示,蛋白激酶B(AKT1)、胱天蛋白酶3(CASP3)、白细胞介素-1β(IL1B)、环加氧酶2(PTGS2)、肿瘤坏死因子(TNF)等蛋白可能为荆防合剂发挥抗炎作用的关键蛋白;KEGG富集分析得到TNF、核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路。通过荨麻疹小鼠模型探讨荆防合剂的抗炎作用,结果显示荆防合剂可以下调TNF信号通路下游p38 MAPK、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、NF-κB蛋白磷酸化水平。该研究体现了荆防合剂通过多成分、多靶点发挥抗炎的作用特点,为其深入研究与开发利用提供了科学依据和重要支撑。