Uhrf1在心肌缺血再灌注损伤中调节mTOR的H3K9me2抑制自噬的作用

表观遗传疗法为心肌缺血性疾病的临床治疗提供了个性化的方案和新的治疗方向。本研究探讨表观遗传因子Uhrf1在体内、外对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用机制,以及调控mTOR的H3K9me2继而影响自噬的独特分子机制。小鼠心脏左前降支结扎再释放的方法建立体内MIRI模型;以H2O2处理的小鼠心肌细胞为体外MIRI模型。qRT-PCR、Western blotting和免疫荧光分析表明,Uhrf1显著降低心肌细胞的凋亡,Bax和caspase-3表达水平均下降,Bcl-2表达水平增加。

淫羊藿苷对小鼠皮肤成纤维细胞重编程为心肌样细胞的作用

目的研究小鼠成纤维细胞重编程为心肌样细胞(induced cardiomyocytes,iCMs)过程中淫羊藿苷(icariin,ICA)的作用及心血管发育中胚层相关蛋白1(mesoderm posterior 1,Mesp1)的表达。方法 MTT法筛选ICA的最佳药物浓度。GMT转染小鼠皮肤成纤维细胞,建立重编程心肌样细胞模型。qRT-PCR检测转染后重编程细胞中肌球蛋白重链6(myosin heavy chain 6, Myh6)的mRNA表达,免疫荧光细胞化学方法检测心肌肌钙蛋白I (cardiac troponinI, cTnI)及Mesp1的表达情况。结果 ICA最佳药物浓度为10-7mol/L。ICA组诱导iCMs高表达cTnI,是GMT组的1.3倍。Myh6 mRNA在重编程第3周达到高峰,且ICA组显著高于GMT组(P<0.01)。Mesp1与c TnI的表达趋势正好相反。结论 ICA可以提高成纤维细胞重编程为心肌样细胞的效率;Mesp1参与促进成纤维细胞重编程的过程。

Uhrf1过表达对缺氧小鼠心肌细胞HIF-1α/VEGF的影响

目的研究泛素样含植物同源(PHD)结构域和环指域1(Uhrf1)过表达对体外缺氧小鼠心肌细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探究Uhrf1对缺氧心肌细胞的保护作用。方法选用氯化钴(CoCl_(2))建立体外心肌细胞缺氧模型,以CCK-8、Western blot检测心肌细胞存活率和HIF-1α蛋白水平。用qPCR检测缺氧对心肌细胞Uhrf1表达的影响。心肌细胞随机分为正常组、空载组和Uhrf1组,观察各组心肌细胞形态学变化及自发搏动频率,用qPCR、Western blot检测Uhrf1过表达对缺氧心肌细胞HIF-1α和VEGF表达的作用。结果250μmol/L CoCl_(2)可作为建立心肌细胞缺氧模型的最佳诱导浓度;与正常心肌细胞相比,缺氧使心肌细胞Uhrf1 mRNA水平上调(P<0.05)。成功转染Uhrf1质粒后,Uhrf1组缺氧心肌细胞中HIF-1α蛋白和HIF-1α、VEGF mRNA较空载组显著增加,心肌细胞自发搏动频率明显提高(P<0.05)。结论Uhrf1过表达显著上调缺氧小鼠心肌细胞HIF-1α和VEGF水平,增加细胞自发搏动频率,对缺氧心肌细胞发挥保护作用。