Mn-SOD通过GSK-3β影响HO-1和Drp1的抗氧化应激减轻MTX相关肝细胞损伤

目的:氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)是导致药物性肝损伤最常见的药物,其致病机制与线粒体功能障碍引起的氧化应激有关。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)可以通过清除超氧自由基达到抗氧化应激的作用,含锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)属于SOD的一种。本研究拟观察Mn-SOD是否影响MTX对肝细胞的损伤,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养人肝细胞系L-02,并分为4组:空白对照组(加入同体积无血清培养基)、MTX组(加入40μg/孔MTX)、MTX+NC组(加入40μg/孔MTX+转染空白质粒)和MTX+SOD组(加入40μg/孔MTX+转染Mn-SOD质粒)。分别应用全自动生化仪和real-time RT-PCR法检测每组细胞培养上清的ALT、AST和miR-122的水平,评估各组肝细胞受损伤的程度;使用线粒体超氧化物(mitochondrial superoxide indicator,MitoSOX)荧光探针标记各组细胞内超氧化物,流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3 beta,GSK-3β)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)、线粒体分裂蛋白质(dynamin-related protein 1,Drp1)和Mn-SOD的含量。结果:与空白对照组比较,MTX组和MTX+NC组肝细胞培养上清中ALT、AST和miR-122水平明显升高(P<0.05),MTX+SOD组较MTX组和MTX+NC组显著降低(P<0.05)且与空白对照组相当。MitoSOX染色显示:MTX组和MTX+NC组的超氧化物最丰富,MTX+SOD组明显减少且与空白对照组差别不大。流式细胞术检测结果表明:与空白对照组相比,MTX组和MTX+NC组细胞凋亡明显增加,MTX+SOD组与MTX组和MTX+NC组比较细胞凋亡明显减少(P<0.05)。蛋白质印迹法检测到空白对照组和MTX+SOD组细胞Mn-SOD、p-GSK-3β和HO-1高水平表达,而MTX组和MTX+NC组细胞Mn-SOD、p-GSK-3β和HO-1比空白对照组明显降低(P<0.05);Drp1则完全相反,在MTX组和MTX+NC组中高表达,在空白对照组和MTX+SOD组中则是低表达。结论:细胞内Mn-SOD水平的降低导致超氧化物蓄积,通过GSK-3β影响HO-1和Drp1水平,使线粒体裂解损伤,诱导细胞凋亡,这是MTX引起肝细胞损伤的分子机制之一;将Mn-SOD导入细胞内高表达,可清除药物产生的超氧化物,通过GSK-3β影响HO-1和Drp1水平,从而激活线粒体、保护细胞免受氧化应激损伤,最终抑制肝细胞凋亡。因此,通过外源导入SOD来阻断或逆转MTX相关肝细胞损伤是一条潜在的治疗途径。

乙型肝炎病毒e抗原对人外周血淋巴细胞的影响

【目的】探索乙型肝炎病毒（HBV）感染后，乙型肝炎e抗原（HBeAg）在免疫调节中的作用和机制。【方法】分离正常人血淋巴细胞，分别加入不同浓度的HBeAg，培养72h后，计数细胞，流式细胞仪分析T淋巴细胞亚群的改变，同时分析细胞Toll受体（TLR）中TLR3、TLR4和细胞程序性死亡受体-1（PD-1）的表达率，ELISA分析7干扰素（IFN-γ）浓度。【结果】淋巴细胞的增殖随HBeAg浓度增加而明显抑制，CD4＋和CD8＋细胞百分比也相应降低，TLR3、TLR4和PD-1的表达率明显增高，人γ干扰素（IFN-γ）浓度降低。【结论】HBeAg体外能抑制淋巴细胞生长，使T淋巴细胞比例降低，促进PD-11的表达并抑制其活性。

广义回归神经网络模型诊断酒精性肝病的初步研究

目的探讨广义回归神经网络（GRNN）模型在酒精性肝病（ALD）诊断中的可行性。方法建立ALD诊断的GRNN模型，其输入层7个指标分别为γ-谷酰氨转移酶、总胆汁酸、碱陛磷酸酶、总胆红素、ALT、AST及AST／ALT值，输出层3个指标分别为酒精性肝硬化肝功能失代偿期、酒精性肝硬化肝功能代偿期和酒精性肝炎。收集湘雅二医院确诊并分类的135例患者，选取其中120例为模型训练样本，另外15例作为待诊断样本；同时，收集文献发表的40例酒精性肝炎患者的临床数据，以其中34例为模型训练样本，6例作为待诊断样本。运用GRNN方法对其进行运算与诊断，检验GRNN模型的诊断结果与临床诊断结果的符合率。结果用建立的GRNN模型分别对120例和34例模型训练样本进行回判诊断，其诊断结果与临床诊断结果的符合率分别为100．00％和94．1砒；对15例和6例待诊断样本进行诊断，符合率均为100．00%。结论GRNN模型作为临床诊断多指标综合化的方法，对ALD的诊断有较高的准确率。

阿德福韦酯联合安络化纤丸治疗慢性乙型肝炎的疗效

目的观察阿德福韦酯（ADV）联合安络化纤丸治疗慢性乙型肝炎患者的临床疗效。方法治疗组36例采用ADV联合安络化纤丸治疗，对照组36例单用ADV治疗，治疗48周后，观察治疗前后的肝功能、肝纤维化指标、HBVDNA及肝组织学。统计学分析采用t检验或χ2检验。结果治疗48周后，治疗组和对照组患者在肝功能、血清纤维化标志物及肝脏组织学均有改善，治疗后两组患者在ALT、AST、总胆红素、白蛋白、肝组织炎症活动度积分和HBVDNA阴转率方面比较，差异无统计学意义。治疗组和对照组患者治疗后血清肝纤维化标志物透明质酸（HA）值分别为（101．58±30．11）μg／L、（182．25±117．59）μg／L；层黏连蛋白（LN）值分别为（147．89土41．72）μg／L、（181．50±56．96）μg／L；IV型胶原蛋白（CW）值分别为（38．75±9．50）μg／L、（74．92±31．14）μg／L，治疗组患者的HA、LN、CIV值与对照组比较，f值分别为3．987、2．856、6．666，P值均〈0．05，差异均有统计学意义。治疗组治疗前后肝组织纤维化积分分别为12．28±3．16、10．61±2．37，治疗前后比较，f=2．532，（P〈0．05，差异有统计学意义；对照组治疗前后肝组织纤维化积分分别为12．17±3．01、11．36±2．93，治疗前后比较，t=1．151，P〉0．05，差异无统计学意义。结论ADV联合安络化纤丸治疗慢性乙型肝炎患者具有良好的抗肝纤维化作用，患者获得明显肝组织学改善。

肝纤维化无创诊断的进展及展望

及时准确地评估肝纤维化程度,对慢性肝病的治疗及预后具有重要意义。目前最可靠的肝组织活检诊断本身存在许多问题,诸如肝脏病变的不均匀性而导致的取样误差,存在一定的损伤性使患者难以接受,很难反复取材,故而不能动态地观察肝纤维化及纤维化形成的情况。另外,目前还没有可靠的办法确定肝组织胶原的含量,仅根据肝内纤维增生的情况进行大概的估计,具有一定的局限性。近年来,组合应用多项指标诊断与评价肝纤维化,建立肝纤维化无创性综合指标诊断模型成为当前肝纤维化诊断的研究热点。为了更好地理解和应用这些诊断模型,本文对目前主要无创诊断的若干研究进展进行系统地总结分析,主要从血清学诊断和影像学诊断两个方面展开。在此基础上,对目前无创诊断的局限性进行总结,最后对肝纤维化无创诊断可能的发展方向进行展望。

伏立康唑治疗重型肝炎并肺部真菌感染致横纹肌溶解症1例

重型肝炎患者因机体免疫功能低下、使用大剂量糖皮质激素和抗生素、肠道微生态失衡等原因，易合并侵袭性肺部真菌感染。伏立康唑属三唑类抗真菌药物，体内代谢呈非线性药代动力学特征，经细胞色素P450酶（CYP）代谢，易发生药物相互作用，且其主要代谢酶CYP2C19具有基因多态性，导致不同基因型患者服用相同剂量伏立康唑后血药浓度差异，可引起药物不良反应增多或者疗效不佳。重型肝炎患者肝脏代谢酶含量和活性降低，也可因伏立康唑血药浓度过高而引起药物不良反应。本研究报道1例伏立康唑致重型肝炎并肺部侵袭性真菌感染患者横纹肌溶解症。