生产用培养基对猪丹毒杆菌G_4T_(10)株安全及免疫原性试验的比较研究

为明确生产用培养基对猪丹毒杆菌G4T10株安全性及免疫原性影响,采用2种不同批次的肉肝胃膜消化汤(20120123批和130226批)及马丁琼脂(20120904批和130129批)进行猪丹毒杆菌G4T10株培养和选菌,然后进行安全及免疫原性试验。结果共筛选出4种不同优势菌落,其中一株的菌落(20120123批肉肝胃膜消化汤+20120904批马丁琼脂)形态最好,具有良好的安全性及免疫原性(小鼠全试验9/10存活,其免疫后攻毒达9/9保护);而有一株菌落(20120123批肉肝胃膜消化汤+130129批马丁琼脂)形态最差,其安全性及免疫原性试验结果差(小鼠安全试验仅6/10存活,其免疫后攻毒仅达2/5保护)。试验表明,不同批次生产用培养基对猪丹毒活疫苗(G4T10株)质量影响大。

鸡梭菌性肠炎研究概论

从病原学、流行病学、症状及病变、致病机理、诊断、治疗及预防、免疫进展等方面对鸡梭菌性肠炎进行介绍,并对该病未来研究热点进行了展望,为开展鸡梭菌性肠炎的基础研究、疾病预防控制提供参考。

A型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及培养毒素浓缩工艺研究

经过对A型产气荚膜梭菌合成培养基pH值、灭菌方式和配制用水进行优化,确定最适pH值为8.0～8.5,灭菌方式为116℃30 min,配制用水为去离子水。合成培养基培养产气荚膜梭菌CVCC37株6 h后毒力达50～100 MLD/mL,随着时间的延长,毒力不再增强;培养温度为36℃或37℃时,产毒效果最佳。比较不同截留分子量的超滤膜浓缩效果,10 ku截留分子量的收获率为40%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠2/2死亡;而8 ku收获率达75%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠0/2死亡。因此,8 ku截留分子量膜包适宜对A型菌培养毒素的浓缩。

鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定

本试验通过鸡胚尿囊腔接种,对河北省保定地区采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得1株病毒,经病理学检查、电镜观察、理化特性试验、中和试验、PCR检测、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV),命名为BD-Ⅰ株。

九种药物对新城疫病毒的体外敏感性试验

利巴韦林、盐酸吗啉双胍（病毒灵）、聚肌胞、干扰素、黄芪多糖、双黄连、阿昔洛韦、胸腺肽、三黄植物血凝素这9种药物是临床上常用的抗病毒药物，它们对新城疫病毒的作用效果不一，试验测定了9种药物对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度，并进一步对药物阻止病毒侵入CEF、抑制病毒在CEF内复制进行了测定，同时还筛选出有效的抗新城疫病毒的药物，为临床使用抗病毒药物提供了科学的理论依据。

聚丙烯酰胺电泳检测犊牛轮状病毒

从疑似轮状病毒腹泻犊牛粪便样品中提取病毒RNA。将提取的核酸进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,6个样品中有4个样品的电泳条带具有轮状病毒特征条带,证明该牛群有轮状病毒感染。

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌（CVCC79500株）运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18-24 h,37℃、200 r/min振荡培养8-24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108-31×108、33×108-41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108-66×108、78×108-88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5-5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。

重组大肠杆菌DE-pET-P46的培养基优化和高密度发酵

为提高重组蛋白的生产效率,利用响应面试验设计技术,对表达猪肺炎支原体P46蛋白的重组大肠杆菌DE-pET-P46的培养基进行了优化,确定了培养基各营养成分及其最佳配比。在相同培养条件下,优化培养基比LB培养基的菌体浓度高出一倍。在生物反应器中利用优化培养基发酵培养该重组大肠杆菌,培养物的湿菌重达39.5 g/L。SDS-PAGE电泳结果显示,高密度发酵对重组大肠杆菌DE-pET-P46的rP46的表达和占细胞总蛋白比例均没有明显的改变。

C型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及培养毒素浓缩工艺优化

确定C型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及建立配套的毒素浓缩工艺。比较不同pH值、灭菌温度、配制用水的合成培养基及其不同培养时间和温度下培养产气荚膜梭菌CVCC60102株的毒力;按毒素的分子量及超滤膜的截留分子量设计并比较2种不同浓缩工艺的毒素收获率及透出液的毒力。结果表明,pH值为8.0～8.4、灭菌方式为116℃30 min、配制用水为去离子水时产毒最佳,毒力达到500～1000 MLD/mL;合成培养基培养产气荚膜梭菌CVCC60102株18h后毒力达500～1000 MLD/mL,随着时间的延长,毒力不再增强;培养温度为36℃或37℃时,产毒效果最佳;不同截留分子量的超滤膜浓缩,10 ku截留分子量的收获率为68%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠2/2死亡;而8 ku收获率达80%,其透出液静脉接种0.2 mL,小鼠0/2死亡。因此8 ku截留分子量膜包适宜对C型菌培养毒素的浓缩。上述结果为C型产气荚膜梭菌合成培养基的应用提供了数据支撑。

猪肺炎支原体S株的分离与鉴定

从典型猪肺炎支原体病变肺组织传代分离到一株支原体,经培养特性、血清学鉴定、生化鉴定、PCR检测及测序分析证明其为猪肺炎支原体,纯化后命名为S株。将S株P46基因和P97基因R1区的氨基酸序列与其他菌种的相应序列进行同源性分析,该菌株P46基因氨基酸序列与其他菌种同源高达99%以上,P97基因R1区的氨基酸重复数为11个,不同于其他菌株;免疫原性试验结果表明该菌株具有良好的免疫原性。

C型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及培养毒素浓缩工艺优化

确定C型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数及建立配套的毒素浓缩工艺。比较不同pH值、灭菌温度、配制用水的合成培养基及其不同培养时间和温度下培养产气荚膜梭菌CVCC60102株的毒力;按毒素的分子量及超滤膜的截留分子量设计并比较2种不同浓缩工艺的毒素收获率及透出液的毒力。

用半数变色单位法精确测定支原体活菌滴度

【目的】使用半数变色单位法实现对支原体活菌滴度的精确测定,以替代当前常用的CCU(变色单位)测定法。【方法】参考病毒滴度TCID50(半数组织细胞感染量)的标准测定方法,对早期学者提出的支原体活菌滴度指标—CCU50(半数变色单位)的测定方法进行改进,并做了重复性、敏感性试验以及与CCU的比对验证试验。为进一步验证该方法的适用性,使用其对猪肺炎支原体和鸡滑液支原体培养物进行了活菌滴度精确测定和评价。【结果】该方法可重复性良好,并具有较强的敏感性和适用性。【结论】CCU50测定法能对支原体活菌滴度进行精确评估,有望成为支原体培养工艺研究、支原体疫苗研发等方面的有效工具。