J亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在中国普遍存在,严重危害养禽业,暂时尚无有效预防、治疗禽白血病的措施,只能通过净化控制。因此,研究一种低成本、易推广的检测方法对防控此病非常重要。用DF-1细胞接种病毒,以细胞基因组为模板,通过巢式PCR方法扩增出941bp的含酶切位点的ALV-J特异性基因gp85基因序列,连接于pET32a(+)载体上,实现gp85蛋白在宿主菌BL21的表达,以切胶回收方式纯化蛋白,成功获得约52ku的重组融合蛋白,免疫新西兰兔,制备gp85单因子抗血清,Dot-ELISA检测抗体效价。结果显示,纯化所得蛋白质具有良好抗原性,制备的抗血清效价高于1.024×105。本试验通过较简便、低耗的方法获得高效单因子血清,为抗血清的制备提供参考,为ALV-J gp85蛋白的研究、ALV-J特异性检测方法的研制打下基础,对ALV-J的净化有重要意义。

Ⅱ群禽腺病毒五邻体蛋白单因子血清的制备

通过PCR方法扩增得到Ⅱ群禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)的五邻体(penton)基因,并构建了原核表达载体pET-32a-penton,将其转化至E.coil BL21中,通过诱导表达,以切胶回收的方式纯化蛋白,获得约70ku的重组融合蛋白,Western blotting检测纯化后的重组蛋白具有较好的抗原性。将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备了五邻体蛋白单因子血清,间接ELISA检测结果显示所制备的抗血清效价大于1∶40000。本试验获得的高效单因子血清,为Ⅱ群禽腺病毒特异性检测方法的研究奠定了基础。

不同接种途径和不同接种日龄对ALV-J感染模式的影响

为了探讨不同接种途径和日龄对SPF鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)后感染模式的影响,本研究分别经11日龄鸡胚尿囊腔、1日龄口服、点眼滴鼻、腿部肌肉注射、颈部皮下注射、腹腔注射和7日龄腹腔注射途径接种了ALV-J CHN06株,于不同时间点(第1、2、4、6周),分别对各试验组的病毒血症、抗体及排毒进行了动态检测。结果显示,11日龄鸡胚尿囊腔组100%(15/15)感染模式为V+S+。1日龄口服组和点眼滴鼻组感染模式以V-S-为主。1日龄颈部皮下注射组、腿部肌肉注射组和腹腔注射组在第4、6周的感染模式均以V+S+为主。7日龄腹腔注射组在试验期内仅呈现一过性病毒血症,而且7日龄感染组在第6周的抗体阳性率比1日龄感染组高,差异显著(P<0.05)。本研究结果表明,胚胎感染易导致持续性病毒血症,注射途径比非注射途径更易诱导病毒血症和排毒。随着感染日龄的增加,病毒血症持续时间缩短,排毒时间推后,抗体生成水平升高;防止ALV-J早期感染有利于ALV-J的防控和净化。

靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究

试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4～5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%～63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%～45.41%。

定配眼镜光学中心水平互差检测方法的探讨

光学中心水平互差是评定定配眼镜质量好坏的重要指标之一。目前,行业内对光学中心水平互差的定义、检测方法以及合格判定依据尚存在很大争议。该文以实例入手,阐释了光学中心水平互差的定义和计算方法,并给出光学中心水平互差的解题步骤,以解开广大企业和质检人员对该项指标检测方法的困惑。

血管瘤禽白血病病毒FJ0610株的分离与鉴定

为了解禽白血病病毒在商品蛋鸡中的流行情况,试验采用病理剖检、聚合酶链式反应(PCR)以及间接免疫荧光试验(IFA)等方法对送检的疑似禽白血病病毒感染的商品蛋鸡进行了病毒分离与鉴定,并对分离株的致瘤相关基因gp85基因进行测序,与国内外各亚群禽白血病病毒进行对比。结果表明:分离、鉴定到1株J亚群血管瘤禽白血病病毒,命名为FJ0610;分离株gp85基因核苷酸序列同源性在11.5%～94.5%之间,其中与血管瘤禽白血病毒株ZH-08株同源性最高,而与E亚群毒株同源性最低;基于gp85核苷酸序列的系统进化分析表明FJ0610株的gp85序列与ZH-08株的亲缘关系最近。

差速离心对J亚群禽白血病病毒分离株SCAU11-H生物学活性影响

为探讨差速离心对J亚群禽白血病分离株SCAU 11-H生物学活性的影响,本研究通过实时荧光定量RT-PCR、IFA和ELISA等方法验证差速离心后浓缩病毒的生物学活性.结果显示,在透射电镜下病毒粒子直径为60～140 nm,由外部的囊膜和内部的电子致密的核心构成,多近似球形,也有一些类似长杆形、鼓锤形的形态;浓缩前后病毒的滴度（TCID50/mL）由原来的1.58×105/Ml上升到8.89×1011/Ml.浓缩病毒（105TCID50）感染细胞后,病毒复制量在1d,3d,5d逐步增长,ALV-J抗原gp85和p27检测均为阳性.以上结果表明,差速离心极大提高了病毒滴度,且并不影响病毒生物学活性,浓缩后的病毒可用于后续试验研究.

Ⅱ群禽腺病毒pⅢa基因的原核表达及抗原性分析

为了研究Ⅱ型禽腺病毒pⅢa基因的抗原性,试验根据Ⅱ型禽腺病毒火鸡出血性肠炎病毒(HEV)VAS株的全基因序列(GenBank序列号为AY849321.1)设计了1对引物,采用PCR扩增出pⅢa的完整基因,将其连接到质粒表达载体pET-32a(+),获得的阳性克隆命名为pET-32a-pⅢa,再将pET-32a-pⅢa转化至E.coil BL21(DE3),经37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导表达5 h,应用SDS-PAGE分析超声裂解后的上清液和沉淀。结果表明:目的蛋白以可溶性蛋白形式存在,蛋白分子质量约为76 ku,目的蛋白具有较好的抗原活性。

球安对人工感染球虫的岭南黄鸡保护效能试验

选择柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫人工混合感染岭南黄鸡,采用笼养和平养的方法,比较球安(Avatec)与甲基盐霉素、盐霉素、马杜霉素和球虫康对鸡球虫感染的保护效能。笼养试验结果显示,球安按110mg/kg添加到饲料中,对3种球虫超高剂量(15万个孢子化卵囊)的混合感染具有很强的抑杀作用,其抗球虫指数和饲料报酬分别为181.5和1.77。平养试验显示,在球虫持续感染的情况下,从增重方面看,与阳性对照相比,球安组、甲基盐霉素和球虫康组在20、30、40和50日龄段体重始终差异极显著。除了盐霉素和马杜霉素以外,各试验组屠宰率与阳性对照相比差异不显著;与阴性对照相比差异不显著。在胸肌率方面,无论是与阴性对照还是与阳性对照相比,均为差异不显著。

焦度计法与望远镜法在防护镜检测中的应用研究

本文讨论了焦度计法和望远镜法在测量原理上的区别,以及两种测量方法在不同种类、不同镜片透射比的防护镜的顶焦度(光焦度)检测中的差异,为不同防护镜的检测方法的选取提供了建议。

太阳镜的出口检测

我国是世界上眼镜产品的出口大国,但由于各国检验依据不尽相同,给我国眼镜产品的出口贸易造成了不必要的障碍。文中比较了各国对太阳镜各项指标要求的异同之处,以供相关的企业和检测机构参考,意在减少此项非关税壁垒对太阳镜出口贸易带来的不良影响。

进出口老视成镜质量检测与产品标准

本文介绍了世界各主要国家对老视成镜产品市场准入方面的规定,并对各国产品标准之间的差异进行比较分析,以供相关生产、贸易企业和检测机构参考,旨在减少非关税壁垒对老视成镜产品进出口贸易带来的不良影响。

2014年中国眼镜进出口情况分析

一.行业概况 近年来,我国眼镜制造业保持稳步增长,眼镜产量已经占到全球的70%,是名副其实的眼镜生产大国。同时由于人口众多,我国又是世界上潜力最大的眼镜消费国,目前,中国眼镜行业市场容量已达400亿人民币。然而,由于眼镜制造业准入门槛低,目前全国虽拥有大小眼镜生产企业5000余家,但普遍规模较小,缺乏研发和设计能力,多数企业没有自主品牌,生产出来的产品也多属于低附加值产品。