黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)炎症信号通路的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为6组(每组10只):对照组,异丙肾上腺素组,异丙肾上腺素+黄芪多糖(低、中和高剂量)组,异丙肾上腺素+普萘洛尔组。各给药组连续腹腔注射3周,并于给药1 d后腹腔注射异丙肾上腺素2周。给药3周后,各组动物分别检测全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LVMI);取左心室组织进行苏木精—伊红染色法(HE)染色;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织心钠素(ANP)和TLR4的mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌组织TLR4、p65蛋白(p65)和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中TNF-α、IL-6的水平。结果与对照组相比,异丙肾上腺素组大鼠的HMI和LVMI显著增加,ANP、TLR4m RNA表达增加,TLR4、p65的蛋白水平增加和IκBα蛋白水平减少,血清中TNF-α、IL-6明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与异丙肾上腺素组相比,黄芪多糖400、800mg/(kg·d)和普萘洛尔40 mg/(kg·d)组HMI和LVMI降低,ANP、TLR4 mRNA和TLR4、p65蛋白和血清中TNF-α、IL-6表达显著降低,IκBα蛋白的表达明显增加(P<0.01)。黄芪多糖200 mg/(kg·d)组ANP、TLR4 mRNA和TLR4、p65蛋白和血清中TNF-α的表达降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白的表达增高(P<0.05)。结论黄芪多糖能改善异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路有关。

TLR4/NF-κB信号通路在黄芪甲苷抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中的作用

目的探讨TLR4/NF-κB信号通路在黄芪甲苷抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚中的作用。方法以异丙肾上腺素5 mg/(kg·d)腹腔注射制备大鼠心肌肥厚模型。60只SD大鼠随机分为6组,每组10只:正常对照组、异丙肾上腺素组、异丙肾上腺素+黄芪甲苷20 mg/(kg·d)、异丙肾上腺素+黄芪甲苷40 mg/(kg·d)、异丙肾上腺素+黄芪甲苷80 mg/(kg·d)及异丙肾上腺素+普萘洛尔40 mg/(kg·d)。给药组连续灌胃3周,并于灌胃1天后腹腔注射异丙肾上腺素2周。给药3周后,分别检测各组大鼠全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LVMI);取左心室组织进行HE染色,测量左心室心肌细胞横径;RT-PCR检测心肌组织ANP和TLR4的mRNA表达;Western blot检测心肌组织TLR4、p65和IκBα的蛋白表达;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6含量。结果同正常对照组相比,异丙肾上腺素组大鼠表现为HMI和LVMI显著增加,左心室心肌细胞横径增加,ANP和TLR4 mR-NA表达增加,TLR4和p65蛋白含量增加以及IκBα蛋白含量减少,血清中TNF-α、IL-6含量明显增加。与异丙肾上腺素组相比,黄芪甲苷不同剂量组表现为HMI和LVMI降低,左心室心肌细胞横径缩小,ANP和TLR4 mRNA表达减少,TLR4和p65蛋白含量减少以及IκBα蛋白含量增加,血清中TNF-α、IL-6含量减少,且呈一定的剂量依赖性。结论黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

CaMKⅡ信号通路在黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大中的作用

目的从钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-de-pendent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)信号通路角度探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,应用Iso 10μmol·L-1诱导心肌细胞肥大,观察β受体阻断剂普萘洛尔及不同浓度APS对肥大心肌细胞的影响。用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;Bradford法测心肌细胞总蛋白含量;ELISA法检测细胞外液中IL-6和TNF-α的含量;RT-PCR法检测ANP mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞CaMKⅡδ蛋白的表达。结果普萘洛尔(propranolol,PRO)和APS均能有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为体积减小、总蛋白含量降低及ANP mRNA表达降低,并能有效减少炎症反应,表现为细胞外液中IL-6、TNF-α的含量明显减少,CaMKⅡδ蛋白含量减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导的乳鼠心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能与抑制CaMKⅡ信号通路及减少炎症反应有关。

构建“三位一体”的医学机能学实验“金课”的探索与实践

医学实验教学对于医学人才培养至关重要,实验教学质量的提高迫在眉睫。以“动物实验与人体实验相结合、基础理论与临床实践技能相结合、实体实验与虚拟仿真实验相结合”的“三位一体”的医学机能学整合实验,带来了全新的医学机能学实验内容、教学模式和方法手段,也开拓了全新的实验教学改革发展方向和理念。锦州医科大学医学机能学整合实验课程改革,面向临床医学、运动康复、医学实验技术等专业本科生,进行了模块化课程内容创新设计、教学方法和手段的升级创新,以及新型医学机能学实验平台的构建等方面的探索和实践,以此为基础形成了全新的医学机能学实验教学新模式、新方法和新内容,也为建设医学机能学实验“金课”奠定了扎实的基础,明确了努力的方向。

黄芪甲苷对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大的影响及其机制

目的探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素(ISO)致乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法原代培养新生SD大鼠心肌细胞48 h,分别加入不同浓度的黄芪甲苷、IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082、β-受体阻滞剂普萘洛尔作用30 min,加入ISO 10μmol/L继续培养48 h。消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法检测细胞中蛋白的量;RT-PCR法检测心肌细胞ANP和TLR4基因的表达;Western blotting法检测心肌细胞TLR4、p65和IκBα蛋白的表达;ELISA法检测细胞外液中TNF-α、IL-6的量。结果与对照组比较,模型组心肌细胞体积明显增大,总蛋白的量增加,ANP基因、TLR4基因和蛋白、p65蛋白表达上调,IκBα蛋白表达下调,细胞外液中TNF-α、IL-6的量显著增加(P<0.01)。黄芪甲苷、BAY11-7082和普萘洛尔均能有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞体积减小,总蛋白的量降低,ANP基因、TLR4基因和蛋白、p65蛋白表达下调,IκBα蛋白表达上调(P<0.05),且上述作用呈一定的剂量相关性。结论黄芪甲苷对ISO诱导的心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

黄芪多糖通过Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大

目的探讨黄芪多糖抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导心肌细胞肥大的作用及机制。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,用Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂BAY11-7082及不同浓度黄芪多糖对肥大心肌细胞的影响。用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;考马斯亮蓝法测心肌细胞总蛋白含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房钠尿肽(ANP)mRNA和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌细胞P65、NF-κB抑制蛋白IκBα和TLR4蛋白的表达。结果与正常对照组相比,Iso组心肌细胞体积增大88.3%,总蛋白含量增加55.3%,ANP mRNA表达增高,炎症因子TNF-α和IL-6的含量分别增加200%和65.9%,TLR4mRNA表达增高,P65和TLR4蛋白含量增多及IκBα蛋白含量减少。黄芪多糖和BAY11-7082均能有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为体积减小,总蛋白含量降低,ANP mRNA表达降低;均能有效减少炎症反应,表现为细胞外液中TNF-α和IL-6明显减少;均使TLR4mRNA表达降低,P65和TLR4蛋白含量减少及IκBα蛋白含量增多,且黄芪多糖呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导的乳鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB炎症信号通路有关。