芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca^(2+)]_i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2+]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2+]i迅速升高,并持续维持高[Ca2+]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2+]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2+释放和抑制胞外Ca2+内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2+]i升高相关。

ATP刺激巨噬细胞[Ca^(2+)]_i升高和氧自由基增加及大黄酸的抑制作用研究

研究了 ATP 刺激的大鼠腹腔巨噬细胞[Ca^(2+)]_i 升高与氧自由基(ROS)产生的关系和大黄酸抑制作用特征.提取大鼠腹腔巨噬细胞,利用 Ca^(2+)探针 Fura-2检测单细胞胞内自由 Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_i )变化,同时利用NBT 还原反应强度检测同一细胞 ROS 产生能力.结果发现无 ATP 刺激的巨噬细胞的 ROS 产生量较低;1mmol/L ATP 刺激巨噬细胞单细胞后诱发[Ca^(2+)]_i 显著升高由胞内 Ca^(2+)释放和胞外 Ca^(2+)内流组成,同时 ROS产生增强2倍;胞外无 Ca^(2+)条件下 ROS 产生随着[Ca^(2+)]_i 下降而减少.10^(-5)和10^(-4)mol/L 浓度大黄酸对1mmol/L ATP 刺激巨噬细胞单细胞的[Ca^(2+)]_i 升高和 ROS 产生有剂量依赖性的抑制作用;多细胞的统计分析表明10^(-5)和10^(-4)mol/L 浓度大黄酸分别抑制了[Ca^(2+)]_i 峰值的49%和84%,同时抑制了 ROS 产生的59%和81%.因此认为 ATP 刺激大鼠腹腔巨噬细胞诱发的[Ca^(2+)]_i 升高介导了 ROS 的产生,大黄酸剂量依赖性的抑制 ATP 刺激的细胞[Ca^(2+)]_i 升高和 ROS 产生能力,并提示大黄酸抑制细胞[Ca^(2+)]_i 升高是其抑制 ROS 产生的重要机制.

胶原性大鼠类风湿关节炎模型的建立及检测方法

目的和方法类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种自身免疫性疾病,发病原因不清,临床没有针对性强的治疗药物。建立RA动物模型是进行RA病理学、药物学研究的重要环节。目前RA的动物模型有多种,胶原性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)动物模型的临床表现、病理组织学和免疫学等方面国外已进行了研究,其主要表现为多发性末端关节炎,关节局部红肿,其病理变化表现为增生性滑膜炎,关节软骨破坏,关节腔内有大量炎症细胞浸润,以及各种免疫指标的改变,这种特性和人类RA非常相似。因此,CIA模型是筛选和研究治疗或预防RA药物的理想模型。笔者以皮内注射Ⅱ型胶原完全弗氏佐剂法建立大鼠CIA模型,并通过对模型的关节病变的评分、大鼠体温测试、关节肿胀程度测试、大鼠关节抓力测试、一氧化氮的检测、过氧化脂的测试、病理检测和X线检测等技术,建立对模型的评价方法。