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一种新型骨显像剂^(99m)TcAMDP的初步研究 被引量:8
1
作者 刘丽琴 杨建权 +2 位作者 李晔 李至敏 王学斌 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期230-234,共5页
以二苄胺、原甲酸三乙酯和亚磷酸二乙酯为原料 ,经过加热回流、催化还原、酸性水解等反应合成了亚甲基氨基二膦酸 (AMDP)配体 .通过熔点、元素分析和1 HNMR测定进行了结构确认 ;研究了SnCl2 的量、pH变化对 99mTc标记AMDP的影响 ,选择 ... 以二苄胺、原甲酸三乙酯和亚磷酸二乙酯为原料 ,经过加热回流、催化还原、酸性水解等反应合成了亚甲基氨基二膦酸 (AMDP)配体 .通过熔点、元素分析和1 HNMR测定进行了结构确认 ;研究了SnCl2 的量、pH变化对 99mTc标记AMDP的影响 ,选择 2种层析条件对标记率进行测定 ,在所选择的标记条件下 ,标记率高于 95% .进行了小鼠体内分布实验 ,并与99mTc MDP进行对比 ,结果表明99mTc AMDP与99mTc MDP均具有较强的亲骨性能 ,99mTc AMDP的肺、肝、脾等的摄取率高于99mTc MDP ,而其初期骨摄取率则明显高于99mTc MDP ,初期骨与肌肉、骨与血的摄取率比要好于99mTc MDP ,是一种值得深入研究的新型骨显像剂 . 展开更多
关键词 骨显像剂 ^99mTc-AMDP 亚甲基氨基二膦酸 生物分布 骨摄取率 亲骨性能
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^(99m)Tc-MAMA-HA与^(99m)TcN-MAMA-HA的制备及生物性能的比较 被引量:5
2
作者 吴战宏 王学斌 李至敏 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期776-781,共6页
制备了 2种脂肪酸标记物 99m Tc- MAMA- HA和 99m Tc N- MAMA- HA,改进了标记方法 ,放化纯均大于 90 % ;对标记物进行了小鼠的生物分布实验 ,结果表明二者都有一定的心肌摄取 ,99m Tc- MAMA- HA的心肌摄取要好于 99m Tc N- MAMA- HA,而... 制备了 2种脂肪酸标记物 99m Tc- MAMA- HA和 99m Tc N- MAMA- HA,改进了标记方法 ,放化纯均大于 90 % ;对标记物进行了小鼠的生物分布实验 ,结果表明二者都有一定的心肌摄取 ,99m Tc- MAMA- HA的心肌摄取要好于 99m Tc N- MAMA- HA,而后者的心肌滞留要好于前者 ,这说明99m Tc N的引入明显改变了 99m Tc- MAMA- HA的生物分布 . 展开更多
关键词 制备 生物性能 心肌代谢显像剂 ^99mTc-MAMA-HA ^99mTcN-MAMA-HA 生物分布 配体交换
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集胞藻PCC6803中sll1981基因的克隆与表达研究 被引量:3
3
作者 龙昊知 李至敏 +4 位作者 王小琴 吴晓玉 张宝 王飞 李志敏 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1076-1079,共4页
集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的功能研究存在争议。实验从集胞藻PCC6803基因组中克隆了sll1981基因,将该基因构建到p ET-32a载体上并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中表达。结果表明sll1981蛋白可以在该表达体系中高效可溶性表达,利用... 集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的功能研究存在争议。实验从集胞藻PCC6803基因组中克隆了sll1981基因,将该基因构建到p ET-32a载体上并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中表达。结果表明sll1981蛋白可以在该表达体系中高效可溶性表达,利用镍亲和层析纯化方法得到了纯度大于95%的sll1981蛋白,蛋白收率约为3 mg/g菌体。研究为今后鉴定sll1981蛋白的真正功能奠定了基础。 展开更多
关键词 集胞藻 基因克隆 蛋白纯化
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新型骨显像剂^(99m)Tc-EDP的合成与研究 被引量:3
4
作者 刘丽琴 李至敏 王学斌 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期75-79,共5页
以亚磷酸二乙酯为原料 ,经多步反应合成了亚乙烯基二膦酸 (EDP)配体 .通过1 HNMR测定进行了结构确认 ;经99mTc标记后 ,标记率高于 95% .体外稳定性测定表明 ,6h后放化纯度仍保持在 90 %以上 .小鼠体内分布实验表明 ,99mTc EDP与99mTc MD... 以亚磷酸二乙酯为原料 ,经多步反应合成了亚乙烯基二膦酸 (EDP)配体 .通过1 HNMR测定进行了结构确认 ;经99mTc标记后 ,标记率高于 95% .体外稳定性测定表明 ,6h后放化纯度仍保持在 90 %以上 .小鼠体内分布实验表明 ,99mTc EDP与99mTc MDP( 99mTc 亚甲基二膦酸 )均具有较强的亲骨性能 ,99mTc EDP骨摄取优于99mTc MDP ,并且随着时间的增加 ,骨与非靶器官摄取的比值都在增加 ,远远高于99mTc MDP .进行了狗SPECT全身骨显像实验 ,2h后获得清晰的图像 . 展开更多
关键词 骨显像剂 ^99mTc-亚乙烯基二膦酸配体 生物分布 骨摄取率 亚乙烯基二膦酸
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左旋甲状腺素对亚临床甲减、临床甲减的疗效分析 被引量:13
5
作者 肖美华 李至敏 冯智勇 《中外医学研究》 2013年第17期109-110,共2页
目的:探讨左旋甲状腺素对亚临床甲减、临床甲减的疗效。方法:选择2011年1月1日-2012年6月30日笔者所在医院收治50例临床甲减和亚临床甲减患者,其中临床甲减患者25例(治疗组),亚临床甲减患者25例(对照组),两组患者均给予左旋甲状腺素钠口... 目的:探讨左旋甲状腺素对亚临床甲减、临床甲减的疗效。方法:选择2011年1月1日-2012年6月30日笔者所在医院收治50例临床甲减和亚临床甲减患者,其中临床甲减患者25例(治疗组),亚临床甲减患者25例(对照组),两组患者均给予左旋甲状腺素钠口服,观察两组临床症状改善情况,统计两组的治疗效果。结果:两组患者治疗后胆固醇均有所下降,治疗组与对照组下降程度相比较,治疗组显著优于对照组。结论:左旋甲状腺素治疗亚临床甲减、临床甲减实际临床治疗效果显著。 展开更多
关键词 左旋甲状腺素 亚临床甲减 临床甲减 胆固醇
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^(99m)Tc-MAMA-UA与^(99m)TcN-MAMA-UA的制备及生物性能的比较 被引量:2
6
作者 吴战宏 王学斌 李至敏 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期80-84,共5页
首次制备了 2种脂肪酸标记物 99m Tc- MAMA- UA和 99m Tc N- MAMA- UA,放化纯均大于 90 % .对标记物进行了小鼠的生物分布实验 ,结果表明二者都有一定的心肌摄取 ;99m Tc-MAMA- UA的心肌初始摄取要大于 99m Tc- MAMA- HA.这说明碳链的... 首次制备了 2种脂肪酸标记物 99m Tc- MAMA- UA和 99m Tc N- MAMA- UA,放化纯均大于 90 % .对标记物进行了小鼠的生物分布实验 ,结果表明二者都有一定的心肌摄取 ;99m Tc-MAMA- UA的心肌初始摄取要大于 99m Tc- MAMA- HA.这说明碳链的适当增长会改变 99m Tc-MAMA- FA(fatty acid)的生物分布 . 展开更多
关键词 心肌代谢显像剂 ^99mTc-MAMA-UA ^99mTcN-MAMA-UA 生物分布
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鱼腥藻PCC7120中琥珀酸半醛脱氢酶的初步表征及结构分析 被引量:2
7
作者 王小琴 李至敏 +2 位作者 雷国风 汤亚兰 李志敏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第4期318-324,共7页
蓝藻琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛到琥珀酸的转化,使得蓝藻的三羧酸循环变得完整。BLAST序列分析预测鱼腥藻PCC7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。为了证实all3556基因编码蛋白的催化功能,构建了p ET28a-all3556表达质粒,并在... 蓝藻琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛到琥珀酸的转化,使得蓝藻的三羧酸循环变得完整。BLAST序列分析预测鱼腥藻PCC7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。为了证实all3556基因编码蛋白的催化功能,构建了p ET28a-all3556表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中进行重组蛋白诱导表达;利用镍亲和层析方法对all3556蛋白进行了分离纯化。酶动力学测试表明all3556蛋白是一个NADP+-依赖型的琥珀酸半醛脱氢酶。生物信息学分析发现all3556蛋白和其他来源的琥珀酸半醛脱氢酶的氨基酸序列具有一定的同源性,在催化中心的氨基酸残基高度保守。 展开更多
关键词 鱼腥藻PCC7120 琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH) 重组表达 蛋白质纯化及表征 结构分析
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基于非直接利益冲突关系的微博政治参与研究 被引量:3
8
作者 孙奔 李至敏 王金水 《哈尔滨工业大学学报(社会科学版)》 2014年第4期42-47,141,共6页
随着互联网在中国的普及和发展,非直接利益者往往将微博变成其政治参与的工具,由此衍生的非直接利益冲突对中国社会政治稳定具有不可估量的负面影响。一方面基于互联网去中心化以及信息传播的公开性、即时性、互动性等特质,民众的网络... 随着互联网在中国的普及和发展,非直接利益者往往将微博变成其政治参与的工具,由此衍生的非直接利益冲突对中国社会政治稳定具有不可估量的负面影响。一方面基于互联网去中心化以及信息传播的公开性、即时性、互动性等特质,民众的网络政治参与能力给政治体系带来极大冲击,另一方面政府在政治参与中的信息监管能力和大众媒体在信息传播中的主导能力都被弱化,容易衍生大规模的、群体性的非直接利益冲突。当面对公共议题甚至矛盾冲突,基于微博围观心理和公共理性精神的引导,微博政治参与行为主体能够自觉参与政治实践,自觉接受公共理性精神的约束,合理表达直接或间接利益诉求,通过微博公共领域互动和协商就事件性质达成可接受的社会共识,从而维护和巩固了社会政治动态的稳定以及公共权威执政的合法性基础。 展开更多
关键词 微博政治参与 非直接利益冲突 社会政治稳定 公共理性与协商
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鱼腥藻PCC 7120中all3556蛋白的表达与纯化 被引量:1
9
作者 王小琴 李至敏 +1 位作者 雷国风 李志敏 《江西农业学报》 CAS 2017年第5期1-4,共4页
琥珀酸半醛脱氢酶在生物体中发挥重要的生理功能。通过BLAST序列分析,发现鱼腥藻PCC 7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。实验通过常规PCR从鱼腥藻PCC 7120基因组中克隆了all3556基因,将该基因构建到p ET-28a载体上并在大肠杆菌BL2... 琥珀酸半醛脱氢酶在生物体中发挥重要的生理功能。通过BLAST序列分析,发现鱼腥藻PCC 7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。实验通过常规PCR从鱼腥藻PCC 7120基因组中克隆了all3556基因,将该基因构建到p ET-28a载体上并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中表达。经过SDS-PAGE电泳,结果表明:all3556蛋白可以在该表达体系中高效可溶性表达。利用镍亲和层析纯化方法得到了纯度大于95%的all3556蛋白,蛋白收率约为27 mg/g菌体。研究为进一步阐明all3556蛋白的催化功能及机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 鱼腥藻PCC 7120 all3556蛋白 蛋白表达与纯化
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34例左氧氟沙星不良反应分析 被引量:10
10
作者 肖美华 李至敏 +1 位作者 庞健辉 冯智勇 《亚太传统医药》 2011年第10期204-205,共2页
目的:探讨左氧氟沙星的不良反应,以加强药物的合理应用。方法:采用回顾性调查方法,对我院2008-2010年间上报的34例左氧氟沙星不良反应的资料进行整理、分析。结果:左氧氟沙星药物不良反应涉及到多个器官系统。结论:临床上应重视左氧氟... 目的:探讨左氧氟沙星的不良反应,以加强药物的合理应用。方法:采用回顾性调查方法,对我院2008-2010年间上报的34例左氧氟沙星不良反应的资料进行整理、分析。结果:左氧氟沙星药物不良反应涉及到多个器官系统。结论:临床上应重视左氧氟沙星的不良反应,加强左氧氟沙星的合理应用,减少药物不良反应的发生。 展开更多
关键词 左氧氟沙星 不良反应 合理用药
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农业院校化学类大型仪器开放模式探讨 被引量:1
11
作者 董爱琴 肖伟 +2 位作者 刘倩 李至敏 王文敏 《广州化工》 CAS 2018年第17期150-152,共3页
基础化学实验作为农业院校的公共基础课在提高学生综合素质和就业能力方面有重要的作用。本文结合农业院校大学生就业现状和化学学科的特点,提出将化学类大型仪器开放对全校本科生开放,提高化学及相关专业学生的动手实践能力和就业能力... 基础化学实验作为农业院校的公共基础课在提高学生综合素质和就业能力方面有重要的作用。本文结合农业院校大学生就业现状和化学学科的特点,提出将化学类大型仪器开放对全校本科生开放,提高化学及相关专业学生的动手实践能力和就业能力。文章主要从大型仪器开放对大学生就业竞争力的影响因素、大型仪器向本科生开放存在的问题和改进措施等方面进行了探讨。 展开更多
关键词 仪器开放 实践教学 就业
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“转识成智”制药工程专业人才培养模式的实践与探索 被引量:1
12
作者 李志敏 胡紫微 +2 位作者 刘志文 王艺霖 李至敏 《广东化工》 CAS 2020年第1期149-150,共2页
在地方农林院校中,通过开展"转识成智"的教育实践与探索,研究新型教学模式下制药工程专业学生成长成才的培养路径和发展方向。制药工程专业应从目前自身情况和实际需要出发,进行培养目标和人才培养模式的创新改革,以适应建设... 在地方农林院校中,通过开展"转识成智"的教育实践与探索,研究新型教学模式下制药工程专业学生成长成才的培养路径和发展方向。制药工程专业应从目前自身情况和实际需要出发,进行培养目标和人才培养模式的创新改革,以适应建设创新型国家的综合性人才需求。 展开更多
关键词 转识成智 制药工程 培养模式
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新时代干部党性教育精准化:内在张力与路径优化——基于动因理论视角
13
作者 李至敏 《沂蒙干部学院学报》 2023年第4期122-128,共7页
党性是政党固有的本质属性,党性存在的动因符合社会发展的认知规律。通过对认知规律的研究,从动因理论的视角出发分析新时代干部党性教育的若干动因,把握其内在辩证关系并作进一步梳理,可以找出新时代干部党性教育精准化的优化路径。
关键词 党性教育 动因理论 精准化
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制药工程专业药物分析实验“自制胶囊的质量控制与分析”研究
14
作者 李志敏 张伟 +2 位作者 黄婷 许文武 李至敏 《教育教学论坛》 2018年第37期177-178,共2页
本文对制作混合药物胶囊的重要性做了简明阐述,探讨了制备混合胶囊的方法,并应用化学分析的方法检测学生自制胶囊的药效。对于制药工程专业学生专业水平培养和跨学科综合素质培养都具有重要意义。
关键词 混合 胶囊 自制 质量 分析
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柑橘果实采后绿霉病防治研究进展 被引量:2
15
作者 雷国风 李至敏 +1 位作者 王小琴 李志敏 《江苏农业科学》 2018年第21期27-30,共4页
柑橘类水果的采后病害在贮藏和运输期间会造成相当大的损失。绿霉病是柑橘类水果主要的采后疾病。综述植物源提取物、微生物保鲜剂、天然化合物、食品添加剂、公认安全化合物等物质在柑橘果实采后绿霉病防治中的应用情况。2种或多种方... 柑橘类水果的采后病害在贮藏和运输期间会造成相当大的损失。绿霉病是柑橘类水果主要的采后疾病。综述植物源提取物、微生物保鲜剂、天然化合物、食品添加剂、公认安全化合物等物质在柑橘果实采后绿霉病防治中的应用情况。2种或多种方法的联合使用将是柑橘绿霉病防治的发展方向之一。 展开更多
关键词 柑橘 指状青霉 植物源提取物 天然化合物 食品添加剂 拮抗菌
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创伤弧菌FrsA蛋白的纯化及生化表征 被引量:1
16
作者 鲍玲玲 李至敏 +3 位作者 王小琴 汤亚兰 许文武 李志敏 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第11期130-133,共4页
为确定创伤弧菌FrsA蛋白(VvFrsA)在大肠杆菌中的表达条件及体外纯化步骤,并对其进行生化表征分析。通过分子生物学手段将合成的创伤弧菌的FrsA基因(VvFrsA)连接到pET28a载体上,构建pET28a-VvFrsA原核表达载体。将该载体转化至大肠杆菌BL... 为确定创伤弧菌FrsA蛋白(VvFrsA)在大肠杆菌中的表达条件及体外纯化步骤,并对其进行生化表征分析。通过分子生物学手段将合成的创伤弧菌的FrsA基因(VvFrsA)连接到pET28a载体上,构建pET28a-VvFrsA原核表达载体。将该载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导实现了VvFrsA蛋白的可溶性表达。采用Ni-NTA亲和层析法纯化,得到重组VvFrsA蛋白。酶催化活性研究结果显示,VvFrsA具有酯酶功能,可以催化对硝基苯酚脂肪酸酯的水解,并且其最适底物为对硝基苯酚短链脂肪酸酯。综上,利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株成功表达了可溶性VvFrsA蛋白,并且VvFrsA体外具有催化对硝基苯酚脂肪酸酯水解活性。 展开更多
关键词 创伤弧菌 FrsA蛋白 蛋白质纯化 生化表征 酯酶
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蓝杆藻ATCC 51142中α-酮戊二酸脱羧酶的克隆与表达 被引量:1
17
作者 谢琮琮 许文武 +5 位作者 李至敏 王小琴 雷国风 张伟 黄婷 李志敏 《江苏农业科学》 2018年第19期37-39,共3页
α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。... α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。为了证实cce4227基因编码蛋白的催化功能,从蓝杆藻ATCC 51142基因组中克隆cce4227基因,然后构建pET28a-cce4227表达质粒。将该质粒与p Tf16分子伴侣质粒共转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞后进行重组蛋白的诱导表达。利用镍亲和层析方法对cce4227蛋白进行分离纯化,得到纯度> 95%的cce4227蛋白,菌体蛋白收率约为12 mg/g。酶动力学测试表明,cce4227蛋白是1个焦磷酸硫胺素(TPP)依赖型的α-酮戊二酸脱羧酶。 展开更多
关键词 蓝杆藻ATCC51142 α-酮戊二酸脱羧酶 基因克隆 重组表达 蛋白质纯化
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指状青霉草酰乙酸水解酶的结构特征与原核表达分析 被引量:1
18
作者 胡紫微 李至敏 +2 位作者 张梦洁 徐依婷 李志敏 《江西农业学报》 CAS 2021年第5期31-37,共7页
利用生物信息学技术手段分析了柑橘绿霉病病原菌指状青霉(Penicillium digitatum)中草酰乙酸水解酶(Pd OAH)的二级和三级结构,并利用分子生物学技术对重组的Pd OAH进行了原核表达分析和分离纯化。生物信息学分析结果表明Pd OAH的建模结... 利用生物信息学技术手段分析了柑橘绿霉病病原菌指状青霉(Penicillium digitatum)中草酰乙酸水解酶(Pd OAH)的二级和三级结构,并利用分子生物学技术对重组的Pd OAH进行了原核表达分析和分离纯化。生物信息学分析结果表明Pd OAH的建模结构的质量较高,与其它来源的草酰乙酸水解酶的氨基酸序列具有高度的同源性,且在活性中心氨基酸残基高度保守。重组Pd OAH蛋白在大肠杆菌中进行原核表达,在16℃、0.2 mmol/L IPTG浓度条件下具有较高的表达量,并且有一定的可溶性。利用亲和层析技术分离纯化方法获得了纯度较高的重组Pd OAH蛋白。 展开更多
关键词 指状青霉 草酰乙酸水解酶 生物信息学分析 原核表达 蛋白纯化
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集胞藻PCC6803中α-酮戊二酸脱羧酶的原核表达分析
19
作者 张伟 刘志文 +3 位作者 王小琴 李至敏 谢琮琮 李志敏 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期597-607,共11页
【目的】α-酮戊二酸脱羧酶(α-ketoglutaric acid decarboxylase,α-KGD)是蓝细菌三羧酸循环途径中的一个关键酶。试验旨在优化集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的原核表达方法,并对不同表达方法获得的重组sll1981蛋白进行活性测定... 【目的】α-酮戊二酸脱羧酶(α-ketoglutaric acid decarboxylase,α-KGD)是蓝细菌三羧酸循环途径中的一个关键酶。试验旨在优化集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的原核表达方法,并对不同表达方法获得的重组sll1981蛋白进行活性测定。【方法】利用分子生物学技术构建含有sll1981基因的多种表达载体,通过SDSPAGE分析这些表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达和可溶性情况,利用Ni-NTA亲和层析分离纯化重组sll1981蛋白,然后通过酶偶联法测定重组sll1981蛋白的催化活性。【结果】含有sll1981基因的不同表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达良好,然而重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性差异较大。【结论】当pET28bsll1981质粒与pTf16分子伴侣质粒在大肠杆菌中共表达时重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性均为最佳。酶动力学测试表明集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白具有α-酮戊二酸脱羧酶功能。为进一步研究α-酮戊二酸脱羧酶的结构功能关系及催化机制提供重要基础。 展开更多
关键词 集胞藻PCC6803 α-酮戊二酸脱羧酶 原核表达 sll1981基因 分子伴侣
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集胞藻PCC6803中N-乙酰鸟氨酸转氨酶的生化表征及结构分析
20
作者 白福美 李至敏 +3 位作者 王小琴 胡紫微 鲍玲玲 李志敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期98-107,共10页
旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础。以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠... 旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础。以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态。经IPTG诱导,Ni-NTA亲和层析纯化后获得重组Slr1022蛋白,然后通过紫外分光光度法对Slr1022蛋白的催化功能进行表征,并运用生物信息学软件对该蛋白进行结构分析。成功构建pET28a-slr1022重组表达质粒,并诱导表达重组Slr1022蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定该蛋白分子量约为50 kD,与理论大小相符。Slr1022蛋白与底物N-乙酰鸟氨酸的结合常数K_m和最大反应速度V_(max)分别是0.12 mmol/L和0.60 μmol/(L·s),并且Slr1022蛋白与另一底物α-酮戊二酸的K_(m)和V_(max)分别是0.039 mmol/L和0.65 μmol/(L·s)。Slr1022蛋白在pH 8.5时催化活性最强。Slr1022蛋白和其他来源的N-乙酰鸟氨酸转氨酶氨基酸序列有一定的同源性,而且活性位点的氨基酸残基高度保守。成功克隆并表达纯化出Slr1022蛋白,酶学性质和生物信息学研究表明Slr1022蛋白为N-乙酰鸟氨酸转氨酶。 展开更多
关键词 N-乙酰鸟氨酸转氨酶 原核表达 生化表征 结构分析 集胞藻PCC6803
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