抗VEGFR-2全人源IgG1抗体的构建及其在CHO-k细胞中的表达

本文在实验室构建的单链抗体-Fc融合抗体[scFv(AK404R)-Fc]的基础上构建抗VEGFR-2全人源IgG1样全长抗体(Mab-04)。利用重叠PCR,获得Mab-04的轻链和重链的核酸序列后分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1,获得重组质粒。脂质体法将重组质粒转染至CHO-k细胞,经Protein A柱纯化细胞培养上清液获得目的蛋白,利用Western blotting检测目的蛋白,ELISA检测Mab-04与抗原亲和力。测序表明重组质粒构建成功,Western blotting检测显示目的蛋白成功表达(1μg·mL-1),ELISA检测阐明该抗体能与抗原结合并呈浓度依赖性(IC50为50 nmol·L-1),表明Mab-04成功表达并正确装配,为进一步大量制备该抗体及其活性研究打下基础。

抗肿瘤人源化抗体药物的研究进展

随着单克隆抗体技术的发展,治疗性抗体药物逐渐占据全球市场,主要应用于肿瘤治疗、抗移植排斥、自身免疫性疾病的治疗等。抗体药物可根据人源化程度不同,分为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。本文着眼于目前治疗性抗体药物研究热点,聚焦于抗肿瘤人源化抗体药物,结合已上市热点抗肿瘤人源化抗体药物实例,从抗体人源化技术以及人源化抗体生产的角度来阐述目前研究状况。同时,立足于国内外抗肿瘤人源化抗体药物的现状,分析未来发展趋势。