不同浓度卵蛋白变应原对小鼠哮喘模型建立的影响

目的研究不同浓度卵蛋白(ovalbumin,OVA)变应原对小鼠的哮喘造模影响。方法 96只6～8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为8组,分别为PBS组(对照组)、10μg组(A组)、20μg组(B组)、50μg组(C组)、100μg组(D组)、200μg组(E组)、500μg组(F组)、1000μg组(G组)。A～G组分别用含1%明矾的PBS配制相应浓度的OVA于第0、7和第14天对小鼠进行腹腔注射。于第21～27天连续7 d用含1%的OVA的PBS溶液雾化吸入激发各组小鼠。正常对照组使用PBS溶液致敏和激发。最后一次雾化吸入激发后24 h内,计数各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BLAF)中嗜酸性粒细胞的含量,ELISA法检测IL-4、IL-5的分泌量及其血清IgG2a、IgE抗体的水平;肺组织病理切片观察各组小鼠哮喘模型的效果,评价最优哮喘造模的OVA浓度。结果 A～G组小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5含量均高于正常对照组(P<0.01),细胞因子水平随着OVA浓度的增高而逐渐下降;A～G组小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数均高于正常对照组(P<0.01),从低浓度组至高浓度组嗜酸性粒细胞数从高向低变化;A～G组小鼠血清中总抗体IgE的水平均显著高于正常对照组(P<0.01),且随着OVA浓度的增高IgE水平逐渐下降。血清中IgG2a的水平则随OVA给药浓度的增高而逐渐增高;低浓度OVA致敏组小鼠肺组织标本可观察到明显的炎症浸润性病理表现,而高浓度组肺部组织病理变化不明显。结论低浓度的OVA连续致敏小鼠造成过敏性哮喘病理改变较为明显,随着OVA浓度的增高,造模效果逐渐降低,而高浓度的OVA则会导致模型小鼠发生免疫耐受。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌细胞膜20肽重组蛋白SA0587的表达和鉴定

目的原核质粒表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)细胞膜20肽重组蛋白SA0587。方法构建p ET28aSA0587-GFP重组质粒,将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中;挑取单菌落培养活化后诱导表达目的蛋白SA0587;SDS-PAGE及Western blot法鉴定SA0587蛋白。结果利用基因工程技术成功构建重组质粒p ET28a-SA0587-GFP,转染大肠杆菌后,成功表达出目的蛋白SA0587。结论成功在大肠杆菌表达MRSA细胞膜20肽重组蛋白SA0587。

化学发光免疫法和放射免疫法在血清AFP检测中的应用效果对比

目的 :对比化学发光免疫法和放射免疫法在血清AFP(甲胎蛋白)检测中的应用效果。方法 :将2015年6月至2016年6月期间芜湖市第一人民医院收治的56例原发性肝癌患者作为研究对象。将这56例患者的血清标本平均分为2份,分别使用化学发光免疫法和放射免疫法对这两份血清标本进行AFP检测。然后,比较用这两种检测方法检测血清AFP含量的精密度及用其诊断原发性肝癌的准确率、敏感度和特异度。结果 :与使用放射免疫法检测血清AFP含量的结果相比,使用化学发光免疫法检测血清AFP含量的误差更小,其可重复性更大(P<0.01)。与使用放射免疫法相比,使用化学发光免疫法检测血清AFP诊断原发性肝癌的准确率、敏感度、特异度均更高(P<0.05)。结论 :与使用放射免疫法相比,用化学发光免疫法检测血清AFP含量的效果更好。

肿瘤标志物检测在肺癌诊断中的应用效果评析

目的:探讨肿瘤标志物检测在肺癌诊断中的应用效果。方法:选取2016年4月至2017年4月在芜湖市第一人民医院接受诊治的52例肺癌患者、52例肺部良性病变患者和进行体检的52例健康人作研究的对象。将52例肺癌患者作为肺癌组,将52例肺部良性病变患者作为良性组,将52例健康人作为对照组。对三组受检者体内各项肿瘤标志物的水平进行检测,检测的项目包括:SCC-Ag(鳞癌相关抗原)、CYFRA21-1(细胞角蛋白21-1)、CEA(血清癌胚抗原)、NSE(神经元特异性烯醇化酶)。结果:肺癌组患者体内SCC-Ag、CYFRA21-1、CEA、NSE的水平高于良性组患者和对照组人员,P<0.05。良性组患者体内SCC-Ag、CYFRA21-1、CEA、NSE的水平与对照组人员上述各项指标的水平相当,P>0.05。结论:肺癌患者体内SCC-Ag、CYFRA21-1、CEA、NSE的水平可明显高于肺部良性病变患者和健康人。因此,对肺癌患者进行肿瘤标志物检测有助于诊断其病情。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌细胞膜20肽重组蛋白的表达和鉴定

目的利用基因重组技术构建原核质粒表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌细胞膜20肽重组蛋白(SA0587),为进一步研究其生物学作用和构建小鼠Ig A肾病动物模型提供重要条件。方法以SA0587的序列为参照,设计出SA0587基因,构建p ET28a-SA0587-GFP重组质粒,以NcoⅠ/XhoⅠ为酶切位点进行双酶切鉴定,同时将符合预期的单克隆进行基因测序,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌中;挑取单菌落培养活化后,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白SA0587;通过SDS-PAGE电泳及Western blot实验鉴定目的蛋白。结果成功构建了重组质粒并进行双酶切鉴定和基因测序,重组质粒大量诱导表达目的蛋白后镍胶纯化,通过SDSPAGE电泳及Western blot实验鉴定目的蛋白为SA0587。结论实验表达和鉴定了SA0587,为后期Ig A肾病小鼠模型的建立提供必要条件。