玉米单染色体的分离和体外扩增

建立了玉米单染色体的分离及体外扩增的方法。取95％乙醇固定后经果胶酶和纤维酶酶解的根尖制备染色体标本，用自制的微细玻璃针在倒置显微镜下挑取目的染色体。染色体DNA经Sau3A酶切后与人工合成的Sau3A连接接头连接，经两次PCR扩增获得足以用于构建单染色体DNA文库的扩增产物。片段大小为0．3～5kb，多数为0．5～3．5kb．与前人研究方法相比，所需底物量少（只需1条染色体），扩增片段大，为植物中小型染色体分离、体外扩增进而进行单染色体DNA文库构建奠定了基础。

影响基因枪法转化小麦幼胚的几个因素的研究

近几年,利用基因枪直接转入外源DNA,已经成为禾谷类基因转化的主要方法。但在小麦中存在着DNA导入频率低且组织受轰击后再生能力降低等问题。通过实验发现,轰击前14天将小麦幼胚接种于附加0.5mg/L脱落酸(ABA)的诱导培养基上,可显著提高小麦盾片愈伤组织的再生能力。并且,在轰击前6h至轰击后18h,将愈伤组织保持在附加0.5mol/L甘露醇的培养基中,其报告基因的表达将比对照呈几倍的提高。另外,合适的轰击用金粉与DNA配比是转化的关键因素之一。轰击培养14天左右的愈伤组织,每枪用250μg金粉附着0.5μg质粒DNA较宜。

影响籼稻花药培养诱导率的因素及基因型的作用研究

本文研究了影响籼稻花药培养诱导率的9种重要因素的作用。供试品种和杂种共70余种。结果发现,不同基因型的培养力存在很大差异,这种差异表现在对各种因素上,如基本培养基成分、激素的种类与配比、对低温预处理的时间等等不同反应上。低温预处理是提高籼稻出愈率的有效措施,但由于不同基因型小孢子对低温的耐受力不同,所需的适合预处理时间也就不同。花药接种后先在30℃下培养3天后,再转入26℃下培养,较直接培养在26℃下可大幅度提高花粉檀株的产量。诱导培养基中补加脯氨酸、马铃薯提取液对提高出愈率和绿苗分化率有明显效果。

提高小麦基因枪法转化频率的研究

用基因枪法将带Bar－GUS双标记基因的质粒（pAHC25）转入普通春小麦品种中─60634的幼胚盾片，并获转基因植株。在轰击的经预培养3～4天的342块幼胚盾片再经筛选再生的植株中，经PCR和Southern分析表明，外源基因已稳定整合到小麦基因组中，转化率为0．88％。此外发现，幼胚培养基中用2mg／Ldicamba代替2mg／L2，4－D，可提高愈伤组织的再生能力。同时，为了保持小麦幼胚愈伤组织的分化能力，在诱导愈伤组织阶段5mg／Lbialaphos的筛选时间以不超过1个月为宜，及早转入3mg／Lbialaphos分化及壮苗培养基筛选转基因植株。

水稻基因枪法多基因转化研究

为探索多基因转化系统,利用基因枪法进行水稻3个质粒的共转化研究,结果从25个转基因植株中获得3个三转化植株N12、K4-39和K1-1-66,成功地将分别位于不同质粒载体上的GUS,hpt和RTBV CP基因同时导入到水稻中。3个三转化植株中N12、K4-39正常可育。对N12的后代遗传分析表明,该转基因植株中3个载体所携外源基因均呈孟德尔式分离(3:1),3个外源基因分别整合到水稻的两条染色体上。GUS基因与hpt连锁,RTBV CP位于另一条染色体上。

提高水稻基因枪转化效率的研究

在转化前将受体材料转移到高渗培养基上，即用含有一定浓度的甘露醇和山梨醇的培养基对受体材料进行处理。基因枪轰击后把受体材料转出，结果表明，这样做明显提高了瞬时表达（ＧＵＳ基因的表达）效果，用可筛选的标记基因（潮霉素磷酸转移酶基因，ＨＰＴ）试验表明，经高渗处理后，稳定转化的效率也有提高。用基因枪将带有ＨＴＰ基因的粒子轰击其盾片，经过筛选及植株再生，获得了转基因植株。

基因枪法转化籼稻有关因素的评价

利用基因枪轰击水稻未成熟胚及未成熟胚诱导来源的愈伤组织，对国内外16个籼稻品种进行了转化。设置不同的基因枪转化参数，并在培养基中添加各种植物激素、甘露醇以及2－N－吗啉－乙基磺酸（简称MES）来改善继代过程中籼稻愈伤组织的生长状态。基因枪转化的操作参数（包括金粉浓度和DNA含量、基因枪氦气压力、轰击受体的不同状态）对转化频率有重要影响；在继代培养基中添加MES（500mg／L）作为缓冲剂，可以减少籼稻愈伤组织褐化现象的发生；在诱导和继代培养基中补加NAA（0．5mg／L），KT（0．2mg／L）可改进愈伤组织质量，进而提高再生频率；在继代培养基中补加低浓度的ABA（1mg／L）和甘露醇（20g／L），能普遍改善愈伤组织生长状况，减少褐化现象的产生，得到较多结构致密的颗粒状抗性愈伤。获得了再生的转化植株，经检测表现出对Basta的抗性。

大豆单染色体的显微分离及体外扩增

采用玻璃针分离法，通过显微操作器成功地分离到大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个０．５ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管中，经Ｓａｕ３Ａ酶切，并在染色体ＤＮＡ片段两端加上Ｓａｕ３Ａ人工接头后，进行两轮ＰＣＲ扩增，得到０．３～３ｋｂ之间的ＤＮＡ片段。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明，这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组ＤＮＡ之间有同源性，从而证明两条单染色体ＤＮＡ确实已被成功地扩增了，同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离，为小型单染色体ＤＮＡ的体外扩增及微克隆奠定了基础。

籼稻基因枪转化的研究

对国内外１７个籼稻品种进行了基因枪转化，研究了有利于籼稻愈伤组织诱导和生长的培养条件和筛选程序，１５个品种获得了潮霉素抗性愈伤组织，５个品种再生了植株，包括当前国际上推广的ＩＲ系统及国内的优良品种和恢复系，分子生物学证据证明潮霉素基因已经整合入籼稻的基因组。最高植株转化频率接近一般粳稻水平，多数低于粳稻水平。这为建立籼稻的转化系统打下了基础。

植物抗毒素转化水稻和转基因植株的生物鉴定(英文)

用基因枪法转化了水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）６个材料的未成熟胚、成熟胚及胚性愈伤组织。质粒ｐＳＳＶｓｔ１和ｐＶＥ５＋是由葡萄中分离出的编码芪类合成酶的植物抗毒素基因与３５Ｓ或它自己的启动子组成。Ｇ４１８（１００～１５０ｍｇ／Ｌ）或潮霉素（５０ｍｇ／Ｌ）筛选后，经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ或Ｄｏｔｂｌｏｔ分析证明的转基因植株共５４株。对转基因植株及其后代进行了稻瘟病和白叶枯病的抗性鉴定。初步结果表明，芪类合成酶基因可以提高转基因植株及后代的抗性。

一对粳稻细胞质雄性不育系与恢复系的DNA限制性片段长度的多态性分析

通过对粳稻细胞质雄性不育系秀岭 A 和 C8411的染色体限制性片段长度的多态性分析,定量地评估了它们的 F_1杂种基因组的杂合性。在评估时,总共检测了12对染色体上的122个位点,使用9种不同的限制性内切酶,结果发现,在26%的位点中有等位的差异,而且呈现多态性的位点不是随机或均匀地分布在不同的染色体上的。根据揭示多态性的限制性内切酶的数量,可将秀岭 A 和 C8411间的多态性分为二大类。本文还讨论了进一步用限制性片段长度多态性的分析技术研究杂种优势与基因组杂合性的途径。

基因枪转移Bar基因获得抗除草剂(Basta)的糜子蔗克隆再生植株

用糜子蔗（ｓｏｒｇｈｕｍ×ｓｕｇａｒｃａｎｅ）×ｍｉｌｅｔｓｏｒｇｈｕｍ茎尖愈伤组织为受体，通过基因枪轰击将Ｂａｒ基因转入糜子蔗细胞；用除草剂Ｂａｓｔａ含量分别为１、２５、５、１０ｍｇ／Ｌ的８１１４诱导与分化培养基上选择抗性愈伤组织；在Ｂａｓｔａ含量为１与１５ｍｇ／Ｌ筛选培养基上，选择出３个快速增殖并大量再生绿苗的体细胞无性系（Ｃｌｏｎｅ），如ＢａｒＣ１、ＢａｒＣ２、ＢａｒＣ３；ＢａｒＣ１、Ｃ２再生植株用Ｂａｓｔａ含量为１、２５～５ｍｇ／Ｌ的溶液进行抗性检测，证明这些小植株具有极强的抗性。

黑麦1R染色体的显微分离与回收

建立了利用显微操作技术分离植物单个染色体的方法。以黑麦(Secale cereale L.)为材料,以其标准染色体组型图为依据,识别出黑麦含抗病基因的1R染色体。经显微操作,将单条1R染色体放入Ep-pendorf管中。研究表明,用α-溴奈饱和液对细胞进行预处理,可快速鉴别出黑麦1R染色体。采用去壁低渗制片技术,可明显地改善显微分离单染色体的条件。

会计电算化集成系统研究

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价值指数的直接修正法及算法程序

正确选择价值工程活动的对象，是关系到价值工程活动收效大小、甚至成败的关键，但在选择对象时，经常发生误判或错判等问题，本文提出价值指数直接修正法，以解决这些问题。

会计电算化软件的评价与选择

目前,财政部会计核算软件评审委员会公布通过评审的商品化会计核算软件(以下简称商品软件)共有几十个,同时,还有一些地方财政部门通过评审的类似软件,已初步形成商品会计软件市场。如何评价,并从中选择满意的软件,是广大用户十分关心的问题。笔者认为,用户应从以下几个方面评价或选择商品软件。 一、挑选功能齐全的商品软件 功能是否齐全是评价和挑选商品软件的首选指标。很显然只有功能齐全,其复盖面大,才能满足用户的各种需要。

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玉米优良自交系愈伤组织基因枪转化的研究

利用基因枪将Bt基因导入玉米E28幼胚愈伤组织中，在潮霉素浓度为5mg／L选择培养基上，经过35天的继代和分化2次选择及45天继代连续3次选择后分化再生成植株。PCR及Southem分子杂交结果表明，潮霉素基因及Bt基因已导入并整合到玉米基因组中，E282次选择的转化频率达到7．8％，显著地高于3次选择2．9％的转化频率，选择至再生的时间缩短25天；自交系Pal372次选择的转化频率为13．3％，显著高于3次选择的转化频率（9．3％），选择至再生时间缩短30天。部分转化植株已经结实。

建立社会主义市场经济体制为党校教育事业的发展注入了新的活力

目前,社会上有种议论,认为建立社会主义市场经济体制,必然会冲击党校教育事业的发展。我认为这种观点是站不住脚的,恰恰相反,社会主义市场经济为党校教育事业的发展增加了新的动力。第一,社会主义市场经济呼唤马克思主义的新发展,迫切需要建设有中国特色的社会主义理论作指导。而党校是研究、宣传当代中国的马克思主义——建设有中国特色社会主义理论的阵地,能够为发展社会主义市场经济提供马克思主义的指导。