水貂阿留申病病毒分子生物学研究进展

水貂阿留申病病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1、NS2)。VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用。该病毒的分子生物学诊断技术主要有核酸杂交技术、PCR和基因芯片检测技术。

貂阿留申病病毒结构蛋白VP1基因分子特征分析

目的研究貂阿留申病病毒（ADV）结构蛋白vPl基因分子空间结构特征，探讨貂阿留申病病毒致病机制。方法根据Genbank公布的全基因序列设计三对引物，PCR扩增并克隆到pMD．18T载体，阳性重组质粒鉴定、测序验证，拼接后进行生物信息学分析。结果获得了全长2064bpVP1基因，编码688个氨基酸；与细小病毒属中PPV—Nanjing 200801相似性最大（51．2％）；遗传进化树显示该基因编码蛋白与细小病毒属VP1亲缘关系最近。该蛋白是一种保守不合信号肽的外膜蛋白，具有7个潜在的N．糖基化位点和34个磷酸化位点。二级结构分析显示无规则卷曲含量最高，达68．75％，a螺旋、B折叠分别为16．42％和14．83％；同源建模比对，构建了具有较高合理性和可靠性的三维空间结构。结论预测抗原表位主要位于肽链第254-265、96-112、317-348、514-523、629-645位区段，可为今后开展基因工程疫苗研究奠定基础。

酶标兔抗鸡IgG的制备

无菌采健康鸡心脏血 ,辛酸—硫酸铵法提取血清IgG ,SephadexG2 5柱层析 ,SDS -PAGE电泳检测IgG纯度 ,分光光度计测定含量 ,透析袋浓缩。与福氏完全佐剂和不完全佐剂乳化后 ,免疫 4只雄性健康家兔 ,1 0d心脏采血。用同样方法纯化兔IgG。过碘酸钠氧化法标记辣根过氧物酶 ,即得酶标兔抗鸡IgG。

水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白研究进展

水貂阿留神病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(VP1、VP2、NS1、NS2)。VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用。为此,综述了国内外关于水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白的研究情况,以期为该病的进一步研究提供参考。

表达猪圆环病毒2型Rep蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定

猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来新发现的引起断奶仔猪多系统衰弱综合征的主要病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap)。为了探究ORF1基因结构及其与功能的关系,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将PCV2的ORF1基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTMDual中,获得重组转移载体pFBD-ORF1,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,经蓝白菌落筛选获得含有ORF1基因的重组穿梭载体rBacmid-ORF1,经脂质体介导转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rAc-Rep,SDS-PAGE和Western-blotting分析可见大小约为36ku的特异性条带,表明rAc-Rep在sf9中成功表达了PCV2Rep蛋白。

新型牛肉干生产工艺的研究

通过对牛肉干传统生产工艺及其它工艺的研讨,提出了新的牛肉干生产加工工艺方法——利用注射、滚揉、初煮、复煮、微波干燥、二次调味等手段来生产牛肉干产品。该加工工艺设备简单,易于扩大生产而且产品口感好、卫生方便。

阿留申病毒强致病性毒株非结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据Genbank公布的全基因序列设计两对引物,利用PCR扩增技术,得到阿留申病毒非结构蛋白基因ADV-LN1、ADV-LN2,将其克隆至pMD18-T载体中进行序列测定,并与其它国内外毒株的非结构蛋白进行序列比较和分析。序列分析表明,同国外毒株相比核苷酸序列同源率NS1为87.8%～99.1%,NS2为87.7%～98.5%,NS3为85.4%～99.2%;氨基酸序列同源率NS1为82.5%～98.0%,NS2为81.6%～96.5%,NS3为78.2%～98.9%;与国内毒株相比核苷酸序列同源率NS1为91.5%～93.8%,NS2为93.0%～94.7%,NS3为93.5%～96.6%;氨基酸序列同源率NS1为87.4%～89.9%,NS2为87.7%～90.4%,NS3为88.5%～94.3%。系统进化树分析表明:国内流行毒株之间与欧美毒株之间,差异逐渐缩小,遗传变异趋势更加复杂。

猪流感分子流行病学及免疫预防研究进展

猪流感是世界性流行的呼吸系统传染病之一,当与其他病原混合感染时会造成更严重的损害。它的免疫机制主要为黏膜免疫和体液免疫,滴鼻和肌肉注射都能产生高效的免疫应答。当前流行的猪流感病毒亚型主要为H1N1、H1N2和H3N2,常用的疫苗都是灭活苗。因为猪流感病毒亚型较多、抗原易发生变异和可在种间传播,给流感疾病的预防乃至人类的健康带来很多挑战。核酸疫苗、合成肽苗和基因工程苗的研究为猪流感的预防提供了广阔前景。

水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。

水貂阿留申病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、敏感检测水貂阿留申病毒(AMDV)的方法,本研究根据AMDV的VP2基因保守区设计特异性引物和MGB探针,并优化检测反应条件,建立了AMDV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×10~2拷贝/μL^1.0×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数(R^2)为0.998。该方法仅对AMDV的靶基因扩增呈阳性,而对猪细小病毒、犬细小病毒、水貂肠炎细小病毒等相关病毒检测结果均为阴性,特异性良好。该方法对AMDV检测的灵敏度为10拷贝/μL,为普通PCR灵敏度的100倍;组内和组间重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。应用建立方法和普通PCR方法分别对40份疑似临床组织病料样品进行检测,该方法检出率比普通PCR高约7.5%。本研究结果表明建立的AMDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于对AMDV的快速定量检测。