容量敏感的有机渗透分子和阴离子通道与细胞容量调节

维持细胞容量相对恒定是生物进化过程中逐渐形成的一种调节能力。容量敏感的有机渗透分子和阴离子通道广泛存在于人、动物和植物细胞中,并对氯离子具有选择性。该通道参与细胞容量调节,在调节性容量减少过程中发挥主要作用。

SB431542对人羊膜上皮细胞上皮间质转化的影响

目的探讨通过添加TGF-β抑制剂SB431542控制人羊膜上皮细胞的干性、表型和间质特性,为SB431542在预防人羊膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用提供依据。方法使用不同浓度SB431542培养P2代人羊膜上皮细胞,通过细胞的增殖曲线和基因水平(CK8、ACTA2、OCT4和KLF4)表达的差异,筛选出最适浓度。以不加SB431542的细胞为对照组,以加最适浓度的SB431542为实验组,比较不同代次的对照组和实验组的细胞倍增时间,基因表达水平(CK8、CK19、OCT4、KLF4、Vimentin、ACTA2),流式检测细胞表面标志物(CD146、CD105、SSEA4)和免疫荧光检测细胞蛋白表达情况(CK8、ACTA2、EpCAM)的差异。结果使用不同浓度SB431542培养P2代人羊膜上皮细胞,5μmol/L SB431542培养条件下的细胞增殖曲线最优,且基因水平(CK8、ACTA2、OCT4和KLF4)表达最优,最终筛选最适药物浓度为5μmol/LSB431542完成后续实验。在5μmol/L SB431542培养条件下,P7代实验组的细胞倍增时间优于对照组;P7代实验组细胞的CK8、CK19、KLF4、OCT4的表达水平明显高于对照组细胞的表达水平,实验组的ACTA2(α-SMA)和Vimentin表达水平明显低于对照组细胞的表达水平;P3和P5代细胞的实验组的间充质标志物CD146、CD105的表达量均比对照组的低,实验组干细胞标志物SSEA4的表达量均比对照组的高;P7代实验组的CK8和EpCAM表达效果强于P7代对照组细胞,且P7代实验组的α-SMA基本不表达。结论5μmol/LSB431542在人羊膜上皮细胞体外培养7个代次以内可以有效地抑制其上皮间质转化的发生。

差速离心法联合聚乙二醇6000富集脂肪间充质干细胞来源的外泌体

目的探讨通过聚乙醇6000(PEG 6000)富集分离外泌体,优化改善外泌体的分离产量。方法使用不同浓度PEG 6000分离外泌体,通过Western blot检测CD63的蛋白表达情况,筛选出最适浓度的PEG 6000。以差速离心法分离出的外泌体为对照组,以最适浓度PEG 6000分离出的外泌体为实验组,比较两者之间的外泌体粒径、数量,蛋白水平(CANX、CD81、TSG101)的表达情况和miRNA(miR-133b和miR-124-3p)的表达情况。结果使用不同浓度PEG 6000分离外泌体,12%PEG 6000分离出的外泌体产量最多,最终筛选最适PEG 6000浓度为12%完成后续实验。12%PEG 6000分离的外泌体和差速离心法分离出的外泌体作比较,前者的外泌体产量为1.35×10^8个/ml培养基,后者的外泌体的产量为6.8×10^7个/ml培养基。从蛋白水平(CANX、CD81、TSG101)的表达情况来看,同体积上样量和同蛋白上样量,PEG 6000分离的外泌体的蛋白表达水平远高于差速离心法分离出的外泌体。从miRNA(miR-133b和miR-124-3p)的表达情况来看,PEG 6000分离的外泌体的miR-133b和miR-124-3p表达水平远高于差速离心法分离出的外泌体。PEG 6000分离出的外泌体并不会影响成纤维细胞对其进行摄取,而且PEG 6000分离出的外泌体的产量远比差速离心分离出的外泌体的产量多。结论12%PEG 6000分离出的外泌体的产量优于差速离心法分离出的外泌体,且不影响外泌体的稳定性。