青蒿琥酯及神经酰胺对肝星状细胞增殖、胶原生成及MMP13表达的影响

目的:探讨青蒿琥酯及神经酰胺对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)增殖以及胶原生成/分泌的影响,从诱导基质金属蛋白酶13(MMP13)表达这一环节探讨其抗肝纤维化的机制。方法:分离大鼠原代HSCs,传代培养活化后,将其分为实验组和对照组,实验组以青蒿琥酯(终浓度为125、150、175、200、225μmol/L)、神经酰胺(终浓度为10μmol/L)作用24、48、72 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法测定MMP13的表达。结果:与细胞对照组相比,青蒿琥酯各浓度组及神经酰胺组作用24、48、72 h的吸光度值均降低(P<0.01),且对HSCs的抑制作用呈剂量-效应和时间-效应关系;均能有效降低HSCs上清液中Hyp含量(P<0.01),且呈剂量-效应关系;均可促进MMP13的表达(P<0.01),且呈剂量-效应关系。结论:青蒿琥酯及神经酰胺抗肝纤维化的可能机制是抑制肝星状细胞的增殖,减少胶原的生成/分泌,促进MMP13的表达,从而促进胶原的降解,使细胞外基质减少,抑制纤维化发生。

青蒿琥酯对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究青蒿琥酯对肝纤维化大鼠肝组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及Ⅰ型胶原表达的影响,探讨青蒿琥酯对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:Wistar大鼠随机分为6组:正常组、模型对照组、青蒿琥酯低、中、高剂量组(3.2 mg/kg、9.6 mg/kg、28.8mg/kg)及马洛替酯阳性对照组(53.1 mg/kg),每组10只大鼠。牛血清白蛋白(BSA)免疫性大鼠肝纤维化模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,连续2个月至实验结束。酶谱法测定肝组织MMP-2,MMP-9的表达;Western blotting检测肝组织Ⅰ型胶原与MMP-13的表达。结果:(1)肝组织Ⅰ型胶原的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Ⅰ型胶原含量增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Ⅰ型胶原含量均降低(P<0.05)。(2)肝组织基质金属蛋白酶的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织MMP-2、MMP-9表达增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织MMP-2、MMP-9表达均降低(P<0.01),MMP-13表达升高(P<0.01)。结论:青蒿琥酯可能通过降低肝组织MMP-2、MMP-9的表达,增加MMP-13的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。

测定生物样本中神经酰胺含量的HPLC-FLD法

目的:建立高效液相色谱-荧光检测器分析生物样本中的神经酰胺。方法:神经酰胺及预处理样本在1 mol·L-1氢氧化钾乙醇溶液中沸水浴反应2 h脱酰基,再与邻苯二甲醛衍生试剂反应60～90 s,采用Kromasil C18(250 mm×4.5 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(90∶10),流速1.0 mL·min-1,荧光检测器的激发波长和吸收波长分别为340 nm和455 nm,进样量50μL。结果:神经酰胺浓度在0.05～6.4μg·mL-1范围内与衍生物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),回收率为93.2%～107.5%,RSD<7.6%。结论:本方法具有快速、准确、灵敏度高、稳定性好等优点,适用于生物样品中微量神经酰胺的检测。