黄芪多糖通过影响Ca^(2+)调节蛋白及其复合体促进大鼠小肠隐窝上皮细胞迁移

目的观察黄芪多糖对大鼠小肠隐窝上皮IEC-6细胞迁移过程中多胺信号通路Ca^(2+)调节指标的影响,并探讨黄芪促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法采用划痕法建造细胞迁移模型并观察黄芪多糖在无钙培养时对细胞迁移的影响;采用qPCR法检测经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)、基质交感分子(STIM)1、STIM2 mRNA表达;采用免疫荧光法检测STIM1蛋白的分布及表达;采用蛋白质印迹法检测TRPC1、STIM1和STIM2蛋白表达;采用免疫沉淀法检测STIM1/TRPC1、STIM1/STIM2蛋白复合体的表达。结果无钙培养(去除胞外Ca^(2+)内流来源)减弱了黄芪多糖促进细胞迁移的作用(P<0.01)。黄芪多糖能提高TRPC1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)、逆转二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的TRPC1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01);黄芪多糖能促进STIM1向胞膜移位并提高其表达水平,改善DFMO所致的STIM1向胞膜移位延迟及表达抑制;黄芪多糖能提高STIM1 mRNA和蛋白表达、逆转DFMO对STIM1 mRNA和蛋白表达的抑制(P<0.05或P<0.01);黄芪多糖能降低STIM2 mRNA和蛋白表达,逆转DFMO对STIM2 mRNA和蛋白表达的提高(P<0.05或P<0.01)。黄芪多糖能提高STIM1/TRPC1的表达水平,逆转DFMO对STIM1/TRPC1表达的抑制,还可通过提高复合体中STIM1表达水平、降低STIM2表达水平调节STIM1/STIM2表达,并能拮抗DFMO对STIM1/STIM2表达的影响。结论黄芪多糖促进IEC-6细胞迁移的作用与其影响Ca^(2+)调节蛋白及蛋白复合体表达有关。

人参多糖对肠上皮屏障的增强作用及其机制

目的观察人参多糖对大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)渗透性、黏附连接蛋白表达及细胞钙离子(Ca^(2+))水平的影响,探讨益气健脾中药人参肠黏膜保护作用机制。方法设置不同实验条件[正常含钙培养、含钙培养+二氟甲基鸟氨酸(DFMO)、无钙培养]以观察人参多糖的作用;Transwell小室酚红透过法检测细胞间渗透性;Western blotting法检测黏附连接蛋白(E-cadherin、α-catenin和β-catenin)表达;激光共聚焦显微镜观察细胞Ca^(2+)水平。结果①正常含钙培养时,人参多糖(40、80、160 mg·L^(-1),下同)能降低细胞间渗透性、提高E-cadherin、α-catenin和β-catenin表达及细胞Ca^(2+)水平(P<0.05或P<0.01);②含钙培养+DFMO负荷时,细胞间渗透性增加、E-cadherin和α-catenin表达及Ca^(2+)水平降低(P<0.05或P<0.01),人参多糖可改善DFMO所致的细胞间渗透性增加、E-cadherin和α-catenin表达及Ca^(2+)水平降低(P<0.05或P<0.01);③无钙培养可致细胞间渗透性增加及E-cadherin、α-catenin和β-catenin表达降低(P<0.05或P<0.01),人参多糖可改善无钙培养所致的细胞间渗透性增加及E-cadherin和α-catenin表达下降(P<0.05或P<0.01)。结论人参多糖具有增强肠上皮屏障的作用,其机制与提高细胞Ca^(2+)水平及黏附连接蛋白表达有关。

党参、甘草糖提取物对小肠上皮细胞迁移多胺信号通路的影响

目的观察益气健脾中药党参、甘草的糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移过程多胺介导钾通道激活信号通路的影响,探讨党参、甘草促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法在IEC-6细胞迁移模型上,于正常或抑制多胺(加入DFMO)时,观察党参、甘草糖提取物对该信号通路的作用:(1)Western blot检测钾通道蛋白Kv1.1蛋白表达;(2)流式细胞仪检测细胞膜电位;(3)激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^(2+)水平;(4)Western blot检测Ca^(2+)下游指标RhoA蛋白表达。结果党参、甘草糖提取物在细胞迁移过程可以:(1)提高Kv1.1蛋白表达水平,改善DFMO所致Kv1.1蛋白表达下降;(2)提高细胞膜电位超极化水平,逆转DFMO所致细胞膜电位去极化;(3)提高细胞内Ca^(2+)水平,党参糖提取物可逆转DFMO所致Ca^(2+)水平降低;(4)提高RhoA蛋白表达水平,改善DFMO所致RhoA蛋白表达降低。结论党参、甘草糖提取物促进IEC-6细胞迁移的作用机制与其影响多胺介导钾通道激活信号通路有关。

白术黄芪汤及其单药提取部位组方对溃疡性结肠炎的治疗作用

目的探讨白术黄芪汤(DAA)益气健脾作用的物质基础。方法DAA以原方配伍水提,煮沸浓缩至相当于药材1500g.L-1;DAA单药提取部位组方(PEAAG)以组成DAA的3个单药白术、黄芪和甘草提取部位白术糖复合物(AMPS-Ⅱ)、黄芪总皂苷(TSA)和甘草总黄酮(TFG)以4∶3∶3比例混合,加蒸馏水混匀研磨配成储存液,含提取物100g.L-1。用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,造模d2分别灌胃给予DAA(相当于药材15g.kg-1)和PEAAG(含提取部位0.3g.kg-1)连续15d,肉眼观察大鼠结肠病变并进行组织病理学检查。用TNBS制备小鼠结肠炎模型,于d2分别灌胃给予PEAAG及其3个组成部位(剂量均为0.2g.kg-1)连续10d,观察结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。用一次最大耐受量实验观察DAA和PEAAG的小鼠急性毒性。结果与模型对照组比较,PEAAG组结肠的肉眼和组织病理学评分均降低,DAA组变化不明显。PEAAG和AMPS-Ⅱ可降低TNBS致小鼠结肠炎结肠组织MPO的活性,PEAAG作用更明显,TSA和TFG作用不明显。DAA和PEAAG一次最大耐受量分别为60g.kg-1和4g.kg-1,相当于临床用量的180倍和300～600倍。结论单药提取部位组方PEAAG对溃疡性结肠炎具有较好的治疗作用,在所观察的剂量条件下可能优于原方DAA和3个提取部位,且毒性未增加。

鸟氨酸脱羧酶表达水平与溃疡性结肠炎病变时相的关系

【目的】观察鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平与不同时相溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠病理变化的关系。【方法】Wistar大鼠60只,随机分为正常组(12只),模型1、2、3组(各16只),以90 mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)结肠注射复制UC模型,分别于实验第10、20、30天处死模型1、2、3组大鼠,正常组于第30天处死;分别对各组大鼠结肠进行大体和组织病理学评分,并采用免疫组化法检测结肠ODC的表达。【结果】随着实验周期的延长,模型大鼠结肠病变从急性炎症、组织坏死向慢性炎症、溃疡修复进展,ODC在正常结肠粘膜低表达,在溃疡形成、组织坏死阶段的表达略高于正常组,在溃疡修复、细胞大量增生时ODC表达明显增强,在病灶修复处于稳定阶段时ODC表达有所回落。【结论】不同时相UC模型大鼠结肠ODC表达变化特点与结肠病理变化特点相符。

造模时间对大鼠腺胃癌发生的影响

造模时间对大鼠腺胃癌发生的影响＊李茹柳陈蔚文贝美莲１徐勤１钟庭机１王建华劳绍贤（广州中医药大学脾胃研究所、１病理教研室，广州５１０４０７）１９９６－０９－０６收稿，１９９７－０４－０５修回＊“八五”国家科技攻关项目８５－９１９－０１－０１；国家人事部...

紧密连接蛋白occludin和claudin-1在大鼠溃疡性结肠炎的表达

【目的】观察溃疡性结肠炎模型大鼠紧密连接蛋白occludin、claudin-1表达情况及其与结肠病变的关系。【方法】采用三硝基苯磺酸(TNBS)复制大鼠溃疡性结肠炎模型,于实验周期的第10、20、30天分3组(即模型1、2、3组)处死大鼠,另设正常对照组,以大鼠结肠occludin、claudin-1表达(免疫荧光法)、结肠大体和病理评分为主要检测指标。【结果】随着实验周期延长,模型组结肠大体和病理平均评分逐渐降低,occludin表达平均评分先降低后回升,但均低于正常组;occludin表达与其结肠大体和病理评分均呈负相关(P<0.05)。claudin-1表达平均评分呈降低→上升→再降低,但均与正常组比较接近;claudin-1表达与其大体和病理均无显著相关性(P>0.05)。【结论】溃疡性结肠炎大鼠occludin表达降低,且与其结肠病变呈负相关;occludin表达改变比claudin-1更显著。

厚朴滴丸不同处方配比对止泻作用的影响

目的探讨厚朴滴丸不同处方配比对止泻作用的影响。方法采用小鼠番泻叶致泻模型观察该方不同配比的止泻作用,并以均匀设计方法用于筛选最佳处方配比的研究。结果厚朴滴丸处方配比中考虑古方用量同时结合实际提取率的样品止泻效果最好;理论优化的结果与厚朴丸原方的用量比较接近,厚朴∶黄连∶木香∶干姜(3.5∶3∶0.75∶1)。结论采用合适的药效模型,结合中医药理论的指导,配合数学方法处理分析结果,可为临床应用和新药开发提供参考。

造模因素对TNBS致大鼠溃疡性结肠炎模型的影响

目的：探讨造模因素对三硝基苯磺酸（TNBS）致大鼠溃疡性结肠炎的影响。方法：①SD大鼠以4种造模方案观察动物体重和TNBS剂量对大鼠死亡率和结肠病变的影响，即大鼠180～200g，TNBS100mg／kg；大鼠210～250g，TNBS90mg／kg；大鼠240～280g，TNBS85mg／kg；大鼠200～220g，TNBS50mg／kg。实验周期均为15d。②Wistar大鼠观察实验周期对结肠病变的影响：大鼠210～260g，TNBS90mg／kg，实验周期为10、20、30d。结果：SD大鼠4个方案的死亡率、结肠肉眼观察平均分值分别为90．0％，5．9；70．0％，5．1；18．2％，4．3；25．0％，4．0。③Wistar大鼠实验周期10d：死亡率18．8％，结肠肉眼观察平均分值5．2，组织病理学平均分值7．8；实验周期20d分别为12．5％、4．3、6、5；实验周期30d分别为18．8％、3．5、5、6。结论：动物的种属、体重、TNBS剂量、实验周期等都是模型的影响因素。推荐造模方案SD大鼠体重220～240g，TNBS剂量50～60mg／kg；Wistar大鼠体重220～240g，TNBS剂量80～90mg／kg；死亡率控制在20％以内比较合适。

不同中医证型的吞酸证食管压力测定临床分析

以食管压力测定的方法研究吞酸证的病理变化及中医证型特点。对 4 7例吞酸证进行辨证分型 ,肝胃不和型占 4 8.9% ;脾虚型占 12 .8% ;肝郁脾虚型占 38.3%。结果吞酸证食管动力异常以低动力出现率最高 ;高动力出现率最低 ,且都出现在肝胃不和型 ;动力不协调主要出现在肝郁脾虚型和脾虚型。提示吞酸证的病理机制与食管动力改变有关。食管动力异常以低动力为主 ,个别实证患者有高动力的表现 ,动力不协调主要出现在有脾虚表现的证型 。

党参和甘草糖复合物对IEC-6细胞迁移和膜电位的影响

目的观察党参糖复合物和甘草糖复合物对小肠上皮细胞IEC-6迁移和细胞膜电位的影响,探讨益气健脾中药党参和甘草促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法在正常或钾通道抑制剂4-氨基吡啶(4-AP)负荷下,分别加入党参和甘草糖复合物(25~200 mg·L^(-1))与IEC-6细胞培养24 h,相差显微镜下观察细胞迁移数,流式细胞仪检测细胞膜电位。结果与细胞正常对照组比较,党参和甘草糖复合物(50和100 mg·L^(-1))可提高细胞迁移数(P<0.01,P<0.05)。与正常对照组比较,4-AP可减少细胞迁移数(P<0.01);与4-AP模型组比较,党参和甘草糖复合物(50~200 mg·L^(-1))可逆转4-AP所致的细胞迁移抑制(P<0.01)。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,党参和甘草糖复合物(50 mg·L^(-1))可提高细胞膜电位(P<0.01),增加细胞膜超极化水平;与正常对照组比较,4-AP模型组细胞膜电位降低(P<0.01),增加细胞膜去极化水平;与4-AP模型组比较,党参和甘草糖复合物(100和200 mg·L^(-1))可逆转4-AP所致的细胞膜去极化(P<0.01)。结论党参和甘草促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制,可能与其糖复合物影响小肠上皮细胞迁移的多胺介导钾通道激活信号通路有关。

加味左金丸抗胃粘膜损伤作用的实验研究

加味左金丸系左金丸加一味理气止痛中药组成,已往实验证实其有明显抑制胃液分泌、减少胃酸流量和抗溃疡作用。本文进一步报道其抗胃粘膜急性损伤的作用。实验动物取SD系雄性大白鼠,体重170—230g。加味左金丸水提液取饮片水煎,浓缩成含生药1kg/L。

厚朴丸方中单味药药效学研究

目的 :观察厚朴丸方中两种单味药厚朴和干姜的止泻、镇痛和利胆作用。方法 :番泻叶致小鼠腹泻模型 ,冰乙酸致小鼠扭体模型 ,大鼠胆汁分泌法。结果 :厚朴和干姜均有止泻和镇痛作用 ,干姜还能增加大鼠胆汁分泌。厚朴起效剂量 0 .0 75 g～ 0 .3 g/kg ,达到 5 0 %抑制率的剂量 0 .3 4g～ 0 .63 g/kg ;干姜起效剂量 0 .15g～ 0 .6g/kg ,达到 5 0 %抑制率的剂量 0 .17g～ 0 .92 g/kg ,促进胆汁分泌给药 3 0～ 180分钟均有明显效果。结论 :与厚朴丸全方的药效结果相似 ,方中的单味药厚朴和干姜CO2 超临界提取物具有明显的止泻。

厚朴丸镇痛作用的量效和时效研究

目的 :观察厚朴滴丸和胶丸镇痛作用的量效及时效关系。方法 :冰乙酸小鼠扭体法。结果 :厚朴滴丸和胶丸的镇痛最佳剂量均 0 .15 g/kg ,黄连素为 0 .2 2 5g/kg ,三药的扭体次数抑制率分别为 75 .0 %、65 .8%和 77.5 % ;厚朴滴丸和胶丸给药后 10分钟起效 ,黄连素为 2 0分钟 ,三药镇痛药效均能持续至给药后 160分钟。结论 :厚朴滴丸和胶丸镇痛作用具有用量少 ,见效快 ,持续久的特点 ,在减少用药剂量和加快起效时间上优于黄连素。

左金丸方证相应动物模型建立的回顾及其对方证研究的意义

通过综述左金丸和反左金方证相应动物模型建立的过程,提示方证研究思路要以“因证识药”、“因证论效”、“方证对应”、“方因证立”等理论指导,将辨证论治的中医药理论与药效学研究有机结合,使方药研究具有中医特色,为方证相应理论研究提供参考依据。

53例脾胃虚实证患者食管压力变化分析

为探讨脾胃虚实证患者证型与食管动力改变的关系，对５３例胃、食管疾病患者进行辨证分型和食管压力测定研究。结果：有３９例检出食管动力异常，检出率７３６％。食管高动力的检出率肝胃不和型为４０％，明显高于肝郁脾虚型（１０％）；动力不协调的检出率又以后者（５５％）明显高于前者（２７％），两项比较均为Ｐ＜００５。低动力检出率两型比较差异无显著性意义。结论：肝胃不和型与肝郁脾虚型的食管动力异常特点存在明显差异，食管高动力主要出现在肝胃不和型。

左金丸加味抗胃粘膜损伤作用的实验研究

预先以加味左金丸(含黄连、吴茱萸等)6g/kg剂量灌服大白鼠,能明显减轻由氢氧化钠、阿斯匹林和盐酸乙醇引起的胃粘膜损伤。盐酸乙醇损伤模型进行的量效关系实验显示,左金丸加味 1、2、4、8g/kg剂量组的溃疡指数抑制率分别为42.90、45.58、91.18、97.12％,剂量与治疗效价之间显著相关(r=-0.88,P<0.05),ED_(50)为 3.5g/kg。结果提示加味左金丸具有较强的抗胃粘膜急性损伤的作用。

吞酸证患者食管动力学临床研究

目的:研究吞酸证患者食管动力的病理变化及中医证型特点。方法:将72例患者吞酸证进行辨证分型,有61例作食管3小时pH监测,43例作食管压力测定。结果:实证肝胃不和型的胃食管反流程度大于虚实夹杂证的肝郁脾虚型。食管动力异常以低动力出现率最高;高动力出现率最低,且都出现在肝胃不和型;动力不协调主要出现在有脾虚的证型。结论:反流程度可能是衡量吞酸证邪实轻重的指标之一;脾虚可能是动力不协调产生的原因之一。

肠易激综合征直肠肛门压力变化及中医证型分析

目的:探讨肠易激综合征直肠肛门压力变化情况以及与中医证型的关系。方法:对56例肠易激综合征患者进行辨证分型和直肠肛门压力测定。结果:肝郁型27例,脾虚型8例,肝郁脾虚型21例,肝气郁结是本病的重要病机。有大便溏烂症状的患者较多见直肠肛门压力测定指标的异常。腹泻、便结腹泻交替的患者可出现肛门括约肌静息压、直肠感觉阈值、直肠最大耐受量等指标的改变。脾虚患者有直肠感觉阈值的改变。结论:肠易激综合征患者直肠肛门压力检测结果与患者大便异常的类型关系较大,中医证型间的差异相对较小。