眼眶弥漫大B细胞淋巴瘤裸鼠模型的建立

背景近年来眼眶淋巴瘤的发病率逐渐升高，在病理特点、治疗方法以及发病机制方面的研究不断深入。由于眼眶淋巴瘤发病率低，体外培养困难，眼眶淋巴瘤裸鼠模型研究的报道较少。目的应用细胞系pfeiffer建立弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）眼眶裸鼠模型，比较小鼠淋巴瘤模型与人眼眶DLBCL病理标本的病理学特点及生物学行为，探讨全身DLBCL细胞系pfeiffer用于眼眶淋巴瘤研究的可能性。方法选用SPF级BALB／c裸鼠10只和nod—SCID小鼠5只，先用137Cs对BALB／c裸鼠（吸收剂量为3．5Gy）和nod—SCID小鼠（吸收剂量为2．6Gy）进行照射，照射后6h内分别进行小鼠眼眶内（BALB／c小鼠4只眼）及皮下注射（BALB／c小鼠和nod—SCID小鼠各4只眼）pfeiffer细胞，接种细胞密度约为1．5×10^8／ml，即眼眶接种组和皮下接种组。注射后每日观察肿瘤的生长状态，并绘制肿瘤生长曲线。于注射后54d无菌条件下完整取出小鼠眼眶肿瘤和皮下肿瘤及附近淋巴结，制备4μm厚组织切片。采用苏木精一伊红染色评估肿瘤的组织病理学特点，采用免疫组织化学法检测模型肿瘤切片中CD20、CD79α、CD45RO蛋白的表达，并根据CD10、BCL-6和mum-1的表达进行分型，依据Ki-67及survivin的表达判断肿瘤的预后，并将模型小鼠的检测结果与人眼眶DLBCL病理标本的特点进行比较。结果眼眶接种组和皮下接种组成瘤率均为100％，nod-SCID小鼠的肿瘤生长速度快于BALB／c裸鼠。组织病理学检查可见眼眶接种组小鼠邻近淋巴结无肿瘤细胞浸润，皮下接种组小鼠腋窝淋巴结少量肿瘤细胞浸润。苏木精-伊红染色显示，小鼠淋巴瘤组织的组织病理学特点与人眼眶DLBCL标本一致。BALB／c小鼠CD20表达强度〈50％和≥50％的淋巴瘤模型中表达例数分别为3和5，CD79α分别为2和6，CD45RO分别为8和0；nod—SCID小鼠CD20表达强度〈50％和≥50％的淋巴瘤模型中表达例数分别为1和3，CD79μ分别0和4，CD45RO分别为4和0；与人眼眶DLBCL标本的1和2，1和2，2和1比较，差异均无统计学意义（均P=1．00）；BALB／c和nod—SCID小鼠淋巴瘤模型与人眼眶DLBCL中Ki-67和survivin表达的例数差异均无统计学意义（均P=1．00）。BALB／c小鼠、nod—SCID小鼠淋巴瘤模型和人眼眶DLBCL中依据CD10、BCL-6和mum-1的表达均分为非生发中心来源型。结论采用pfeiffer细胞系接种法可成功建立眼眶和皮下DLBCL的小鼠模型，这些模型肿瘤在生物学行为、病理学特点和免疫组织化学染色方面均一致。Nod—SCID小鼠较BALB／c小鼠接种后肿瘤生长更快。