等温扩增技术在水产品寄生虫检测中的应用研究进展

水产品中寄生虫可引起食源性疾病,已成为影响食品安全的重要因素之一。近年来,基于传统分子生物学发展而来的等温扩增技术以其恒温、高效、耗时短、不过度依赖设备和仪器等优点,逐渐应用于分子诊断和疾病检测。该文在介绍等温扩增技术原理与特点的基础上,综述了其在水产品中寄生虫检测方面的应用研究进展,提出存在问题与解决办法,并展望了等温扩增技术的应用前景,以期为快检技术在水产品质量安全控制技术中的研究开发提供理论参考。

上海市养殖水产品及环境中副溶血性弧菌的流行、毒力及耐药性分析

为了解上海市养殖水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)污染、毒力、血清型、耐药性及遗传关系。2020—2021年,采集上海市不同养殖场中南美白对虾、草鱼、鲫鱼、河蟹及养殖水和底泥,参考GB 4789.7—2013分离V.parahaemolyticus,采用PCR法特异性扩增tlh、tdh、trh和pirA基因,多重PCR检测血清型,微量肉汤稀释法检测耐药性,肠杆菌基因间重复序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence,ERIC)-PCR分析V.parahaemolyticus遗传关系。结果表明,234份样本中V.parahaemolyticus总污染率为30.8%,南美白对虾污染最严重(78.4%)。V.parahaemolyticus污染受季节温度影响,夏季污染率最高(51.4%)。V.parahaemolyticus均未检出毒力基因,血清群呈多样分布,O1群占优势(66.7%)。72株V.parahaemolyticus对氨苄西林和磺胺甲恶唑100%耐药,对头孢唑啉和红霉素耐药率高于70%,对复方新诺明耐药率为18.1%。对亚胺培南、头孢噻肟、头孢吡肟、氯霉素和卡那霉素中介耐药/耐药率低于5%。ERIC-PCR聚类群组分散,遗传多样性高。该研究结果为上海市养殖水产品的质量安全提供数据支撑。

重组酶等温扩增技术在分析检测中的应用研究进展

重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与重组酶介导扩增(recombinase aided amplification,RAA)是新型核酸等温扩增技术中极具代表性和前沿性的2项技术。RPA与RAA技术均可在常温下进行等温扩增,还可在简单设备甚至低资源环境下实现快速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、检测时间短等优点。该文在简述RPA与RAA技术扩增原理的基础上,重点阐述了主要针对重组酶等温扩增技术在分析检测中的应用研究进展,提出存在问题与解决办法,并对其未来发展前景予以展望,以期为拓展2项技术的应用领域提供理论参考。

金黄色葡萄球菌RAA-LFD快速检测方法的建立与应用

靶向金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)保守基因(nuc)序列设计特异性引物,经引物筛选和反应条件的优化,建立金黄色葡萄球菌的重组酶等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)结合侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)的快速检测方法。该方法在引物浓度200 nmol/L、33℃反应20 min即可实现靶标基因片段的有效扩增。特异性分析结果表明RAA-LFD方法检测金黄色葡萄球菌与其他常见致病菌菌株间不存在交叉反应,灵敏度分析结果表明RAA-LFD方法检测金黄色葡萄球菌的检出限为4 fg/μL(DNA)与1.83×10^(2) CFU/mL(纯菌液)。用人工污染牛奶样品验证RAA-LFD方法的可靠性,结果显示在增菌6 h时,RAA-LFD方法可检测到1.83×10^(1) CFU/mL金黄色葡萄球菌。分别采用微生物生化鉴定法、PCR法与RAA-LFD方法对64份牛奶样品进行金黄色葡萄球菌检测,结果表明,RAA-LFD方法与微生物生化鉴定法总符合率为95.3%,与PCR法总符合率(98.4%)表现出较高的一致性。本研究建立的可视化检测方法具有特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单、检测结果直观、对仪器设备要求低等特点,为牛奶中金黄色葡萄球菌的检测提供新的发展方向。