模拟炎性环境下强直性脊柱炎患者MSC的基因表达

【目的】研究炎性环境下强直性脊柱炎(AS)患者间充质干细胞(MSC)中的全基因组表达谱基因的表达情况。【方法】首先从AS患者骨髓腔中分离培养MSC并利用流式技术鉴定细胞特定表型;然后利用TNF-α(10 ng/m L)和IFN-γ(10 ng/m L)刺激模拟炎症环境;接着分别提取不同条件刺激下AS患者和正常人MSC中RNA并进行RNA质控;然后行全基因组基因芯片分析,并应用GO分析法和KEGGPathway分析法分析其中的差异表达基因和寻找相关信号通路;最后利用q RT-PCR方法验证上述基因芯片中筛选出的关键差异表达基因真实性。【结果】全基因组基因芯片分析结果显示炎性模拟环境培养下AS-MSC中差异表达基因数量明显增加,GO分析结果显示这些差异表达基因中,56.1%与生物学活动相关,28.99%与分子功能相关,14.91%与细胞构成相关。Kegg-Pathway分析结果显示这些差异表达基因主要与TLR信号通路和MAPK信号通路这两条通路密切相关,其中TLR信号通路包含8个差异表达基因,MAPK信号通路包含14个差异表达基因。q RT-PCR验证结果显示基因表达与基因芯片结果符合。【结论】炎性模拟环境下,AS-MSC中的差异表达基因数量明显增加,并且这些差异表达基因主要以TLR信号通路和MAPK信号通路为主。

Toll样受体在强直性脊柱炎患者MSC中的作用研究

目的研究强直性脊柱炎(AS)患者间充质干细胞(MSC)中的Toll样受体表达及其对MSC免疫调节的调控作用。方法首先利用流式细胞分析的方法鉴定AS患者骨髓腔中分离培养MSC是否满足特定细胞表型;然后利用RT-PCR的方法检测AS患者MSC中的Toll样受体表达情况;接着分别应用q RT-PCR检测AS患者MSC中TLR3和TLR4的表达水平;最后分别用特定激动剂激活TLR3和TLR4后,利用ELISA检测AS患者MSC中IL-6的分泌情况。结果 AS患者MSC不表达CD34、CD45和HLA-DR,表达CD29、CD90和CD105;RT-PCR结果显示ASMSC表达TLR1、2、3、4、5、6、8,几乎不表达TLR7、9、10;q RT-PCR显示AS患者MSC中TLR3较正常人降低47.5%,TLR4较正常人降低了34.8%;TLR3和TLR4激活后,AS患者MSC中IL-6的分泌较前增加,分别增加了8.3倍13.8倍。结论 AS患者MSC中TLR3和TLR4表达和功能均异常,在AS患者MSC免疫调节中起重要的调控作用。

TLN1-PI3K/AKT通路调控骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨Talin1在骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)成骨分化中的作用及其调控机制。方法诱导MSC成骨分化后通过qRT-PCR及Western blot检测TLN1的表达变化,在MSC中敲低TLN1后采用CCK-8检测细胞增殖能力改变,利用ALP活性检测及茜素红染色观察成骨分化变化情况。通过Western blot实验研究TLN1在MSC成骨分化过程中参与的分子机制。结果qPCR及Western blot结果提示,TLN1在成骨分化过程中表达上升;siRNA敲低TLN1表达后,MSC增殖无明显差异,ALP活性及矿化结节定量较对照组下降(P<0.05)。Western blot结果显示敲低TLN1表达后p-AKT表达下降,回补实验证明激活PI3K-AKT表达可回复MSC的成骨分化能力。结论诱导MSC成骨分化后TLN1表达逐渐上调,敲低TLN1后通过PI3K-AKT通路抑制骨髓间充质干细胞成骨分化。