烟草源高产淀粉酶菌株的分离鉴定、发酵条件优化及固体淀粉酶制剂的制备

该研究从分离自植烟土壤的具有产淀粉酶能力的20株细菌和17株真菌中筛选高产淀粉酶的菌株,结合形态学观察、生理生化试验和分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,通过单因素试验对其产酶条件优化,并通过澄清、分离纯化制备固体淀粉酶制剂,研究其稳定性。结果表明,筛选到1株高产淀粉酶的菌株MK10163,其被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其最佳产酶发酵条件为发酵时间44 h,发酵温度35℃,装液量50 mL/500 mL,摇床转速200 r/min,初始pH 6.0。在此条件下,淀粉酶活力为(224.63±7.34)U/mL,较优化前提高34.21%。通过1%氯化钙和1%磷酸氢二钠澄清和2倍体积的体积分数为95%乙醇醇沉,将沉淀冷冻干燥后得到固体淀粉酶制剂,其在储存60 d时仍具有91.12%的相对酶活,表明其具有较强的稳定性。

癌症差异蛋白质组学研究中样品分离和鉴定分析技术

随着人类基因组测序的完成,癌症研究的重点从基因组学转移到蛋白质组学研究中。癌症研究中的差异蛋白质组学技术也飞速发展,包括癌症样品制备、分离,蛋白质鉴定分析、蛋白质组定量研究和翻译后修饰研究等。这些技术极大地推动了与癌症相关的差异蛋白质组学研究,使蛋白质组学在癌症早期诊断、治疗,监测以及发现新药物治疗靶标方面发挥更大的作用。本文主要综述了近年来癌症差异蛋白质组学研究中样品分离和鉴定分析技术。

真核细胞质膜蛋白质组研究进展

细胞膜(质膜)蛋白质是细胞的“门铃”与“门户”,是许多药物的作用靶标。细胞质膜蛋白质组的研究正成为蛋白质组研究的热点,这方面的研究有利于具有重要功能的低丰度蛋白质的发掘, 为药物研发和疾病的诊断提供靶体与标记蛋白质。然而,质膜蛋白质组的研究在强疏水性跨膜蛋白质和低丰度膜蚩白质的分离和鉴定上遇到了方法学的挑战。本文对质膜及其微区的纯化、质膜蛋白质组的分离与鉴定、生物信息学,以及亚细胞定位研究的近期进展作扼要介绍。

荷载与环境共同作用对混凝土氯离子渗透性的研究进展

钢筋混凝土常作为负荷结构用于道路、桥梁、隧道等工程中,然而由于氯离子的侵蚀,导致混凝土过早劣化。在实际环境中,混凝土构件在遭受氯离子侵蚀时,常要受到荷载和环境因素的影响。基于此,总结了近年来国内外荷载(持续荷载、疲劳荷载)和环境因素(干湿循环、冻融循环、碳化、其他腐蚀介质)共同作用下混凝土氯离子渗透性的研究进展,并评述了他们研究中存在的问题及不足,为今后的进一步研究提出一些建议。

肝再生过程中肝窦内皮细胞膜蛋白质组学研究的可行性探讨

学术背景:肝再生是关系到肝移植、肝切除的重要病理生理过程,部分肝切除术后肝再生过程涉及血管新生的证据已经得到证实。目的:回顾肝再生的研究背景,综合分析开展肝再生过程中肝窦内皮细胞膜蛋白质组学研究的可行性。检索策略:由熊力、李选文联机检索CHKD(www.chkd.cnki.net)和PubMed(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/)数据库1994-01/2007-07有关肝再生过程中肝窦内皮细胞膜蛋白质组学方面的文献,关键词(中文或其他语言)为"肝再生;肝窦内皮细胞;亚细胞蛋白质组;膜蛋白;肝移植"。获得相关中英文文献64篇,初筛后排除研究目与课题无关及内容重复的研究,保留39篇文献进一步分析。未发表的文献存档备用。文献评价:①文献来源情况:随机对照试验15篇,循证医学系统综述5篇,汇总分析14篇,经验交流5篇。②评价人:熊力。资料综合:有关肝再生的信号通路研究较多,目前认为存在两条通路,但蛋白质层面的机制尚待研究。肝窦内皮细胞是具有重要功能的非实质细胞,然而有关肝窦内皮细胞在肝再生中作用的研究较少,也未见关于肝再生过程中肝窦内皮细胞膜蛋白质组学的研究报道。结论:目前有关肝再生过程中肝窦内皮细胞膜蛋白质组学的研究报道极少。作者首次提出肝窦内皮细胞可能是肝再生瓶颈的假想,认为开展肝窦内皮细胞膜蛋白质组学的相关研究对于肝切除、肝移植具有重要意义。

非机动车出行特性与影响因素研究

非机动车行驶环境恶劣和行车安全得不到保障,阻碍了非机动车交通的发展,降低非机动车在城市出行中的分担率。论证了发展城市非机动车的必要性以及今后的发展方向。对昆明市非机动车的出行特性进行分析,结合非机动车出行影响因素进行比较,为城市非机动车的发展决策提供参考。

纤维素酶在烟草中的应用进展

卷烟原材料的品质是决定卷烟好坏的基础,不同地区卷烟原材料的纤维素、果胶、糖分和烟碱等主要成分不同,制约了工业企业的发展。为解决不同地区原材料参差不齐等问题,已有研究在利用生物酶技术降解纤维素等大分子及烟碱等化学成分方面已取得了一定的进展。主要概述了纤维素酶及其复合酶制剂在烟草应用中的研究进展,分析了其对片烟、烟梗、再造烟叶和烟草浸膏产生的影响,旨在为工业企业利用生物酶发酵烟叶和卷烟生产提供参考。

质膜及其微区的蛋白质组学研究进展

质膜蛋白质由于低丰度和强疏水性等特点,给其提取、溶解、分离以及鉴定带来了很大的困难,因此使质膜蛋白质组学研究成为蛋白质组学研究中的难点和热点.以哺乳动物细胞质膜为例,主要从质膜及其微区的富集、溶解、分离、鉴定方法等方面介绍了细胞质膜及微区蛋白质组以及复合物的研究进展.

思茅松毛虫关键龄期幼虫肠道可培养细菌多样性分析

【目的】对思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)关键龄期幼虫肠道可培养细菌多样性进行研究,探索其肠道细菌资源及多样性,为深入研究昆虫肠道微生物功能及思茅松毛虫的种群管理打下基础。【方法】采用传统微生物分离培养法对采集自云南省安宁市草铺镇林区的思茅松毛虫1、4和7龄幼虫进行肠道细菌分离纯化,对分离获得的细菌进行16S rDNA序列同源性分析,初步判定其分类学地位并进行多样性分析。【结果】从思茅松毛虫幼虫肠道中共分离得到291株细菌,隶属于15属31种,其中1龄幼虫肠道98株细菌隶属于9属13种,4龄幼虫肠道102株细菌隶属于6属12种,7龄幼虫肠道91株细菌隶属于6属9种。在31个细菌种中,芽孢杆菌属(Bacillus)最多,共有9个种,占总种数的29.03%,其次是肠杆菌属(Enterobacter)和葡萄球菌属(Staphylococcus)各有4个种,分别占总种数的12.90%。13个1龄幼虫肠道细菌种中,葡萄球菌属、肠杆菌属和芽孢杆菌属的相对分离率分别为27.54%、21.43%和21.43%,高于其他菌属的平均分离率(5.31%);12个4龄幼虫肠道细菌种中,芽孢杆菌属的相对分离率为72.53%,高于其他菌属的平均分离率(5.49%);9个7龄幼虫肠道细菌种中,克雷伯氏菌属(Klebsiella)和肠杆菌属的相对分离率分别为43.96%和18.68%,高于其他菌属的平均分离率(9.34%)。思茅松毛虫1龄幼虫肠道细菌的优势度指数、丰富度指数和Shannon-Weiner指数均最大,分别为0.9032、2.6172和2.4310,7龄幼虫肠道细菌的均匀度指数最大,为0.9634。【结论】思茅松毛虫1、4和7龄幼虫肠道可培养细菌群落组成和结构丰富,具有丰富的细菌资源。

安宁思茅松毛虫6龄幼虫肠道可培养细菌的多样性研究

为给思茅松毛虫的综合防治提供参考措施,以安宁地区思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)6龄幼虫为对象,采用纯培养法对其肠道细菌进行分离纯化,并进行形态特征观察及生理生化指标测定,对菌株进行初步鉴定,再结合16S rDNA分子鉴定技术进行分析,初步判定细菌的分类学地位,研究其肠道细菌的多样性。结果显示:从6龄思茅松毛虫幼虫肠道中共分离到104株细菌,初步鉴定隶属于10个属14个类群,分别为55株芽孢杆菌属(5个类群)、9株类芽孢杆菌属(1个类群)、2株苍白杆菌属(1个类群)、5株短芽孢杆菌属(1个类群)、4株微球菌属(1个类群)、6株莫拉菌属(1个类群)、8株栖水菌属(1个类群)、2株土壤芽孢杆菌属(1个类群)、7株葡萄球菌属(1个类群)、6株普罗威登斯菌属(1个类群)。其中芽孢杆菌属具有最高的相对分离率,为53.00%。6龄幼虫肠道细菌的Shannon多样性指数、Simpson优势度指数、Margalef丰富度指数分别为2.5217、0.9129、2.7991。思茅松毛虫6龄幼虫肠道细菌的多样性丰富,芽孢杆菌属为优势菌属,这些菌种为研究思茅松毛虫综合防治奠定了基础。

思茅松毛虫成虫肠道细菌多样性

【目的】研究野外采集的思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)成虫的肠道细菌多样性,为思茅松毛虫的防治和云南松(Pinus yunnanensis)等树木的保护奠定基础。【方法】分别提取思茅松毛虫雄蛾和雌蛾的肠道总DNA,基于Illumina NovaSeq(PE250)平台运用高通量技术对肠道细菌16S r DNA基因V3~V4区进行测序和分析,分析雄虫和雌虫的肠道菌群的结构多样性。【结果】从思茅松毛虫成虫中共获得1 278个操作分类单元(OTUs),涵盖28个门75个纲173个目296个科550个属。在门水平上,雄蛾和雌蛾的优势菌为变形菌门(Proteobacteria,雌81.27%/雄81.17%);在科水平上,雄蛾的优势菌科是鞘脂单胞菌科(Sphingomonadaceae,49.16%)和丛毛单胞菌科(Comamonadaceae,19.09%),雌蛾的优势菌科是欧文氏菌科(Erwiniaceae,34.09%)和丛毛单胞菌科(Comamonadaceae,16.68%);在属水平上,雄蛾的优势菌属是鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas,48.09%),雌蛾的优势菌属是泛生菌属(Pantoea,31.58%)。思茅松毛虫雌蛾肠道细菌的物种多样性比雄蛾丰富。雄蛾肠道中丰度差异显著性最高的菌群为α-变形菌纲(Alphaproteobacteria),雌蛾肠道中丰度差异显著性最高的菌群为γ-变形杆菌纲(Gammaproteobacteria)。【结论】思茅松毛虫成虫肠道具有丰富的细菌资源。

石林石漠化地区可培养石生放线菌的多样性研究

通过对石林石漠化地区可培养石生放线菌的多样性进行研究,为推动石漠化地区生态环境恢复提供例证.实验采用高氏一号培养基对采自石林石漠化地区的40份岩石样品进行石生放线菌的分离纯化,对分离获取到的若干菌株开展形态观察、生理生化实验及其16S rDNA序列同源性分析,初步判定其种属地位.结果表明:从40份岩石样品中共分离得到65株石生放线菌,分属于1门1纲1目3科3个属11个种,其中链霉菌属(Streptomyces)具备最高的相对分离率,为90.76%,放线菌属(Actinobacterium)为1.54%,拟无枝酸菌属(Amycolatopsis)为7.70%,链霉菌属极可能是石生放线菌的优势菌群.石生放线菌的Shannon-Weiner指数为2.27629,得出石林石漠化地区石生放线菌具有丰富的多样性.

并行电缆识别技术

提出了一种在电缆的已知点的钢铠上加一音频信号、直流电压信号或测电阻的方法,即可在该电缆上任一点的钢铠上检测出该音频、直流信号或电阻值,而其它任何并行电缆的钢铠上都测不出该信号或表现出不同的阻值,从而即可将其区别开来。

饲喂抗生素前后7龄思茅松毛虫幼虫肠道细菌的变化

通过对饲喂抗生素前后7龄思茅松毛虫幼虫肠道细菌变化的研究,进一步探索肠道菌群变化对其生长发育的影响。采用传统的平板稀释涂布培养法从思茅松毛虫7龄幼虫肠道内分离纯化获得好氧细菌,对其进行多项生理生化测定,利用16S rDNA基因扩增技术对所得菌株进行多样性分析。结果显示,饲喂抗生素前获得4种不同的单菌落A1、A2、A3、A4,饲喂抗生素后获得5种不同单菌落B1(同A2)、B2(同A3)、B3、B4、B5,对获得的9株细菌进行基因序列测定,结果得到以芽孢杆菌属(Bacillus)、克雷伯菌属(Klebsiella)、赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)、微小杆菌属(Exiguobacterium)等为主的肠道细菌。其中,饲喂抗生素前所得菌为芽孢杆菌属(Bacillus)和克雷伯菌属(Klebsiella),饲喂抗生素后细菌种类多了赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)及微小杆菌属(Exiguobacterium)。说明饲喂抗生素对松毛虫肠道菌群有影响。

思茅松毛虫3龄幼虫肠道可培养细菌的多样性

采用纯培养法对采集自云南地区的思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)3龄幼虫进行肠道细菌多样性的研究,这些研究资料与菌种数据为后研究思茅松毛虫发育奠定基础。对采自安宁市的150头思茅松毛虫3龄幼虫的肠道细菌进行分离与纯化,并且对所培养菌株的进行形态特征观察及生理生化指标测定,通过这种方法对菌株进行初步的鉴定,再结合16S rDNA分子鉴定技术进行分析,判定细菌多样性。结果显示,从3龄幼虫肠道中共分离到152株细菌,初步鉴定隶属于6个属9个类群,分别为62株芽孢杆菌属(Bacillus sp.)(3个类群)、35株微球菌属(Micrococcus sp.)(2个类群)、23株葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)(1个类群)、11株链霉菌属(Streptomyces sp.)(1个类群)、12株不动杆菌属(Acinetobacter sp.)(1个类群)、9株泛菌属(Pantoea sp.)(1个类群)。其中,芽孢杆菌属具有最高的相对分离率为40.78%,为优势菌群。思茅松毛虫3龄幼虫肠道细菌的多样性丰富,通过分析细菌种类及各水平之间的相关性,为更深入研究细菌与思茅松毛虫的关系和为思茅松毛虫的防治奠定基础。

不同盐浓度对新平酸腌菜发酵过程的影响

新平酸腌菜是以叶用芥菜(leaf mustard(Brassica juncea))为原材料,酸甜适中的口味让它享有盛名。盐浓度对酸腌菜的发酵至关重要,但在实际生产中生产者主要凭经验添加,缺乏不同盐浓度对发酵过程影响的科学认识,导致最终产品安全性差、生产工艺缺乏可控性。文章采用无盐、低盐、中盐、高盐4个盐浓度处理芥菜发酵,跟踪检测发酵45天时对应的pH值、总酸含量、亚硝酸盐含量变化,并对第30天时的酸腌菜进行感官评价,探讨盐浓度对酸腌菜发酵过程及成品的影响。结果表明,随着发酵时间的变化,4个盐浓度处理的酸腌菜pH值随着时间的变化先下降而后趋于平缓的趋势,且无盐较其他盐浓度的pH值更早降到5.00以下。总酸含量随着时间的变化呈现增长的趋势,无盐处理和低盐处理的总酸含量总体增长较快,中盐和高盐处理的增长趋势较慢,且在30天时开始无盐处理的增长最快,高盐处理的增长最慢。亚硝酸盐含量呈现先下降后上升到峰值再下降而后在偏零范围内波动的趋势,其中无盐处理的亚硝酸盐含量高峰出现在第7天,其他盐浓度处理的亚硝酸盐含量高峰均出现在第9天。4个盐浓度处理的酸腌菜均在发酵30天时有发酵香味,但感官评价综合得分为无盐>低盐>中盐>高盐,但低盐处理的酸腌菜除色泽外的其他单项得分都要优于无盐处理的酸腌菜。本着低盐发酵食品有利于健康的观念,建议实际生活中食用低盐处理的酸腌菜。

盐分对新平酸腌菜主发酵期细菌多样性的影响

基于Illumina NovaSeq测序平台,选取无盐和有盐(盐度10%)腌制的新平酸腌菜,对主发酵期(前30 d)理化指标(pH、总酸、亚硝酸盐含量)变化明显的三个时间点的样品进行16S rRNA基因的V3-V4区测序,解析其细菌群落结构差异。结果表明,无盐和有盐腌制的6个酸菜样品共鉴定出22门、339属、902个操作分类单元(OTU);在门分类水平上两个盐浓度腌制的酸菜样品菌群结构组成相似,变形菌门(Proteobacteria)所占比例均>40%,处优势地位;在属分类水平上各酸菜样品中共有相对丰度较高的细菌为未分类的蓝细菌属(unidentified-Cyanobacteria)(30.02%)、水生杆菌属(Aquabacterium)(17.65%)、明串珠菌属(Leuconostoc)(19.56%);有盐腌制组的特异菌属种类较无盐腌制组多;理化指标对菌群影响大小依次为总酸>亚硝酸盐含量>pH值。总体而言,无盐与有盐腌制的酸菜细菌结构存在差异,盐分的存在主要影响优势细菌属和特异菌属的差异,进而影响酸菜的风味口感与贮存时间。

生物酶和微生物技术改善烟叶香气的研究进展

生物酶和微生物在烟叶醇化发酵过程中发挥着重要作用。目前,利用生物酶和微生物技术提高烟叶品质、改善烟叶香气,已成为烟草行业关注的热点。利用酶制剂处理烟叶可以降解烟叶的蛋白质、果胶、纤维素等生物大分子,以达到提高烟叶品质和改善烟叶香气的作用。利用微生物对烟叶进行发酵可以有效调整和改善烟叶内部化学组分的比例,增加烟叶中的香气物质。综述了生物酶和微生物技术在烟叶产香发酵中的研究进展及其在烟叶发酵机理及增香技术中的应用,重点阐述了微生物和生物酶提高烟叶香气、改善烟叶品质以及降解烟叶中蛋白质、淀粉、果胶、纤维素等大分子物质的研究现状,分析了目前微生物和生物酶在实际应用中存在的问题,以期为今后使用生物酶和微生物技术改善烟叶香气提供理论依据。

果胶酶生产及工业应用进展

果胶酶是水解酶家族成员,也是生物技术领域的重要酶,其在全球工业酶市场中所占份额约为25%。果胶酶在工业生产中应用广泛,如植物纤维的脱胶、茶和咖啡的发酵、废水处理、纸浆漂白和动物饲料生产等。在果胶酶的天然来源中,由于微生物具有独特的理化性质,最常被用以生产果胶酶。然而,与许多其他工业酶一样,果胶酶也存在野生菌株产量低、工业生产率低等制约因素,因此,目前果胶酶的研究重点主要集中在如何提高工业规模的生产水平。主要介绍了果胶酶的天然来源,以及在这些来源的基础上通过基因工程改造以获得果胶酶高效表达的最新策略,并概括总结了果胶酶发酵工艺和工业应用,以期为生产具有高活性的果胶酶,提高工业生产的效益奠定理论基础。

思茅松毛虫2龄幼虫肠道可培养细菌的多样性

以云南安宁地区思茅松毛虫(Dendrolimu kikuchii)2龄幼虫为研究对象,研究其肠道细菌多样性,以期为思茅松(Pinus kesiya var.langbianensis)等植物保护奠定基础,并为思茅松毛虫的生物防治提供数据。试验采用纯培养法对思茅松毛虫2龄幼虫肠道细菌进行分离纯化,通过对菌株形态特征观察和生理生化测定进行初步鉴定,然后结合16S rDNA分子鉴定技术判定细菌的分类学地位。结果显示,从2龄幼虫肠道中分离得到115株细菌,隶属于4个属,8个类群,分别为Enterobacter sp.、Staphylococcus sp.、Bacillus sp.、Corynebacterium sp.,其中23株肠杆菌属分为2个类群,55株葡萄球菌属分为3个类群,27株芽孢杆菌属分为2个类群,10株棒状杆菌属有1个类群。优势菌群葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)相对分离率最高(48.00%),2龄幼虫肠道细菌的Shannon多样性指数、Simpson优势度指数、Margalef丰富度指数分别为2.0526、0.8682、1.4753,说明思茅松毛虫2龄幼虫肠道细菌具有丰富的多样性。