血液保存对红细胞携氧功能及能量代谢的影响

目的探讨血液保存时间和过滤、离心等前处理操作对红细胞携氧功能及能量代谢的影响。方法取不同保存期血样用血氧分析仪检测携氧能力并同时测定葡萄糖、Na+、K+及乳酸脱氢酶等能量代谢相关指标。结果全血和悬浮红细胞的有效携氧量随保存时间延长逐渐减少,在第1周分别下降了27.5%和19.2%。到保存末期,全血的有效携氧量仅为"新鲜血"的39%,悬浮红细胞也只有采血当天的51%。P50值在保存期总体呈减小趋势,在开始2周减少较快,随后变化不明显。葡萄糖逐渐消耗;乳酸脱氢酶随时间逐渐增加,全血到保存末期为采血时的近3倍。Na+浓度呈进行性下降,K+浓度逐渐增加,到保存末期悬浮红细胞K+增加了3倍。结论血液保存时间和前处理操作等对血红细胞携氧能力及能量代谢有重要影响,过滤、离心等操作会对红细胞造成一次性损伤。

大鼠力竭运动诱导的氧化应激损伤对红细胞变形性的影响

目的:探讨一次性力竭运动诱导的氧化应激反应对大鼠红细胞的抗氧化能力和细胞变形性的影响。方法:大鼠分为3组(n=10):对照组(Control)、适度运动组(MRE)和力竭运动组(ERE)。力竭运动组大鼠运动的前20 min保持5%的坡度和20 m/min的速度,20 min后调整为15%的坡度和25 m/min的速度,直至运动力竭。适度运动组大鼠在5%的坡度和20 m/min的速度下跑40 min。检测各组大鼠红细胞的抗氧化能力,并对氧化应激反应诱导的红细胞膜蛋白巯基水平、膜脂质过氧化水平和膜蛋白SDS-Page电泳条带变化进行了分析。通过激光衍射法对不同运动组大鼠红细胞变形性进行了检测。结果:力竭运动条件下大鼠红细胞受到严重的氧化应激损伤,红细胞内抗氧化能力下降。导致膜脂质过氧化损伤和膜蛋白巯基交联为主的蛋白聚簇化,形成高分子聚合物(HMW)。力竭组大鼠红细胞变形性(0.314±0.013 at 3 Pa and 0.534±0.009 at 30 Pa)显著低于对照组(0.41±0.01 at 3 Pa and 0.571±0.008 at 30 Pa;P<0.05 and P<0.01,respectively)和适度运动组。结论:力竭运动诱导的氧化损伤导致了红细胞变形能力(EI)的显著下降,使红细胞在微循环的转运受到限制,导致组织缺血缺氧进而引起休克、死亡等运动性疾病。

血红蛋白携氧-释氧动力学研究

本文研究了鸡、家兔、鲤鱼、蟾蜍4种实验动物血红蛋白(hemoglobin,Hb)携氧-释氧动力学过程,初步建立Hb携氧-释氧动力学研究方法,并探讨Hb携氧-释氧动力学过程与动物生存环境之间的关系。结果显示:4种动物Hb携氧动力学曲线均呈"S"形曲线特征,与传统的Hb氧解离曲线(oxygen dissociation curve,ODC)相似;同时不同动物Hb携氧-释氧动力学曲线也有各自特点,如鸡Hb释氧时间长达(1411±6)s;在Hb携氧-释氧曲线I阶段,鲤鱼上升斜率远大于家兔等。提示Hb携氧-释氧动力学曲线可反映不同动物Hb携氧效率的差异。与传统ODC参数P50相对应,由动力学曲线可得到Hb携氧动力学参数T50。T50是Hb达到50%氧饱和度所需时间,可直观反映Hb携氧效率的差异。4种实验动物Hb均有较稳定的T50,从大到小依次为:鸡、家兔、鲤鱼和蟾蜍。对Hb携氧动力学曲线与ODC综合分析,可得到Hb携氧效能参数E50,E50表示Hb达到50%氧饱和度所用时间与环境氧分压之间的关系,即E50(50%Sat,XPO2,YT)。E5有可能成为全面评价Hb携氧效能的综合指标。

携氧代血浆扩容及携氧功能初步动物实验研究

目的建立大鼠重度失血性休克模型和大鼠失血性休克-肠系膜微循环模型,用以探讨携氧代血浆的扩容和携氧功能。方法将20只SD大鼠失血至全身血容量的60%,造成重度失血性休克大鼠模型后,随机均分为6%羟乙基淀粉(HES)组和携氧代血浆组做相应样品的等容量输注复苏。分别在造模前、休克、输液末以及输液后1 h观测大鼠平均动脉压(MAP)、股动脉取血测定血气,检测组织氧分压(PtO_2)。另取20只大鼠建立失血性休克-肠系膜微循环模型,观察、记录大鼠造模前基础值、休克、输液末以及输液后1 h微血管直径的变化和血流状态。结果 HES组与携氧代血浆组比较,输液末微静脉直径(μm)与微动脉直径(μm)分别为:31.23±4.96 vs 31.86±5.43、19.46±1.47 vs19.40±2.10(P>0.05),输液后血流状态均得到恢复;输液后1 h的MAP(mm Hg)为:90.70±3.83 vs 98.90±9.18(P<0.05);组织氧分压(mm Hg)为:输液末7.03±1.47 vs 15.32±2.34(P<0.05),输液后1 h 5.53±2.39 vs 8.90±2.01(P<0.05);2组大鼠血气指标在各时间点相近(P>0.05)。结论携氧代血浆能够改善大鼠失血性休克所致的微循环障碍,具有与HES相似的血管扩容作用,并且在大鼠休克复苏初期恢复组织氧分压的效果优于HES。

羟乙基淀粉加多聚人胎盘血红蛋白对失血性休克大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

目的探讨应用羟乙基淀粉(HES)溶液中添加多聚人胎盘血红蛋白(Poly Hb)对重度失血性休克大鼠模型肠缺血再灌注的影响。方法将32只SD大鼠失血至全身血容量(大鼠体重的6.5%)的60%,分别将大鼠股动静脉插管后,从股动脉端开始放血直至放血量达到大鼠全身血容量的60%,然后随机均分为4组(8只/组),包括3个人工胶体液组,即HES组:6%HES130/0.4氯化钠注射液;红细胞+HES(RBC+HES)组:将大鼠自身血液反复离心洗涤3次,留取红细胞,加入到HES溶液中,使Hb浓度达到20 g/L;Poly Hb+HES组:将Poly PHb加入到HES溶液中,使Hb浓度为20 g/L;1个假手术组:只做常规手术,不放血不复苏。将大鼠行等容量液体复苏,分别在各组大鼠休克前、后,输液末、输液后1 h、2 h观测大鼠平均动脉压(MAP)、乳酸(Lac)、氧分压(Pa O2)、二氧化碳分压(Pa CO2),并在复苏2 h取各组大鼠肠组织制备成10%组织匀浆,测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。结果 HES、RBC+HES和Poly Hb+HES 3组大鼠输液后MAP(mm Hg)分别为88.00±9.90 vs 100.57±7.69vs 112.16±17.05(P"0.05);输液后2 h,乳酸(mmol/L)分别为3.71±0.91 vs 2.30±0.97 vs 2.50±0.65(P"0.05),Pa O2(mm Hg)分别为126.5±10.40 vs 111.16±9.64 vs 111.00±13.98(P"0.05),Pa CO2(mm Hg)分别为30.00±3.16 vs 42.66±5.31 vs 34.66±1.50(P"0.05);输液后2 h,RBC+HES、HES组MDA、MPO活性,分别为:0.47±0.34 vs 0.99±0.81,0.23±0.29 vs 0.57±0.32(P"0.05);Poly Hb+HES与HES组MPO活性、TNF-α分别为0.32±0.19 vs 0.57±0.32,89.42±21.03 vs 208.45±62.80(P"0.05)。结论 HES溶液添加多Poly Hb可以改善失血性休克大鼠组织氧供和酸中毒现象,减轻肠组织缺血再灌注损伤。

输注聚合人胎盘血红蛋白对大鼠氧化损伤的初步研究

目的探讨输注不同浓度聚合人胎盘血红蛋白(Poly PHb)对大鼠造成的氧化损伤。方法建立动物换血模型,将50只SD大鼠随机均分为假手术组:仅做股动/静脉插管处理;氯化钠注射液(对照)组:股动/静脉插管,输注氯化钠注射液行换血实验;2%、4%及6%Poly PHb 3个实验组:股动/静脉插管,分别输注相应浓度的Poly PHb行换血实验。分别在大鼠换血前、换血70%后即刻观测平均动脉压(MAP),换血完成后即刻从大鼠股动脉取血0.5 m L/只,做动脉血血气分析,并检测各组大鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)浓度、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)浓度。结果 1)大鼠换血70%后,2%、4%及6%Poly PHb组与对照组相比,GSH(μmol/L)分别为33.76±14.33、47.98±21.88、39.73±15.54及10.25±5.70(P<0.01);SOD(U/m L)分别为238.07±27.39、355.73±35.42、405.26±45.01及138.46±57.16(P<0.01);T-AOC(U/m L)分别为20.50±7.87、32.65±4.38、38.03±4.50及5.40±2.22(P<0.01)。2)大鼠换血70%后,2%、4%及6%Poly PHb组与对照组相比,MDA浓度(nmol/m L)随着Poly PHb浓度的增高而增高:45.08±4.12、54.39±3.16、58.52±6.33及2.85±0.59(P<0.01)。3)大鼠换血70%后,2%、4%及6%Poly PHb组与对照组相比,大鼠血浆8-OHDG浓度(nmol/m L)未发生明显变化:2.54!0.90、2.76!0.99、2.79!0.82及2.26!0.42(P>0.05)。结论 Poly PHb对大鼠造成脂质过氧化损伤,且氧化损伤程度随着Poly PHb浓度的增高而加重,但并未对大鼠DNA造成损伤。

人源性PolyPHb-SOD-CAT的制备及其抗氧化特性的初步研究

目的通过交联血红蛋白、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶,制备具有抗氧化特性的人源性聚合血红蛋白,表征其基本理化性质,并对其抗氧化特性进行初步研究。方法使用戊二醛（GDA）交联血红蛋白（Hb）和抗氧化酶,分别通过圆二色谱和氧解离曲线分析蛋白质二级结构及血红蛋白携氧功能的变化;采用试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性;通过体外保存实验初步评估其抗氧化性。结果制备的抗氧化酶交联的聚合人脐带血红蛋白溶液Hb浓度（20±1）g/L,高铁血红蛋白浓度（Met Hb,%）（4.98±0.61）%,SOD活性（23 601.91±2 421.14）U/gHb,CAT活性（536.06±42.43）U/gHb;圆二色谱结果显示,戊二醛交联未使蛋白二级结构发生明显改变;氧解离曲线结果显示,戊二醛交联提高了血红蛋白的氧亲和力;PolyPHb-SOD-CAT与聚合人胎盘血红蛋白（PolyPHb）相比,在25℃保存期间,前者Met Hb含量更低。结论制备出具有抗氧化酶活性的PolyPHb-SOD-CAT,其蛋白二级结构发生改变氧亲和力增加,在体外实验中表现出了抗氧化特性,可作为1种具有抗氧化特性的血红蛋白类载氧体。

聚合人脐带血红蛋白对复苏失血性休克大鼠肺组织的影响

目的探讨不同浓度聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)复苏对失血性休克大鼠肺组织的影响。方法建立Wistar大鼠失血性休克控压模型:将40只健康雄性Wistar大鼠随机均分为假手术(sham)组、生理盐水(对照)组、2%、4%及6%PolyCHb组(8只/组)。sham组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管;后4组建立大鼠失血性休克控压模型,分别给予生理盐水、生理盐水加相应浓度的PolyCHb复苏。分别在大鼠放血前(基础值)、休克、液体回输后0 h(复苏后0 h)、6 h(复苏后6 h)观测各组大鼠平均动脉压(MAP)、动脉二氧化碳分压(PaCO_2)、肺氧合指数(PaO_2/FiO_2);复苏后6 h以放血法处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白含量,取肺组织,测定湿/干重比(W/D)值,另取肺组织制备成10%的组织匀浆,测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果 1)复苏后0 h,2%、4%、6%PolyCHb组与对照组的MAP(mmHg)为117.25±5.97 vs 132.00±5.98 vs 147.75±5.82 vs 101.13±6.15(P<0.05)。2)复苏后6 h,4%、6%PolyCHb组与对照组相比,MAP(mmHg)分别为114.75±5.26 vs 118.63±13.81 vs 88.38±8.00(P<0.05);2%、4%PolyCHb组和对照组的PaCO_2(mmHg)为37.62±3.62 vs 37.13±4.70 vs 25.38±4.10(P<0.05);2%PolyCHb组和对照组的PaO_2/FiO_2值为463.69±44.74 vs 403.57±59.73,BALF蛋白浓度值(mg/mL)为0.13±0.04 vs 0.23±0.06(P<0.05), MDA(nmol/mg protein)为1.17±0.11 vs 1.47±0.20,MPO(U/g tissue)为0.37±0.08 vs 0.76±0.23(均为P<0.05);2%、4%、6%PolyCHb组和对照组的SOD(U/mg protein)为2.04±0.27 vs 1.87±0.30 vs 1.63±0.10 vs 1.83±0.04(均为P>0.05)。结论具有携氧功能的低浓度PolyCHb可以减轻失血性休克大鼠肺损伤;但随着PolyCHb浓度的升高,大鼠氧化应激增强,反而加重肺损伤。

应用大鼠血液置换模型对新型携氧代血浆功效的初步实验观察

目的制备1种羟乙基淀粉与血红蛋白载氧体(HBOC)相结合的多功能携氧代血浆,并对该携氧代血浆在大鼠血液置换模型中的有效性做初步观察。方法在无菌条件下将2种HBOC样品[Ⅰ(poly-Hb-1)和样品Ⅱ(poly-Hb-2)]各20 m L与羟乙基淀粉130按照相同的配方分别制备成携氧代血浆制品样品,2组制品中Hb均为2 g/d L。30只雄性SD大鼠随机均分为羟乙基淀粉130(HES130)、poly-Hb-1+HES130和poly-Hb-2+HES130等3组,大鼠换血后除饮水和饲喂外未采取其他治疗措施,并分别于换血前、换血过程末段及换血后1 h、24 h记录MAP、Hct等生理指标,取血测定动脉血血气及全血细胞计数,并考察换血≤72 h大鼠的生存质量和存活情况。结果 HES130组、poly-Hb-1+HES130组与poly-Hb-2+HES130组比较,换血末段的MAP(mm Hg)为99±4 vs 111±3 vs 117±5(P<0.05),Hct(%)为16±2 vs 19±1 vs 17±3(P<0.05);换血后1 h的Hct(%)为17±2 vs 20±3 vs 21±2(P<0.05);换血后24 h,Hct(%)为16±2 vs 19±3 vs 20±2(P<0.05),动脉血乳酸值(mmol/L)为7.1±1.2 vs 2.3±0.4 vs 1.2±0.2(P<0.05),动脉剩余碱(BE)(mmol/L)为-5.6±2.4 vs 1.5±0.7 vs 1.9±0.4(P<0.05);换血后1及24 h的RBC(×1012/L)分别为3.10±0.23 vs 3.33±0.34 vs 3.49±0.17与2.08±0.11 vs 2.38±0.17 vs 3.23±0.17(P<0.05);换血后1 h的WBC(×109/L)为6.10±1.04 vs 7.60±0.59 vs 7.39±0.54(P<0.05);换血后24、48、72 h存活率分别为50%vs 80%vs 100%、40%vs 60%vs 90%、30%vs 40%vs 80%。结论具有携氧功能的代血浆能有效维持换血模型大鼠的MAP,其缓解代谢性酸中毒效果优于仅有HES的大鼠换血模型;这种增加携氧功能以后的代血浆能明显改善大鼠存活质量,和现有胶体代血浆相比具有明显的优势。

聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏影响初步探究

目的了解聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)复苏液对失血性休克大鼠肝脏组织的影响。方法用改良wiggers法建立大鼠失血性休克模型,将32只健康SD雄性大鼠随机均分为4组:麻醉后大鼠仅行股动/静脉插管的假手术(Sham)组,以及在行股动/静脉插管后分别用羟乙基淀粉(HES)、含20 g/L Hb(2%PolyCHb)、60 g/L Hb(6%PolyCHb)的HES做复苏液行液体复苏的3个实验组。用多通道生理记录仪监测大鼠放血前(基础值)、休克时、复苏后即刻(0 h)的平均动脉压(MAP)和心率(HR);复苏后6 h通过腹主动脉取血处死大鼠,立即检测血液中Hb、Hct、ALT和AST,并随即取右叶肝脏组织制备成10%组织匀浆,用商品化试剂盒测定活性氧簇(ROS)含量和总抗氧化能力(T-AOC),另取左叶肝脏组织固定于10%中性甲醛做病理切片并做病理损伤定性分析。结果2%及6%PolyCHb组与HES组大鼠失血性休克复苏后0 h:MAP(mmHg)分别为111±10.66 vs 132±6.09 vs 85.71±5.25(P<0.01),HR(b/min)分别为329.38±20.71 vs 282.75±48.03(P<0.05)vs 308.71±33.11(P>0.05);复苏后6 h:血液中Hb(g/L)分别为70.75±5.92 vs 84.13±9.33 vs 60.63±8.45(P<0.05),Hct(%)分别为18.75±1.68 vs 18.00±3.20 vs 18.15±2.42(P>0.05),ALT(U/L)分别为197.44±42.08 vs 162.75±44.06 vs 183.96±40.53(P>0.05),AST(U/L)分别为732.41±101.17 vs 737.86±113.90 vs 826.89±78.44(P>0.05),肝脏组织匀浆中ROS(U/ml)分别为419.84±17.76 vs 428.08±17.84(P>0.05)vs 396.21±3.72(P<0.05),T-AOC(mmol/L)分别为0.63±0.01 vs 0.60±0.02 vs 0.67±0.01(P<0.05);病理切片:2%PolyCHb组有中央内皮静脉和免疫细胞浸润方面的损伤,6%PolyCHb组有中央内皮静脉、肝窦和免疫细胞浸润方面的损伤,HES组有中央内皮静脉、内皮细胞、脂肪变性和免疫细胞浸润方面的损伤。结论中、低浓度PolyCHb复苏液和HES一样均能对危重失血性休克大鼠模型有效复苏;降低PolyCHb浓度能减轻肝脏组织在失血性休克液体复苏过程中的病理损伤。

红细胞膜带4.2蛋白的结构与功能

带4.2蛋白是一种重要的红细胞膜蛋白,与红细胞的形态、可变形性及携氧功能有至关重要的联系。它通过与带3蛋白(阴离子通道蛋白)、锚蛋白结合,稳定的连接在细胞膜的内表面,连接着膜骨架网架结构与细胞膜,是膜骨架与脂质双分子层连接的重要纽带。带4.2蛋白的缺失会引起球形或椭圆形红细胞增多症及不同程度的溶血性贫血,严重的情况需要摘除脾脏来进行治疗。近年来研究认为,带4.2蛋白在维持细胞膜骨架的完整性和稳定性方面扮演了重要角色。现对带4.2蛋白结构及功能的研究状况进行综述。

PolyCHb携氧复苏液影响失血性休克大鼠EPO表达的初步分析

目的采用PolyCHb携氧复苏液救治失血性休克大鼠,观察复苏效果并研究其对血浆EPO含量以及肾组织EPO,EPOR mRNA表达的影响,为休克复苏后氧供恢复状态及HBOCs制品开发提供评价依据。方法采用大鼠重度失血性休克-复苏模型,将64只成年雄性SD大鼠随机分为：1）假手术组：仅进行大鼠股动/静脉插管;2）PolyCHb组：大鼠股动/静脉插管,制备失血性休克模型,用PolyCHb复苏液进行复苏;3）红细胞组：用红细胞复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同;4）白蛋白组：用5%白蛋白复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同。在放血前（基础值）、休克时、复苏液回输完成（复苏后0 h）观察大鼠血压、心率变化,并进行血细胞计数;复苏后24 h和72 h分别取32只大鼠腹主动脉血,离心取血浆,测定血浆EPO含量;取大鼠肾组织,应用实时荧光定量PCR检测24h与72 h组织中EPO与EPOR mRNA的表达情况。结果 PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组复苏后0 h MAP（mmHg）分别为（122.27±17.25）vs（98.38±18.70）、（90.93±11.58）（P〈0.001）;Hb（g/L）含量分别为（78.33±3.61）、（88.50±0.71）vs（64.83±9.72）（P〈0.05）;红细胞（1012/L）数量为（3.21±0.30）vs（4.78±0.38）vs（3.23±0.40）（P〈0.05）;复苏后24 h PolyCHb组、红细胞组组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量（ng/m L）分别为（7.04±0.51）vs（2.86±0.60）vs（10.4±0.86）（P〈0.05）;肾组织EPO mRNA表达值分别为（32.43±3.25）vs（21.69±5.03）（P〈0.01）vs（35.17±17.10）（P〉0.05）;肾组织EPOR mRNA表达值分别为（0.20±0.04）vs（0.16±0.02）vs（0.24±0.05）（P〉0.05）;复苏后72 h PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量（ng/m L）分别为（1.88±0.30）vs（0.79±0.19）vs（3.10±0.51）（P〈0.05）;肾组织EPO mRNA表达值分别为（9.76±2.50）vs（7.59±1.48）（P〉0.05）、（15.27±1.67）（P〈0.05）;肾组织EPOR mRNA表达值分别（0.32±0.06）vs（0.29±0.07）vs（0.30±0.15）（P〉0.05）。结论PolyCHb用于复苏重度失血性休克大鼠,通过给缺氧组织供氧,使血浆EPO水平及肾组织EPO mRNA表达降低,但对肾组织EPOR mRNA表达无明显影响。PolyCHb可能可作为1种新型携氧体,早期纠正急性失血性休克大鼠氧供平衡。

聚合人脐带血红蛋白对大鼠心肌组织影响的初步探讨

目的探讨聚合人脐带血红蛋白(PolyCHb)对动物心肌组织的影响。方法取18只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术(Sham)组:大鼠麻醉后仅行股动、静脉插管,颈静脉及右侧颈总动脉插管;NaCl组及PolyCHb组:除同Sham组一样麻醉、插管后,分别输注生理盐水或PolyCHb(800 mg/kg);连续监测基础值、输注后0、10、20、30、60 min 3组大鼠的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、左心室收缩末期压力(pes)、左心室舒张末期压力(ped)、室内压最大上升速率(dp/dt max)、室内压最大下降速率(dp/dt min)、等容舒张时间常数(Tau)。另取18只大鼠同样分作3组,麻醉、插管后按分组做相应处理,取输后1、3、6 h血样于EDTA抗凝管中,离心取血浆,测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量,6 h时处死大鼠,取心脏做病理学检测。结果 PolyCHb组、 NaCl组与sham组比较:1)术(输)后0—60 min MAP(mmHg)及pes(mmHg)持续升高,至输注后60 min时,分别为128.50±7.26 vs 115.67±4.72 vs 106.5±14.84(P<0.05)与148.30±18.16 vs 122.83±13.57 vs 122.07±19.00(P<0.05);术(输)后HR(次/min):0 min时分别为302.83±20.76vs 371.00±43.36 vs 387.50±47.27 (P<0.05), 60 min时分别为391.50±34.26 vs 416.83±33.47 vs 431.50±33.76 (P>0.05); ped(mmHg):60 min时分别为11.34±11.58 vs 6.83±4.79 vs 8.14±4.25(P>0.05);2)dp/dt max(mmHg/s)与dp/dt min(mmHg/s)术(输)注0 min分别为6 530.50±418.63 vs 8 341.50±1 095.00 vs 8 242.17±1 579.38与5 352.83±449.02 vs 7 687.00±1 111.87 vs 7 799.50±2 246.39(P<0.05),至术(输)后60 min分别为8 139.00±758.26 vs 10 083.33±1 256.59 vs 10 032.17±1 779.30与7 457.33±915.62 vs 9 192.00±892.90 vs 9 069.50±2 104.49(P<0.05);3)Tau术(输)后0 min分别为17.01±3.72 vs 12.69±3.32 vs 12.57±2.07(P<0.05);4)CK-MB(pg/mL)术(输)后1、3 h术(输)后1、3 h时分别为63.41±13.15 vs 49.67±20.10 vs 38.20±6.02与101.88±28.08 vs 37.80±18.21 vs 37.94±10.71(P<0.05);5)cTnI(pg/mL)术(输)后3 h分别为14.61±7.03 vs 5.32±2.96 vs 5.72±2.90(P<0.05)。PolyCHb组大鼠术(输)后6 h病理检查未见心肌损伤。结论输注PolyCHb可影响心肌功能,酶学水平升高,但不会造成病理损伤。

抗坏血酸降低聚合血红蛋白输注引起的大鼠氧化损伤的初步研究

目的探讨抗坏血酸降低聚合血红蛋白输注引起的大鼠氧化损伤的效果。方法采用动物70%换血模型,将30只健康雄性成年SD大鼠随机均分为假手术组（S组）、对照组（C组）、低浓度抗坏血酸组（L组）、中浓度抗坏血酸组（M组）、高浓度抗坏血酸组（H组）,每组6只。C组、L组、M组和H组分别静脉输注2%PolyHCBH、2%PolyHCBH＋0.025%AA、2%PolyHCBH＋0.05%AA、2%PolyHCBH＋0.1%AA进行换血实验;S组仅做股动/静脉插管处理不进行换血。大鼠换血完成后记录平均动脉压（MAP）、心率（HR）,并立刻股动脉取血分析血气（PCO2、PO2、Lac、Hct、BEecf）和检测血浆中氧化损伤特征值,包括还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHDG）浓度、超氧化物歧化酶（SOD）活力及总抗氧化能力（T-AOC）。结果大鼠70%换血后：1）H组与C组相比,GSH浓度（μmol/L）显著降低：（39.16±1.76）vs（43.78±2.73）（P〈0.01）;2）抗坏血酸组与C组相比,SOD活力（U/m L）无明显改变,分别为（250.54±21.25）vs（258.36±15.59）vs（247.99±12.40）vs（243.61±15.09）（P〉0.05）;3）T-AOC随抗坏血酸浓度增加而增加,H组T-AOC较C组相比显著升高：（20.01±4.00）vs（13.09±1.58）（P〈0.01）;4）抗坏血酸组与C组相比,MDA浓度均降低,其中M、H组较对照组显著性减少：（34.10±1.18）vs（32.30±1.07）vs（36.20±0.88）（P〈0.01）;5）H组与C组相比,8-OHDG含量显著性降低：（3.86±0.45）vs（4.36±0.22）（P〈0.05）。结论抗坏血酸能有效降低大鼠脂质过氧化损伤和DNA损伤,高浓度抗坏血酸对上述损伤有显著抑制作用。

力竭运动诱导的氧化应激对大鼠红细胞Band 3蛋白的影响及其机制探讨

为了探讨力竭运动诱导的氧化应激反应对大鼠红细胞Band 3蛋白的影响,该文以大鼠跑步运动为模型,对三种不同运动条件下(静坐组、适度运动组和力竭运动组)大鼠红细胞抗氧化能力和氧化损伤程度进行了检测,并对氧化应激反应诱导的红细胞膜Band 3蛋白表达和分布情况及其调控的阴离子通道活性进行了分析。结果表明:力竭运动条件下大鼠红细胞受到严重的氧化应激损伤,红细胞内抗氧化能力下降;导致膜Band 3蛋白巯基交联为主的蛋白聚簇化反应及其阴离子转运能力的下降。Band 3蛋白的损伤将进一步诱导红细胞携氧和变形能力的下降,成为运动相关疾病的潜在致病因素。

早期诊断唐氏综合征的母体血清蛋白新标志物筛选与初探验证

目的探讨经筛选与验证的唐氏综合征（DS）相关特异性母体血清蛋白新标志物的临床应用价值。方法选取确诊为DS胎儿的孕中期（14—20周）母体血清7份（DS组）和同期正常胎儿母体血清7份（正常对照组）行二维凝胶电泳（2-DE），建立DS胎儿母体血清蛋白表达差异图谱，提取差异表达蛋白质点进行质谱分析。免疫印迹法（WB）验证部分差异蛋白的表达差异。采用近似t检验比较分析2组间相应蛋白条带的吸光度（A）值差异。结果经2-DE和差异蛋白图谱分析，在DS组母体血清中共发现表达差异1．5倍以上的蛋白质点29个，其中表达上调的19个，表达下调的10个。表达差异2倍以上的8个蛋白质点经质谱分析，从美国国立生物技术信息中心（NCBI）蛋白质序列数据库中搜索为dGTP酶（dGTPase）和B2．糖蛋白I（132．GPI）等12个蛋白质分别与之匹配的可能性较大（概率得分〉66分）。WB证实GTPase和B2-GPI的A值在Ds组分别为21567．0±3009．4和22097．0±3958．9，在正常对照组分别为3957．7±250．9和1799．7±105．5，dGTP酶和β2-GPI在Ds胎儿母体血清中比正常对照组显著高表达（t’dGTPase=-17．66，t’β2-GPI=-14．83，P均〈0．0001）。结论2-DE和质谱技术是初步筛选DS相关特异性母体血清中新蛋白标志物的有效方法，经WB验证的dGTPase和β2-GPI可能是筛选Ds的新标志物。

基于免疫荧光法对人工红细胞膜骨架蛋白spectrin的定位分析

本文建立免疫荧光方法对人工红细胞膜蛋白进行荧光定位,从膜结构蛋白角度分析本实验室构建的人工红细胞,也为血液代用品的评价提供了新的途径。以荧光标记兔抗人免疫球蛋白为抗体,采用间接免疫荧光染色法对红细胞膜蛋白spectrinα1原位标记,在激光共聚焦显微镜下以488 nm蓝光激发荧光,通过对比天然红细胞和人工红细胞的spectrin分布,分析人工红细胞的构象和重建的过程。与天然红细胞类似,人工红细胞在膜上有血影蛋白分布,本实验荧光原位标记结果进一步揭示了人工红细胞的体外构建过程。

蛋白激酶C调控脊椎生物红细胞膜骨架蛋白间亲和力的进化演变

为了探讨脊椎生物红细胞膜骨架蛋白间亲和力大小变化引起红细胞变形能力变化的进化演变。四种脊椎生物(人、鸡、蛙、鱼)的红细胞在自然状态下和经蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(PMA)孵育2 h后,利用原子力显微镜(AFM)检测各红细胞的黏弹性以及采用间接免疫荧光标记法观察各红细胞磷酸丝氨酸的荧光变化;利用生物信息学软件分析和比对各红细胞膜蛋白4.1和血影蛋白的蛋白序列。结果表明,人、鸡、蛙、鱼红细胞经PMA孵育2 h后杨氏模量显著增加,增加量分别为(0.388±0.035)kPa、(0.219±0.022)kPa、(0.191±0.036)kPa和(0.141±0.007)kPa。鸡、蛙、鱼红细胞膜蛋白4.1都存在与人所对应的312号可磷酸化丝氨酸位点且人、鸡、蛙、鱼红细胞经PMA孵育2 h后的磷酸丝氨酸荧光强度明显高于各自自然状态下的磷酸丝氨酸荧光强度。意味着鸡、蛙、鱼红细胞膜蛋白和人红细胞膜蛋白一样都能被蛋白激酶C(PKC)磷酸化,且各生物经PMA孵育2 h后杨氏模量增加量呈现出与生物进化过程一致的趋势。这种趋势在为红细胞变形能力的获得在进化角度以及分子机制上提供了基础依据。

海藻酸钙水凝胶微球悬浮液与全血的流变学性质比较

本文从红细胞形态以及红细胞压积(Hct约为45vol%)的角度出发,制备一种微球悬浮液来模拟全血的非牛顿流体性质,探索其在血液黏度质控物中的应用价值。我们采用乳液聚合法制备海藻酸钙水凝胶微球,并将其悬浮于0.9wt%的氯化钠溶液中,得到微球压积为45vol%的悬浮液样品。然后使用两种不同原理的黏度仪检测分析样品在不同切变率下的黏度变化。经显微镜观察,海藻酸钙水凝胶微球形态完整,直径近似服从正态分布,约90%的微球直径分布在6～22μm之间。用FASCO-3010型和LG-R-80c型血液黏度仪对同一样品进行检测,均显示出剪切稀化的性质。对样品进行连续5周的稳定性实验,两种仪器测得的对应样品黏度值变异系数分别为7.3%～13.8%和8.9%～14.2%。尽管样品在同一切变率下对应的结果之间存在一定差异,但不同切变率下结果的总体变化趋势是一致的,具备普遍适用于不同原理血液黏度仪校准的潜力。