以项目式学习为载体的《细胞与分子生物学研究方法》思政教育模式探究

项目式学习是通过完成项目,对学生进行有针对性的引导,从而提高学生关键能力的探究式教学模式。它是近几年兴起的通过师生共同参与,以学生为主体解决一个“真实问题”的新型教学方法。基于此,本文在立德树人的理念下对细胞与分子生物学研究方法课程教学中应用项目式教学进行了探讨,以提高学生的学习兴趣和教学效果,以供参考。

西帕依固龈液治疗糖尿病足溃疡效果及网络药理学分析

目的探讨西帕依固龈液治疗糖尿病足溃疡(DFU)可能的药效成分及作用的靶点和机制。方法取雄性SD大鼠40只,以高脂乳剂灌胃(每100 g体质量0.6 mL,每天1次,连续30 d)后,腹腔注射1%链脲佐菌素(60 mg/kg,每天1次,连续3 d),复合饱和氢氧化钠溶液腐蚀足部皮肤以复制DFU大鼠模型。26只建模成功大鼠随机分为模型组和给药组,各13只。另取10只大鼠设为空白组。治疗1,7,15 d测量大鼠溃疡面积,计算溃疡抑制率;酶联免疫吸附法检测血清表皮生长因子(EGF)含量;显微镜下观察大鼠溃疡组织形态。通过文献检索并利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)获取西帕依固龈液的活性成分及作用靶点,运用人类基因组数据库(Genecards)、药物数据库(DrugBank)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和治疗靶点数据库(TTD)获取DFU相关靶点,获取药物-疾病的交集靶点,构建“成分-靶点”网络、蛋白相互作用(PPI)网络拓扑分析图,进行基因本体论(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;对核心成分与核心靶点进行分子对接验证。结果给药7,15 d后,给药组大鼠溃疡面积明显小于模型组(P<0.05),给药15 d时给药组溃疡抑制率为58.38%;与模型组比较,给药组EGF含量明显升高(P<0.05),可见毛囊再生,脂肪细胞增多。西帕依固龈液治疗DFU可能的有效成分有6个,主要为鞣花酸、没食子酸、没食子酸甲酯等;PPI网络包括29个交集靶点,平均Degree值9.66,获得9个中心节点,主要有TP53,VEGFA,CASP3等;富集分析结果表明,西帕依固龈液治疗DFU的靶点主要参与NF-κB及PI3K-Akt等信号通路;核心成分与核心靶点的结合能均小于0 kcal/mol。结论西帕依固龈液对DFU有一定抑制作用,可能通过多成分-多靶点-多通路共同作用实现。

灰绿藜和碱蒿NHX基因3'-UTR序列的差异性分析

采用3'末端快速扩增技术,分别从新疆野生盐生植物灰绿藜和碱蒿中克隆CgNHX和AaNHX cDNA3'末端。测序结果表明克隆获得的片段为CgNHX和AaNHX基因3'末端,并且CgNHX和AaNHX3'-UTR的不同拷贝之间存在很大的差异性。序列同源性分析结果显示,AaNHX基因3'-UTR与CgNHX基因3'-UTR同源性高达52%,两者与SsNHX(碱蓬NHX)同源性分别达到60%和54%,表明NHX基因的加工方式可能相同,同时说明该基因在野生盐生植物中的功能是很重要的。

植物分子水平的耐盐机制

从盐过敏感调控途径、离子分室效应、胁迫反应转录因子及胁迫对基因表达的调控等方面综述了植物的抗盐机制 。

家蚕天蚕素cDNA原核表达及抗菌活性检测

采用RT PCR方法从家蚕Bombyxmori新疆品种新蚕三号组织中扩增天蚕素cDNA片段 ,回收并克隆至pMD18 T载体 ,进行序列分析。基因序列分析结果与已发表的天蚕素B的序列同源性为 98% ,表明所克隆的新疆家蚕天蚕素cDNA为独特的cDNA片段。将天蚕素基因与pGEX 4T 1融合表达载体中的谷胱甘肽转移酶基因融合 ,在大肠杆菌中表达 ,结果表明经IPTG诱导 30min后 ,pGEX 4T 1 天蚕素转化后的大肠杆菌生长明显受到抑制 ;当诱导 2 10min后 ,大肠杆菌数量又开始增加 ,逐渐恢复至正常水平。说明天蚕素与谷胱甘肽转移酶基因融合表达后 ,在IPTG存在的短时间内仍然对原核细胞有较强的抗菌抑杀作用。

采用RT-PCR扩增方法从犁苞滨藜中扩增NHX基因

采用RT PCR扩增的方法 ,从新疆野生植物犁苞滨藜中克隆获得 1.7kb的cDNA片段 ,测序和序列分析表明该基因片段包含NHX基因完整的读码框架。序列同源性分析结果显示犁苞滨藜NHX基因与滨藜NHX基因同源性高达 95 % ,与碱蓬同源性达到 86 % ,与柑桔同源性为 88% ,与拟南芥同源性为 84 % ,表明它是植物中高度保守的一种基因 。

抗冻蛋白研究进展(英文)

很多越冬的生物会产生抗冻蛋白,这些抗冻蛋白能够吸附到冰晶的表面改变冰晶形态并抑制冰晶的生长.抗冻蛋白在很多生物体内都被发现,不同的抗冻蛋白结构差异非常大.目前的一些研究揭示了几种抗冻蛋白的结构,并提出了抗冻蛋白与冰晶的结合模型,但是还没有一种机制能解释所有抗冻蛋白的作用机理.抗冻蛋白能被广泛的应用到农业、水产业和低温储藏器官、组织和细胞,利用转基因技术提高植物的抗冻性具有重要应用价值.而抗冻蛋白基因的表达调控则有待进一步阐明.

在胡杨NHX基因内发现细菌转座子IS10-L的存在

采用RT PCR扩增的方法 ,从新疆不同地区的野生植物胡杨中分别克隆获得 1kb和 2 3kb的cDNA片段 ,测序和序列分析表明这两个基因片段均包含NHX基因的部分读码框架 ,分别命名为PtNHX和PwNHX。PtNHX序列同源性分析结果显示胡杨NHX基因与滨藜NHX基因同源性高达 98% ,与碱蓬同源性达到 86 % ,与拟南芥同源性为 84 % ,与水稻同源性为 80 % ,表明它是植物中高度保守的一种基因 ,同时说明野生植物胡杨中也存在与拟南芥相似的植物耐盐相关基因。PwNHX序列分析表明 ,该基因内部含有一种转座酶的读码框 ,大小约 135 0bp ,与已发表的Shigellaflexneri.转座子Tn10基因序列 (AF16 2 2 2 3)同源性为 99%。NHX基因的蛋白产物在植物的耐盐性方面起着重要的作用。推测PwNHX由于插入转座酶读码框可能会导致该基因的功能丧失。胡杨生存于盐碱地 ,其体内可能存在另一些机制使胡杨具有抗盐碱的能力。对于这些机制的研究可能有助于进一步了解植物的抗盐机制。利用PwNHX基因内的转座子作基因标签 ,可进一步研究胡杨的其它基因 ,从而有可能揭示胡杨叶子发育的变态过程、耐盐碱等性状。

单引物方法克隆盐角草orf25基因

采用单引物RT PCR扩增的方法 ,从新疆野生植物盐角草 (Salicorniaeuropaea)中克隆获得了 1.7kb的cDNA片段 ,经过测序和序列分析 ,发现基因片段包含了orf2 5基因完整的读码框架。采用序列同源性分析方法 ,结果显示新疆盐角草orf2 5基因与甜菜线粒体同源性高达 98% ,与烟草线粒体同源性达到 95 % ,与小麦同源性为 92 % ,与玉米同源性为 88% ,表明orf2 5基因在植物中是高度保守的一种基因 ,同时说明野生植物盐角草中也存在与农作物相似的雄性不育相关基因 ,orf2 5基因编码的功能性蛋白可能在影响植物雄性不育改良作物品种方面具有重要的意义。

大肠杆菌Na^+/H^+反向运输体A基因的克隆及序列分析

为研究细菌的耐盐机理 ,根据细菌中存在的Na+/H+反向运输体 (nhaA)的基因序列 ,采用PCR扩增的方法 ,从大肠杆菌 (Escherichiacoli)DH5α中克隆获得了 1 1kb的DNA片段 ,经过核酸序列分析 ,发现基因片段包含了nhaA基因完整的读码框架。采用序列同源性分析方法 ,结果显示nhaA基因在多种细菌中均存在 ,表明nhaA基因是细菌中普遍存在的一种能够反向运输Na+的基因 ,与细菌的耐盐性有着密切的关系 。

拟南芥AtNHX2启动子的克隆及表达模式分析(英文)

AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员 ,编码了一种液泡膜中的Na+ /H+ 反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用 .采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约 2 8kb的DNA片段 ,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA130 1 1中 ,通过基因枪轰击洋葱表皮瞬时表达的方法 ,初步检测启动子的活性 .将重组质粒pCAMBIA130 1 1/AtNHX2promoter转化拟南芥并筛选纯合子 .AtNHX2promoter GUS分析显示AtNHX2在所有的组织中均有表达 ,包括根尖 .在保卫细胞中检测到了强烈的GUS表达 ,这一结果表明 ,AtNHX2对特殊细胞的pH调控和K+ 自身稳定方面起着重要的作用 .AtNHX2启动子的活性可被NaCl抑制 ,并且抑制的强度和NaCl的浓度成正相关 .30 0mmol/LKCl处理可增强启动子的活性 ,说明NaCl和KCl是在转录水平上调控AtNHX2的表达 .在老叶中GUS活性比在新叶中GUS活性强 ,这说明了AtNHX2优先将有毒的离子积累在老叶中 ,从而有利于植物的正常发育 .在根毛细胞中也观测到了强烈的GUS活性 ,这就暗示了AtNHX2在扩大的液泡中储存Na+ .

柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠行为学及脑区5⁃HT2A、BDNF表达的影响

目的探讨柴胡疏肝散对卒中后抑郁大鼠行为学及额前皮质与纹状体区5-HT2A、BDNF表达的影响。方法大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、柴胡疏肝散组、氟西汀组、联合用药组,每组9只,采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞模型,术后给予慢性不可预见的温和刺激造模4周,结束后分别灌胃给予生理盐水5 mL/kg、柴胡疏肝散2 mg/kg、氟西汀12.5 mg/kg、柴胡疏肝散2 mg/kg+氟西汀12.5 mg/kg,每天1次,连续4周。实验期间测定各组大鼠体质量,并行行为学(糖水偏好实验、旷场实验及Morris水迷宫实验)评定。实验结束处死大鼠后,采用RT-qPCR法检测额前皮质与纹状体区5-HT2A、BDNF mRNA表达,免疫组织化学染色法检测大鼠额前皮质与纹状体区5-HT2A、BDNF的阳性细胞表达,Westren blot法检测额前皮质与纹状体区5-HT2A、BDNF蛋白表达。结果与空白组比较,模型组抑郁样行为未见改善,5-HT2A及BDNF mRNA表达、阳性细胞表达、蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,柴胡疏肝散组、氟西汀组和联合用药组大鼠抑郁样行为改善,5-HT2A及BDNF mRNA表达、阳性细胞表达、蛋白表达升高(P<0.01)。结论柴胡疏肝散可改善卒中后抑郁大鼠的抑郁样行为,其机制可能与增加额前皮质与纹状体区5-HT2A、BDNF表达有关。

大肠杆菌nhaB基因的克隆及序列分析

采用PCR扩增的方法 ,从大肠杆菌DH5α中克隆获得了 1 5kb的Na+ H+ 反向运输体DNA片段 ,经过测序和序列分析 ,发现该基因片段包含了nhaB基因完整的读码框架。采用DNA序列同源性分析方法 ,结果显示大肠杆菌DH5αnhaB基因与E coliK12nhaB基因同源性高达 99% ,与E coli 0 15 7:H7和Shigellaflexneri的同源性均为 98% ,与Salmonellaenterica的同源性为79 % ,表明nhaB基因在细菌中是普遍存在的一种Na+ H+ 反向运输体基因。nhaB基因与大肠杆菌的耐盐性有着密切的关系 。

新疆3种藜科盐生植物NHX基因的克隆与序列分析比较

从新疆野生植物盐角草(Salicorniaeuropaea)、盐爪爪(Kalidiumfoliatum)和盐穗木(Halostachyscaspica)中分别克隆了约1.7kb的NHX基因cDNA片段,此片段均包含了NHX完整基因,三者之间有较高的同源性,盐角草NHX基因与盐爪爪NHX基因同源性达92.81%,盐角草与盐穗木同源性达92.19%,盐爪爪与盐穗木同源性达97.66%。它们与其它几种藜科盐生植物如滨藜、碱蓬、灰绿藜的NHX基因同源性也很高,达到80%以上,与拟南芥同源性也达到86%。此基因在植物尤其是藜科盐生植物中高度保守,其编码的功能性蛋白可能在影响植物耐盐中起作用。

农杆菌介导NHX基因转化甘蓝型油菜的研究

以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体，通过根癌农杆菌EHA105（Agrobacterium tumefaciens）介导将盐地碱蓬（Suaeda heteroptera）的Na^＋／H^＋反向运输体基因NHX导入新疆主栽油菜1khp11品系中，获得了抗卡那霉素的再生植株，并对影响遗传转化的一些关键因素进行了研究。结果表明，带柄子叶在含有2，4-D的培养基上经过3d预培养后于浓度OD600为0．3，0．4的菌液中浸染7min，卡那抗性绿苗率可达8％-9％，经过对抗性植株的PCR检测、点杂交及PCR-Southern杂交证明外源基因已整合到油菜基因组中，为新疆盐碱土上油菜产量的提高提供了新的途径。

低温胁迫对春小麦和冬小麦叶片游离脯氨酸含量变化的影响

研究比较了新疆春小麦喀什白皮和冬小麦新冬22号两个品种在低温胁迫下生长状况及脯氨酸积累的差异。结果表明:4℃低温冷驯化3 d后再于-3.5℃胁迫24 h,小麦两个品种的生长状况出现了明显的差异。新冬22号叶片在低温胁迫中没有受到损伤,而喀什白皮叶片则出现了倒伏现象。4℃低温胁迫4 h后,新冬22号叶片的脯氨酸积累显著增加,而喀什白皮叶片的脯氨酸含量在4℃低温胁迫48 h才开始积累。新疆两个小麦品种的脯氨酸积累对低温胁迫的响应存在显著差异,也说明冬小麦品种新冬22号抗寒性显著高于春小麦喀什白皮,为小麦抗寒品种的培育提供了理论依据。

甘草及其有效成分对免疫系统调节作用研究进展

甘草是一种补益中草药,含有多种有效成分,随着分离、纯化技术的发展,多种有效成分被分离、鉴定。大量的研究证明甘草粗提物及其有效成分对免疫系统具有调节作用,包括免疫增强和免疫抑制;对免疫细胞的成熟状态及活性也具有显著的影响;部分研究对这些有效成分的作用机理进行了探讨,本文对近期的相关研究进展进行了总结。

“以人为本”价值下区域协调发展战略的内涵与维度研究

党的十九大确立新时代中国特色社会主义思想,实施区域协调发展战略,具有丰富的理论内涵和鲜明的时代特征。本文从区域协调发展战略的现状描述与分析入手,基于"以人为本"的价值目标,释析了区域协调发展战略的基本认识和研究进路,围绕着"五位一体"、"三元互动"、"公平效率"三个维度阐明了区域协调发展战略的核心内容、内在关系和基本路径。

胡杨Na^+/H^+反向运输载体(PeNHX2)基因的克隆与序列分析

植物液泡膜上Na+/H+反向运输载体(Na+/H+antiporterNHX)已被证明在盐胁迫中发挥关键作用,该研究旨在从胡杨中克隆获得耐盐相关的的完整cDNA序列,为进一步比较胡杨的耐盐基因的差异,探讨胡杨的耐盐分子机理奠定了基础,并为通过转基因手段提高木本植物的耐盐能力提供侯选基因。根据已发表NHX的同源基因序列,采用特异性引物扩增核心片段,并结合5’与3’RACE技术,成功地从胡杨(populus euphratica)克隆获得PeNHX2,其cDNA全长1638bp。测序和序列分析结果表明该基因与已发表毛白杨(Populus tomentosa)PtNHX基因在核酸水平及蛋白质水平上同源性均达到最高,依次为90.6%和88.25%。利用DNAMAN软件进一步分析得知,该基因与新疆盐生植物中所克隆获得的的犁苞滨藜(Atriplex dimorphostegia)AdNHX1、灰绿藜(Chenopodium glaucum)CgNHX1、盐爪爪(Kalidium foliatum)KfNHX同源性也较高,核酸水平上依次为75.1%、74.8%、74.3%,蛋白质水平依次为78.3%、79.0%、78.3%。PeNHX2与NCBI已注册的部分PeNHX1序列,在核酸或蛋白质水平同源性(72.34%和73.72%)均较低,分析它们可能同属于胡杨NHX基因家族,相关生物学功能有待于进一步研究。

胡杨(Populus euphratica Oliv)的耐盐性

文章对胡杨耐盐性的研究进展进行了介绍。