CT-1及TTC的GST融合蛋白表达质粒的构建及表达

目的构建心肌营养素-1(CT-1)和破伤风外毒素C片段(TTC)重组融合蛋白表达质粒。方法利用PCR、TA克隆等技术将CT-1及TTC基因克隆并连接到pGEX-4T-3,再做酶切鉴定、序列测定。在不同温度不同时间,通过IPTG诱导pGEX-CT-1/TTC在DH5α大肠杆菌中表达,SDS-PAGE分析表达量和可溶性蛋白GST-CT-1/TTC比例。结果构建的pGEX-CT-1/TTC酶切结果可见606 bp1、356 bp大小的片段,与预期结果一致,测序结果表明序列正确。通过IPTG诱导,发现35℃诱导4 h,目的蛋白GST-CT-1/TTC表达量占全菌的1/5,可溶性蛋白与包涵体比为2/5。结论本实验成功构建了pGEX-CT-1/TTC重组融合质粒,为下一步将其用于脊髓损伤的治疗研究打下了基础。