四种牦牛乳的氨基酸含量及评分对比

本研究收集测定了泌乳期麦洼牦牛高产奶选育群常乳中的氨基酸含量,通过查阅文献资料,与中甸牦牛、祁连牦牛、美仁牦牛三种牛乳中的氨基酸含量和必需氨基酸评分进行对比分析。结果表明,麦洼牦牛乳中的氨基酸含量均高于普通牛乳,组氨酸含量高于其他三种牦牛乳,必需氨基酸组成比例较好,是优质的牛乳产品。

DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立:技术改良分析

背景:国际上研究肝移植免疫耐受的基础动物模型是大鼠肝移植急性排斥反应模型,国际上公认的肝移植急性排斥反应模型鼠种配对方式为DA至Lewis大鼠、DA至BN大鼠及BN至Lewis大鼠,但由于鼠种缺乏和操作技术有待成熟的原因,国内较少引用以上鼠种配对方式进行该模型的建立。目的:课题组在大量SD大鼠肝移植模型建立训练的基础上,采用DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,摸索DA至Lewis大鼠肝移植急排模型建立技巧和经验。方法:通过改良二袖套法,以雄性DA大鼠为供体,雄性Lewis大鼠为受体,建立原位肝移植动物模型60只,受体大鼠术前1d和术后1周内饲喂治疗剂量的他克莫司,1周后半量递减并停药,记录移植手术时间,观察受体大鼠的术后生存状况、手术成功率及生存期,分别于术后7,14,21,28d处死受体大鼠,获取肝组织标本,苏木精-伊红染色,观察肝脏大体和镜下的病理学变化,进行急性排斥反应评分。结果与结论:供肝冷缺血时间30～60min,供体手术时间(18.5±4.0)min,供肝修整时间(7±3)min,受体手术时间(35.0±7.3)min,无肝期为(13.0±3.0)min,手术成功率为98%,1周存活率为91.6%。术后2周随着他克莫司撤药,受体大鼠迅速发生急性排斥反应,于术后14～28d死亡,平均生存时间为(20.85±0.71)d,中位生存时间为21d。实验建立DA至Lewis大鼠肝移植急性排斥反应动物模型需要以大量SD大鼠肝移植训练为基础进行,通过对二袖套法技术的改良和围手术期短期应用他克莫司有助于该模型的稳定建立。

若尔盖盆地不同退化阶段草甸土壤含水率、pH及电导率的变化

为了更好的了解若尔盖高寒草甸不同演替类型下土壤含水率、pH 值、电导率的变化规律，采用 SPSS、GIS 与 GS＋地统计软件，对若尔盖高寒盆地逆向演替序列中“沼泽草甸-草原草甸-退化草甸-沙化草甸”4种演替阶段不同深度土壤的含水率、pH 和电导率进行了比较和空间格局分析，以期为若尔盖盆地草甸退化和沙化治理及研究提供科学依据。结果表明，（1）各演替阶段土壤含水率随土壤深度的增加而不断降低，草原草甸水分含量由51.04%逐渐下降到33.66%，相比其他3种草甸下降幅度最大（17.38%）；随草甸退化的加剧，草甸土壤各层含水率呈不断下降的趋势，pH 值和电导率呈不断上升的趋势。（2）4个演替阶段草甸土壤含水量范围分别为：沼泽草甸33.66%-51.04%，草原草甸17.92%-23.07%，退化草甸18.00%-20.98%，沙化草甸14.49%-16.83%；4个草甸土壤pH变化范围分别为：6.44-6.74、7.19-7.51，7.52-7.81和29.09-37.21；随退化演替的进行，草甸土壤也由沼泽草甸的酸性土壤逐渐演变为碱性土壤。（3）4种演替阶段草甸土壤3种指标的空间变异，除退化草甸土壤电导率主要受随机性因素影响外，其余均受结构性因素影响，沼泽草甸土壤电导率以及沙化草甸含水率和电导率在结构性因素影响基础上，还叠加了随机性因素的影响。（4）4种演替阶段草甸土壤的3种指标的空间分布，除退化草甸土壤电导率呈破碎斑块状分布外，均表现为连续的条带状分布格局。且随退化演替的进行，草甸土壤含水率高值区不断缩小，pH值和电导率高值区呈不断扩大势态。研究显示，若尔盖高寒盆地草甸3种土壤属性的退化演替特征显著，其空间变异以结构性因素为主导，其次为随机性因素，且随机性因素主要影响土壤的电导率。

大鼠肝卵圆细胞的增殖模型建立和体外分离培养、诱导分化研究

目的建立大鼠肝卵圆细胞(HOC)的增殖模型,探讨分离培养及鉴定HOC的方法。方法采用2-乙酰氨基芴/部分肝切除术刺激建立成体大鼠肝卵圆细胞增殖模型,于肝切除术后第12天切取剩余肝脏,使用胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞,免疫荧光技术和RT-PCR分析法检测肝卵圆细胞标志物mRNA表达。行体外培养并添加干细胞生长因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)和表皮生长因子(EGF)诱导其分化。结果分离得到的肝卵圆细胞存活率达到90%,经c-kit免疫荧光显色,PCR分析显示有CK19和白蛋白mRNA表达。生长因子诱导下有向胆管细胞和肝细胞分化的特性。结论肝卵圆细胞分离纯化及鉴定方法和肝卵圆细胞成功培养,为进一步研究肝干细胞生物学特性和与肝癌的关系提供了物质基础。

空预器热风吹扫防堵技术在1000 MW机组上的运用研究

主要对空预器热风吹扫防堵技术在1000 MW机组上的运用进行了分析和研究。首先,通过对空预器堵塞机理的分析,为进一步研究防堵塞技术提供了基础。其次,探讨了空预器热风吹扫防堵技术的防堵原理,并介绍了该技术的工作原理和优点,为其在实际应用中的推广提供了理论支持。此外,还对温度、风量、流场、系统前端等关键指标进行了分析,为该技术的实际应用提供了具体的数据支持。最后,验证了空预器热风吹扫防堵技术在1000 MW机组上的运用,结果表明,所提空预器热风吹扫防堵技术在空预器堵塞治理上具有有效性和可行性,值得借鉴和推广。

应用SRY原位杂交技术检测肝脏干细胞移植肝内种植情况

背景:以往干细胞种植后的定植示踪技术有磁探针标记、荧光示踪标记法、慢病毒感染荧光标记法及性别交叉Y染色体原位杂交检测法,各有优缺点。目的:应用SRY原位杂交技术观察受体来源肝脏干细胞(肝卵圆细胞)在移植肝内的定植情况。方法:二袖套法建立大鼠原位肝移植模型。供体为雌性DA大鼠,受体为雌性Lewis大鼠,设受体大鼠60只,肝卵圆细胞为Lewis大鼠来源的雄性细胞,移植中供肝种植肝卵圆细胞悬液。应用SRY原位杂交染色技术观察受体来源的雄性肝卵圆细胞在雌性移植肝内的定植情况。结果与结论:经门静脉和肝动脉注射种植的肝卵圆细胞及其分化细胞主要定植在移植肝内中央静脉及汇管区周围,应用SRY原位杂交染色技术可以有效观察到受体来源肝脏干细胞在移植肝内的定植情况。

恒河猴肝移植后急性排斥反应中热休克蛋白70的早期诊断价值

背景:热休克蛋白是生物体在不利环境因素刺激下应激合成的一种特殊蛋白质,热休克蛋白70参与移植免疫反应并发挥重要作用。目的:探讨热休克蛋白70在恒河猴肝移植后急性排斥反应中的早期诊断价值。方法:选用健康恒河猴采用改良二袖套+肝动脉重建的方法进行同种异体原位肝移植16例,移植后受体分为急性排斥组和对照组,每组8只,急性排斥组围手术期不行免疫抑制治疗,对照组围手术期使用免疫抑制治疗,分别在移植后6,12,24,72h4个时间点取移植后肝脏组织进行苏木精-伊红染色以判断排斥反应程度,western blotting检测肝组织中热休克蛋白70表达水平,免疫组化检测肝组织热休克蛋白70表达情况。结论与结论:肝移植后72h时段内急性排斥组肝脏急性排斥反应的组织学表现重于对照组,Baff分级水平高于对照组(P<0.05),从移植后开始至移植后72h两组移植肝经免疫组化和western blotting检测热休克蛋白70表达水平均有所升高,但急性排斥组要明显高于对照组(P<0.05)。提示,未使用免疫抑制治疗的情况下,恒河猴肝移植后早期急性排斥反应在移植后72h内即可明显观察到,热休克蛋白70在移植肝组织中表达水平也随着急性排斥反应的发生进展呈现明显上升趋势,对肝移植后早期急性排斥具有较高的预测和诊断价值。

乙型肝炎免疫球蛋白个体化剂量协同核苷类抗病毒药降低肝移植乙型肝炎复发率

背景:如何有效地防治肝移植后的乙型肝炎复发目前尚无统一的治疗方案。目的:评价阿德福韦酯、恩替卡韦联合不同剂量乙型肝炎免疫球蛋白等方案对肝移植后乙型肝炎复发的防治效果。方法:回顾性分析117例乙型肝炎相关性肝硬化行肝移植患者的临床资料,采用3种乙型肝炎复发防治方案,按时间先后分为5组:A组为阿德福韦酯+小剂量抗乙型肝炎免疫球蛋白的短期方案组,B组为阿德福韦酯+大剂量乙型肝炎免疫球蛋白的中长期方案组,B+组为A组中疗效较差改用方案B组,C组为恩替卡韦+适量乙型肝炎免疫球蛋白的个体化治疗方案组,C+组为A、B、B+组中疗效较差改用方案C组。比较各组患者肝移植后乙型肝炎病毒累积有效抑制率及强效抑制率的差异,随访≥2年。结果与结论:C组、C+组、B组、B+组的乙型肝炎累积有效抑制率及强效抑制率均显著高于A组(P<0.05),C组、C+组疗效分别优于B组及B+组(P<0.05)。提示肝移植后乙型肝炎复发的防治是一个长期乃至终生的过程,适量乙型肝炎免疫球蛋白加抗病毒药的个体化方案更有利于防治乙型肝炎复发。

术中超声检查在胰岛素瘤定位诊断中的应用

目的探讨术中超声(IOUS)检查在胰岛素瘤定位诊断中的的应用价值。方法对15例已经作出定性诊断的胰岛素瘤患者进行IOUS检查。结果 15例胰岛素瘤患者IOUS检查均作出定位诊断。结论 IOUS检查可对胰岛素瘤作出准确的定位诊断,同时显示肿瘤和周围器官的关系,有助于手术方式的选择,并可指导准确切除肿瘤,减少并发症。

P27蛋白和PCNA在肝门部胆管癌中的表达及临床意义

目的:探讨P27蛋白和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在肝门部胆管癌的表达及临床意义.方法:免疫组织化学方法测定44例肝门部胆管癌中P27蛋白与PCNA的表达情况,并与8例正常胆管组织进行对照分析.结果:肝门部胆管癌P27表达的阳性率为77.2%(34/44),PCNA为100%(44/44).P27的表达与肿瘤的分化、淋巴转移及神经浸润显著相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤分型、血管转移、临床分期等无显著相关.而PCNA的阳性表达与肿瘤的分化、淋巴转移及血管转移显著相关,与年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤类型、神经浸润及临床分期等无显著相关.P27蛋白与PCNA之间呈负相关关系.P27低表达组与缺失组的生存曲线明显低于高表达组生存曲线.而PCNAⅡ级患者预后较其他预后要好,Ⅳ级预后最差.结论:肝门部胆管癌中P27联合PCNA的检测对判断肿瘤的恶性程度、预测转移趋势及示预后均有重要意义.

脂质体介导pBLAST2-hHGF质粒转染Lewis大鼠肝卵圆细胞

背景:在体外将外源基因导入肝细胞相当困难,而利用肝脏干细胞导入外源性基因较为容易。目前大鼠肝卵圆细胞增殖模型的建立已较为成熟,但作为原代细胞,肝卵圆细胞的稳定培养和传代是较为困难的。目的:建立pBLAST2-hHGF质粒稳定转染大鼠肝卵圆细胞的细胞株,观察转染细胞的生物学特性。方法:取稳定培养的第4代雄性Lewis大鼠肝卵圆细胞,采用脂质体介导DNA转染的方法将pBLAST2-hHGF质粒转染到肝卵圆细胞,然后在倒置显微镜下观察转染细胞的形态变化、细胞增殖情况,检测细胞转染后的增殖分化能力,确定转染细胞的稳定培养条件,使用western blot和ELISA方法检测转染细胞hHGF蛋白的表达。结果与结论:第4代以脂质体介导成功转染pBLAST2-hHGF质粒的肝卵圆细胞在培养基中添加不同剂量和种类细胞因子的条件下转染细胞可稳定传代14代,其形态与未转染细胞比较无明显变化,但生长增殖速度明显快于未转染细胞,去除培养液中的生长因子后pBLAST2-Hhgf/肝卵圆细胞迅速分化为肝细胞和胆管上皮细胞,western blot方法检测转染细胞有hHGF蛋白表达,ELISA法检测培养液中hHGF蛋白含量高。结果提示,使用脂质体介导pBLAST2-hHGF质粒转染肝卵圆细胞方法可靠,转染细胞稳定培养并传代次数长于肝卵圆细胞,转染细胞具备分泌hHGF的能力,可用于后续研究。

肝移植术后合并急性胰腺炎的回顾性分析

目的总结肝移植术后合并急性胰腺炎的诊断及预防治疗经验。方法对我院2006～2009年肝移植术后合并急性胰腺炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果本组肝移植后急性胰腺炎的发生率为5.6%(6/107),33.3%的急性胰腺炎并发患者移植术中存在胰腺损伤。起病后诊断时间和治疗时间分别为(5.1±1.1)d和(21.4±16.3)d;术后血淀粉酶和尿淀粉酶恢复时间分别为(8.0±4.1)d和(16.1±4.4)d;1例术后1个月时发现直径3cm的胰腺假性囊肿,1例术后2个月并发感染中毒性休克和多器官功能衰竭,除此外无明确并发症,并发症发生率33.3%。目前5例患者健康存活,无胰腺炎复发及慢性胰腺炎出现,治愈率83.3%。1例2个月时死于感染中毒性休克、多脏器功能衰竭,死亡率16.7%。结论肝移植术中对胰腺的骚扰是并急性胰腺炎的主要因素,诊治关键在于早期预防、早期诊断及早期正规治疗。

老年性肝门部胆管癌诊治分析

目的研究分析老年肝门部胆管癌诊断与治疗经验。方法回顾性分析解放军总医院肝胆外科1993年1月至 2004年12月收治的133例老年性肝门部胆管癌患者的临床资料和随访情况。结果根治性切除37例,姑息性切除35例,胆道引流45例;其它手术3例,非手术组13例。根治性切除率30．8％(37／120)。术后37例出现并发症,并发症发生率为30．8％。1 例死于术后肝肾功能衰竭。根治组,姑息性切除组1、2、3年生存率分别为82．3％,66．1％,66．1％与82．9％,56．8％,37％,引流组与未手术组无1例存活15个月。结论老年肝门部胆管癌患者首选肿瘤切除术,了解老年肝门部胆管癌的特点．加强围手术期处理是手术的前提和生活质量的关键。

肝移植术后急性胰腺炎6例临床分析

目的进一步提高肝移植术后急性胰腺炎(AP)的诊治水平。方法分析6例接受过肝脏移植术的AP患者的临床特点。结果移植术后AP诊断时间晚,恢复慢,并发症发生率及病死率高;6例经过积极治疗后5例健康存活,1例发病2个月时死于感染中毒性休克、多脏器功能衰竭。结论肝移植术后AP由于免疫抑制剂的使用,临床炎症反应轻于普通AP;移植后患者出现腹痛等症状时应及时复查淀粉酶等相关指标。

老年肝门部胆管癌围手术期处理与手术治疗

目的：探讨老年肝门部胆管癌围手术期处理与手术治疗方法.方法：回顾性分析解放军总医院肝胆外科1993-01～2004-12收治的120例老年性肝门部胆管癌手术患者的临床资料.结果：120例手术患者中,根治性切除37例,姑息性切除35例,胆管引流45例,其他手术3例.术后37例（30.8%）出现并发症,大多为胆汁瘘与腹水,死亡1例（0.8%）,死于术后肝肾功能衰竭,余治愈出院.结论：加强围手术期处理,选择合理手术方式,可提高手术的安全性,使术后恢复顺利.

实时荧光定量RT-PCR检测肝卵圆细胞Alb和CK-19 mRNA的表达

目的建立Alb和CK-19 mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)系统,检测Lewis大鼠肝卵圆细胞(HOC)及其分化细胞中Alb和CK-19 mRNA表达量并分析其意义。方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测分别检测HOC、分化细胞、胆道及肝脏标本中Alb和CK-19 mRNA的表达情况,以上标本各20例。结果Alb mRNA在HOC(-1.820±0.614)中的表达水平明显低于其在肝脏(-1.139±0.588)中的表达水平(P<0.05);CK-19 mRNA在HOC(-3.852±0.974)中的表达水平明显低于在胆道(-1.739±0.704)、肝脏(-1.926±0.653)、分化细胞(-1.492±0.634)中的表达水平(P<0.05);HOC Alb mRNA表达水平高于CK-19mRNA表达水平(P<0.05),分化细胞Alb mRNA(-1.758±0.543)表达水平同ck-19 mRNA表达水平差异不明显(P>0.05)。结论使用实时荧光定量RT-PCR检测HOC Alb和CK-19 mRNA的表达克服了传统PCR只能定性不能定量的缺点,为研究Alb和CK-19 mRNA在HOC中的表达提供了相对定量的方法,成功地进行该项实验需要掌控好几个关键环节;HOC中Alb mRNA和CK-19 mRNA表达量低,经过诱导分化后两者表达量明显升高,证实HOC具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的双向分化特性,在本研究的诱导分化条件下HOC主要向胆管上皮细胞分化。

受体来源肝卵圆细胞在移植肝内种植后的增殖与分化

背景:肝卵圆细胞移植后对受损肝脏具有修复作用。目的:观察受体来源肝卵圆细胞对受体大鼠术后生存期及肝功能的影响。方法:采用二袖套法建立大鼠原位肝移植模型,供体为雌性DA大鼠,受体为雌性Lewis大鼠。造模后随机分为对照组(不进行细胞移植)、实验组(移植过程中供肝经门静脉和肝动脉注射受体来源肝卵圆细胞1×109L-1)。结果与结论:实验组术后撤他克莫司后的中位生存期和累积生存率均优于对照组(P<0.05),移植肝肝细胞受损情况弱于对照组(P<0.05),移植肝合成和排泄功能明显好于对照组(P<0.05)。表明在移植肝脏内种植受体来源肝卵圆细胞可有效改善移植肝功能,并且明显延长受体生存时间,提高累积生存率,该结果可能与受体来源肝卵圆细胞在移植肝内增殖分化,修复受损肝脏和减轻急性排斥反应有关。

受体来源转染pBLAST2-hHGF质粒肝卵圆细胞对大鼠移植肝肝功能的影响

目的观察受体来源转染pBLAST2-hHGF质粒肝卵圆细胞(HOC)对受体大鼠术后肝功能的影响。方法二袖套法复制大鼠原位肝移植模型。实验分对照组(A组)、HOC移植组(B组)、pBLAST2-hHGF/HOC移植组(C组),每组均设受体大鼠60只,A组仅行原位肝移植术,B组术中供肝种植HOC悬液,C组术中供肝种植pBLAST2-hHGF/HOC悬液。动态观察各组大鼠术后的中位生存时间(MST)、肝功能(ALT、DBil、GGT、ALP、XCHE和ALB)。结果 A组术后MST明显短于B组和C组,而B组又短于C组;B组和C组大鼠术后肝细胞受损情况弱于A组(P<0.05),合成功能和排泄功能好于A组(P<0.05),上述肝功能指标,C组要好于B组(P<0.05)。结论使用受体来源pBLAST2-hHGF/HOC在移植肝脏内进行种植,可以有效改善移植肝脏的肝功能,并且明显延长受体的术后中位生存时间。

改良法构建大鼠减体积肝移植模型

背景:目前有关活体肝移植后肝脏再生的研究较少。在大鼠肝移植实验中不断改进手术方法和技术,提高肝移植成功率是进行大鼠肝移植研究和获得可靠实验数据的基础。目的:验证以改良方法构建减体积肝移植大鼠模型的有效性。方法:选用健康SD大鼠,70对制备减体积肝移植改良前模型,100对制备减体积肝移植改良后模型。供体为雌性,受体为雄性,供体体质量比受体轻10g左右。改良前方案采用取下全肝后在修肝盆中进行减体积肝移植。改良后方案如下:供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;修肝时将套管柄置于门静脉和肝下下腔静脉的正前方,将幽门静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的左侧,即肝脏的左侧;将右肾静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的右侧,即肝脏的右侧;供肝套管完成后用灌注液对门静脉和肝下下腔静脉进行冲洗;然后以左膈静脉为标识点进行7/0无损伤血管缝线吊线;受体采用双人裸眼配合操作,肝上下腔静脉吻合时,左右固定位点采用"8"字形外翻缝合,后壁和前壁分别采用连续吻合,门静脉和肝下下腔静脉采用改良的双袖套法,胆管支撑管法建立大鼠减体积的稳定模型。结果与结论:改良后供体手术时间为(32±2)min,修肝时间为(6±2)min,受体手术时间为(40±3)min,无肝期时间为(14±3)min。移植成功率为92%,移植后3d生存率为85%,移植后2周生存率83%。与改良前比较,移植后并发症发生率降低(P<0.05),供肝的冷保存时间缩短(P<0.05)。提示改良后的大鼠减体积肝移植模型比较稳定、可靠,移植成功率较高,移植后并发症发生率较低,为研究减体积肝移植后肝脏再生提供了有效的改良手段。