武汉市市售淡水小龙虾中副溶血性弧菌的分离鉴定及多位点序列分型

采集武汉市各大农贸市场52份小龙虾(即克氏原螯虾,Procambarus clarkii)样品,利用1%氯化钠碱性蛋白胨水(APW)和TCBS对小龙虾样品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)进行分离和初步鉴定,用PCR扩增副溶血性弧菌具有种特异性的tl基因来验证疑似菌株。PCR检测方法共检出14株副溶血性弧菌,检出率为26.92%。在小龙虾中分离得到的14株副溶血性弧菌,对其进行基于dna E-gyr Brec A-dtd S-pnt A-pyr C-tna A的多位点序列分型。其中dtd S的多态性位点比例均高于其他6个基因,为5.2%。7个基因串联后将14株副溶血性弧菌分为12个序列型,其中7株序列型未知,分辨力达0.967。可知武汉市市售淡水小龙虾中副溶血性弧菌呈现出较大的多样性。Neighbor-joining系统进化树将分离得到的14株副溶血性弧菌分为2个群,VP2、VP13、VP7和VP14同属一个群,其他10株则属于另外一个群。其中VP13和已知的临床分离株ST3在进化树上表现出较高的亲缘性(69%)。

淡水水产品质量与安全专题创新性实验教学的探索与实践

大学生创新性实验教学不仅是大学教学体系中的一个重要方面,也是培养创新型人才不可缺少的重要途径。该文结合创新性实验教学的实际情况,提出高等教育改革必须突破传统的教学结构,采用主导—主体教学结构进行创新性实验教学,并对具体教学方法和教学手段进行探究和实践,以期获得更好的教学效果,从而培养出具有高度创新能力的21世纪新型人才。

噬菌体在食品安全控制中的研究进展

近年来,噬菌体在食品科学领域中的应用受到国内外研究学者的广泛关注。噬菌体的自身特性表明,其可作为一种杀菌/抑菌的生物制剂来控制食源性病原菌对食品的污染,是保障食品安全的理想工具。此外,基因工程技术的发展进一步促进了噬菌体及其产物的安全、高效使用及噬菌体产品的出现。本文就噬菌体在食品安全控制中的研究进展以及应用前景等方面进行综述。

解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因的克隆、重组表达及其活性

为了研究壳聚糖酶的水解活性,实验进行了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶基因编码序列的克隆,并构建了谷胱甘肽转移酶(GST)-壳聚糖酶融合蛋白表达质粒,在大肠杆菌中表达后提取、纯化得到重组蛋白,并通过生物信息学对该蛋白的信号肽、三维结构等进行了分析,最后以胶态壳聚糖溶液为底物研究了该重组壳聚糖酶的活性。结果显示,该壳聚糖酶基因的ORF长为837 bp,编码279个氨基酸,分子量为31.45 ku。在其氨基末端具有信号肽,切割点位于36和37位氨基酸之间。氨基酸序列同源性分析表明该壳聚糖酶属于GH46家族糖苷水解酶。酶的水解活性最适温度约为55°C,最适pH为5.5。而金属离子Fe3+、Ag+、Cu^(2+)、Ba^(2+)和K+对其水解活性都起抑制作用,但是Mn^(2+)、Ca^(2+)和Mg^(2+)对其活性起增强作用。0.1 mmol/L的Zn^(2+)对壳聚糖酶的活性起增强作用,2.0 mmol/L的Zn^(2+)对壳聚糖酶的活性起抑制作用。本实验研究了解淀粉芽孢杆菌HZ-1510壳聚糖酶在不同条件下的水解活性,为壳聚糖酶的工业应用奠定了理论基础。

噬菌体在检测食源性病原菌中的应用研究进展

食源性病原菌是导致食源性疾病的主要原因之一,现代食品工业的迅猛发展对食品中病原菌的快速检测提出了更高的要求。噬菌体作为地球上种类最丰富的微生物之一,能够侵染细菌。研究表明,噬菌体不仅具备结构简单、特异性强、价格低廉等特性,而且具有能够区分活细菌和死细菌的能力,以及容易与其他传统检测方法相结合等优势,噬菌体及其产物为食源性病原菌的检测提供了新的思路。近年来,噬菌体与免疫学、分子生物学和纳米科学等学科结合形成的新型快速检测方法已成为国际研究热点。本文就噬菌体检测食源性病原菌的原理及应用进行分类综述和分析。

生鲜蔬菜消毒方法的比较

利用大肠杆菌(Escherichia coli)构建生鲜蔬菜消毒过程中水污染模型和蔬菜污染模型,使用传统消毒方法单独处理被污染的水或蔬菜,分别比较其灭菌效率,并探究在传统消毒方法的基础上加入噬菌体进行辅助处理,分析其灭菌效率。结果表明,水污染模型中,0.004%硝酸银的消毒效果最理想,灭菌率超过90%;6种不同杀菌方式对菠菜的杀菌效果最好,其次是生菜、香菜。蔬菜污染模型中,0.10%硝酸银的消毒效果最理想,灭菌率超过85%,对生菜的杀菌效果最好,其次是香菜、菠菜。两种不同的模型中,加入噬菌体M13KO7辅助作用,均可以提高硝酸银、次氯酸钠和紫外照射单独作用的灭菌率。

噬菌体的分布广泛性以及口服安全性

噬菌体在医学、农业和食品安全领域的商业化应用得到多国批准。然而,我国尚未有相关具有自主知识产权的商业化应用。与此同时,传统抗菌药物在医学和农业等领域的违规使用,导致抗菌药物和耐药菌进入食品生产链,严重威胁人类健康,因此研发新型的抗菌技术迫在眉睫。本文对噬菌体在自然界和人体分布的广泛性,已有的人体试验和动物实验,噬菌体商业化应用的成功案例和标志性事件等进行归纳,分析口服噬菌体的安全性。同时,介绍新发现的噬菌体和机体互作机制,期望能够提升我国民众对噬菌体分布广泛性和口服安全性的客观认知,促进相关技术在食品安全领域的商业化应用。

人工模拟鼠伤寒沙门氏菌在绿豆芽中的内化定殖能力及其消毒处理

以绿豆为作用载体,研究鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028在不同发芽阶段的绿豆芽中的内化定殖能力及其影响因素,在此基础上,采用紫外照射和化学消毒剂处理两种方法对定殖在绿豆芽中的鼠伤寒沙门氏菌进行消毒处理,探索消除绿豆芽中定殖的鼠伤寒沙门氏菌的有效方法。结果表明:在绿豆发芽前期的4个不同的时段(0~48 h内):吸胀期(G_1,0 h)、萌动期(G_2,0~12 h)、发芽初期(G_3,12~24 h)、发芽期(G_4,24~48 h),分别接种不同浓度的鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028(10~2、10~4、10~6、10~8 CFU/m L),鼠伤寒沙门氏菌在豆芽中的内化定殖能力不同,但在绿豆发芽的生长周期(约为144 h)结束时,4个不同接种时段的鼠伤寒沙门氏菌的内化量趋于相同。对绿豆芽中内化定殖的鼠伤寒沙门氏菌的消毒处理结果表明,紫外照射消毒处理对内化定殖的鼠伤寒沙门氏菌有明显的去除效果,而次氯酸钠溶液和硝酸银溶液浸泡处理对内化的鼠伤寒沙门氏菌的去除效果并不明显。

噬菌肽SEYT4对食品链中常见致病菌的清除效果

为探究噬菌肽在食品加工链中的应用前景,以1种含有37个氨基酸的新型噬菌肽SEYT4为研究对象,分析其结构特性,并选择食品加工链中常见的致病细菌,在不同温度、盐度及pH下进行杀菌试验,测定SEYT4的杀菌谱、杀菌效率及杀菌特性,利用C57BL/6雌性小鼠评估SEYT4的安全性,并通过模拟被致病菌污染的叶菜和厨具,探究SEYT4清除食品链中致病菌的效果。结果显示:噬菌肽SEYT4是1个发夹状的双α-螺旋结构,分子质量约为4.5ku,理论等电点为9.69;能够清除大多数高毒性且耐药的革兰氏阳性和革兰氏阴性致病菌,杀菌率高达99.99%,在不同温度下均具有较高活性,且在中性和弱碱性环境下杀菌效果更好,但在高盐环境下会失活;对小鼠红细胞无溶血作用;在构建的人工污染香菜模型中能将叶片和洗涤液中的致病菌清除约90.00%,同时能清除食品接触面上99.00%以上的致病菌。结果表明,噬菌肽SEYT4是一种对致病菌有良好的杀菌效果且安全性高的新型抗菌肽,能够有效防控食品链中污染的致病菌,有望成为一种食品加工链中的实用消毒剂。

噬菌体裂解酶专家共识——齐鲁公共卫生云讲堂

随着抗生素持续、不合理应用乃至滥用,使得细菌对抗生素的耐药性日益严重。特别是抗多黏菌素mcr-1基因以及耐万古霉素"超级细菌"的发现,标志着"后抗生素时代"的来临。为了应对细菌的耐药性、抗生素残留所导致的机体免疫力下降以及环境污染等问题,我国正在全力推进"减抗、限抗、禁抗"战略的实施,这是破解抗生素长期应用引发系列问题的根本之策,是事关畜禽健康养殖、公共卫生安全和人类健康的一件大事。这一战略的实施也对"安全、有效、质量可控,无残留、无污染"的绿色新型替抗剂的研发提出新的需求,亟需在这些方面寻求新的突破口,其中噬菌体裂解酶是一个重要的突破方向。噬菌体裂解酶作为一类新型抗菌蛋白,在应对细菌耐药性方面具有独特优势,在减抗、降抗中具有公共卫生战略价值。为推动噬菌体裂解酶的研究与应用,现汇聚全国十多位从事噬菌体裂解酶研究的专家和相关企业,联合齐鲁公共卫生云讲堂、噬菌体国际研讨会和《中国兽医学报》,专题研讨国内外关于噬菌体裂解酶的基础研究成果和实际应用案例,对噬菌体裂解酶的发展趋势进行分析、研判,形成一系列共识。