局部应用CpG ODN治疗变态反应性结膜炎的实验研究

目的探讨局部应用CpG ODN对小鼠实验性变态反应性结膜炎的治疗作用和相关机制,以期为变态反应性结膜炎提供新的治疗策略。方法随机将24只6~8周雌性Balb/c小鼠分为4组：CpG ODN组、GpC ODN组、PBS组和正常对照组,每组各6只,鸡卵蛋白（OVA）免疫Balb/c小鼠建立变态反应性结膜炎动物模型,首次激发诱导变态反应性结膜炎成功后第4天双眼连续3d分别滴入CpG ODN（5g·L-1）、GpC ODN（5g·L-1）和PBS各10μL,治疗后的第4天观察眼部临床症状后处死动物,检测结膜组织切片中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的变化、血清中IgG1、IgG2a含量和细胞分泌IL-4的水平,流式细胞仪对培养细胞的分子表达和含量进行分析。结果与GpC ODN对照组和PBS对照组比较,CpG ODN治疗组的主要指标变化为：（1）结膜组织切片中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的数量明显减少,嗜酸性粒细胞每张切片上的细胞数分别为：CpG ODN组（10.00±0·92）个,GpC ODN组（17.00±1.06）个,PBS组（20.00±1·26）个。中性粒细胞每张切片上的细胞数分别为：CpG ODN组（15.00±1.36）个,GpC ODN组（32.00±2.83）个,PBS组（29.00±1.58）个;（2）血清中IgG2a的含量增加,IgG1/IgG2a比例下降（P〈0·01）;（3）细胞培养上清中的IL-4分泌下调,CpG ODN组（20.702±1.688）ng·L-1,GpC ODN组（27.201±1·274）ng·L-1,PBS组（30.534±2.576）ng·L-1;（4）CD4＋CD25＋和CD11c＋CD80＋MHCⅡ＋的细胞比例有所增加,其中CD4＋CD25＋细胞所占比例在CpG ODN组为9·55%,GpC ODN组为5.00%,PBS组为5.92%.CD80和MHCⅡ＋共表达的细胞占CD11c＋细胞比例在CpG ODN组为5.71%,GpCODN组为3.51%,PBS组为2.18%.但CpGODN治疗组对变态反应性结膜炎早期临床症状的改善没有明显作用（P〉0·05）。结论眼部应用CpG ODN能够逆转实验性变态反应性结膜炎小鼠激发阶段体内的Th2型应答,改变血清中抗体亚型,减轻结膜组织局部的晚期病理反应,对实验性变态反应性结膜炎具有显著的治疗作用。

免疫刺激剂CpGODN防治烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎的实验研究

背景研究证实免疫调节剂CpGODN对蛋白类过敏原引起的变态反应性结膜炎有防治作用，但其对真菌引发的变态反应性结膜炎是否有类似作用尚不清楚。目的研究局部应用CpGODN是否能够预防或减轻烟曲霉菌引发的变态反应性结膜炎。方法建立烟曲霉菌变态反应性结膜炎小鼠模型，用CpGODN或对照ODN（GpCODN）对其进行干预，PBS干预作为阴性对照。实验分为预防实验（模型动物在变态反应原再次激发前给药）和治疗实验（激发后给药），对小鼠眼部临床症状进行评分。取小鼠结膜组织进行组织病理学检查，并计数标本中的炎性细胞。应用实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）法动态观察小鼠结膜组织中TLR4mRNA的变化；将烟曲霉菌免疫原与眼部回流淋巴结和脾脏的细胞进行共培养，流式细胞分析培养细胞中调节性T淋巴细胞的比例和活化状态。结果预防实验中，结膜下注射CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较，小鼠眼部过敏症状评分差异均无统计学意义（P〉0．05）；CpGODN组与GpCODN对照组、PBS对照组比较结膜组织中性粒细胞数降低，差异均有统计学意义（21．25±11．59vs30．75-4-_11．44，21．25±11．59vs69．00±9．90；t=5．140，t=3．210，P〈0．01）；TLR4mRNA表达上调。在治疗实验中，CpGODN组与GpCODN对照组、模型对照组比较，跟部过敏症状评分降低（t=4．000，t=2．750，P〈O．05）；中性粒细胞数显著减少（t=4．870，t=3．829，P〈0．01）。CpGODN治疗组小鼠眼部回流淋巴结CD4^＋CD25^＋细胞以及CD4^＋CD25^＋CD69’细胞所占的比例均显著高于GpCODN组和PBS对照组（P〈0．05）。结论CpGODN通过上调结膜TLR4的表达、活化Treg细胞来预防和治疗烟曲霉菌引起的变态反应性结膜炎，预先结膜下注射和点眼均可减轻小鼠眼部过敏症状和晚期结膜炎性细胞的聚集。

胃癌患者DC-CIK治疗前后外周血Treg细胞及相关细胞因子的变化

目的:观察胃癌术后患者DC联合细胞因子活化的杀伤细胞(cytokin-induced killer,CIK)治疗前后外周血中Treg细胞及相关细胞因子水平变化。方法:选择2009年4月至2013年12月在本院生物治疗中心治疗的胃癌术后患者158例,采用流式细胞术检测患者DC-CIK治疗前和治疗1~4个疗程后的胃癌术后患者外周血Treg(CD4+CD25+Fox P3+)细胞频率,ELISA检测血清Treg相关因子IL-10、TGF-β1水平。结果:接受3个疗程以上治疗(简称≥3疗程组)的75例患者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1水平较治疗前均明显下降(均P<0.05),接受2个疗程以下治疗(简称≤2疗程组)的83例患者的Treg细胞频率、IL-10和TGF-β1水平较治疗前无明显变化。同一治疗组复发者的Treg细胞频率、IL-10、TGF-β1水平在复发时与未复发者比较无显著差异,但3个疗程以上治疗组的复发率明显低于2个疗程组(P<0.05)。结论:接受3个疗程以上DC-CIK治疗的胃癌患者其Treg频数、相应的细胞因子水平和复发率均明显下降,但同一治疗组复发与未复发者的Treg频数及细胞因子却无显著差异。

儿童超重与肥胖的科学评估指数

在过去二十年里，全世界范围内儿童肥胖患病率大幅上升。无论是在发达国家还是发展中国家，儿童肥胖已经成为非常值得关注的全球性问题。从1970年到2000年，美国的肥胖儿童已增加三倍。在2009-至2010年间，2岁-19岁的儿童和青少年中有30．4％是超重或肥胖的。2000年至今我国大中城市对学龄前儿童肥胖进行了大量调查，其中北京市学龄前儿童的肥胖率为4．49％，上海市为7．58％～8．01％。

HER2阳性乳腺癌细胞株上清液对树突状细胞表型及功能的影响

目的探讨人HER2阳性乳腺癌细胞对树突状细胞表型及功能的影响。方法分离培养外周血单个核细胞来源的树突状细胞。培养的第5天,实验组HER2+MCF-7细胞的培养上清液孵育24小时,以不加上清液的树突状细胞作为对照组,流式细胞术检测树突状细胞表面标志CD80、CD86、CD40、CD83和HLA-DR的表达水平,ELISA法检测树突状细胞细胞因子IL-12、TNF-α、IL-6和IL-10的分泌水平。用改良的MTT比色法检测上清液处理的树突状细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力和ELISA法检测树突状细胞刺激T细胞分泌细胞因子的能力。结果树突状细胞与HER2+MCF-7细胞的上清液共培养后,树突状细胞表面分子CD80、CD83、CD86及CD40均表达升高,同时伴随着IL-12、TNF-α、IL-6的分泌增加。与对照组相比较,上清液处理的树突状细胞对激活同种异体T细胞增殖和分泌细胞因子的能力明显增强(P<0.01)。结论 HER2+MCF-7细胞能改善树突状细胞的抗原递呈功能和刺激T细胞活化增殖的能力,提示HER2+MCF-7细胞对树突状细胞是免疫刺激作用,对于HER2+的乳腺癌可采用基于树突状细胞疫苗的免疫治疗。

肝素诱导的树突状细胞上调Toll羊受体3促进慢性乙型肝炎患者外周血Th0向Th1分化

目的 探讨肝素体外诱导的树突状细胞（DC）促进慢性乙型肝炎（CHB）患者CD4＋T细胞亚群由Th0向Th1分化的机制. 方法 分离CHB患者外周血单个核细胞,以重组人白细胞介素（rhIL）-4、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和肝素诱导培养DC.流式细胞仪和定量PCR检测肝素处理及未处理的DC中Toll样受体（TLRs）分子表达水平.对高表达的TLRs,用TLRs-siRNA干扰处理后检测DC的功能变化.免疫磁珠分离外周血CD4＋T细胞亚群.酶联免疫吸附（ELISA）法检测Poly（I∶C）和R848刺激后DC上清液中IL-12及DC和CD4＋T细胞混合培养上清液中干扰素（IFN）v和IL-4的含量.均数的比较采用配对t检验.结果 肝素处理的DC （heparin-DC）其TLR3表达水平明显高于未处理的DC （t=2.849,P＜0.05;t=3.027,P＜ 0.05）;而两组间TLR7和TLR8的表达水平差异无统计学意义;Heparin-DC在Poly（I∶C）刺激下分泌IL-12水平明显高于未处理的DC（t=8.68,P＜0.01）,同时高于R848刺激的heparin-DC（t=19.01,P＜0.01）;经TLR3-siRNA干扰后,heparin-DC分泌的IL-12水平明显降低（t=31.49,P＜0.01）.TLR3-siRNA干扰后的heparin-DC与同种异体的CD4＋T细胞共培养,其CD4＋IFN Y ＋T细胞比例与未干扰组相比明显降低（1.64％±0.57％对比6.31％±0.88％,P＜0.01）,同时其上清液中Thl型细胞因子IFNY的水平也显著降低（t=20.83,P＜0.01）,而IL-4分泌水平变化无统计学意义.结论 肝素在体外可能通过上调CHB患者树突状细胞TLR3的表达水平而促进外周血Th0向Th1细胞的分化.