论工程建设监理合同

本文论述了工程建设监理合同的概念，订立的方式和主要条款，并对《工程建设监理合同》示范文本进行了介绍和分析。

EDAG-1在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达

背景与目的:EDAG-1(embryonicdevelopassociatedgene1,EDAG-1)定位于9q22,在造血细胞特异表达,并与造血调控关系密切。本研究通过检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞中的表达和编码区基因结构,探讨EDAG-1与白血病和淋巴瘤发病的关系。方法:选用白血病或淋巴瘤细胞株共15种,采用RT-PCR法检测表达EDAG-1基因的细胞株,并回收该基因cDNA编码区片段,构建相应的重组质粒并测序分析编码区突变情况。通过Northernblot和Westernblot分别确证EDAG-1mRNA和蛋白在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达情况,利用Southernblot检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞株中基因重排和扩增情况。结果:红系(K-562、HEL)、巨核系(DAMI、MEG-01)、Jurkat细胞在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG-1,但其编码区结构未发现异常,也没有EDAG-1基因组的扩增和重排。发现HL-60细胞缺失EDAG-1,HuT78细胞EDAG-1发生重排。结论:EDAG-1可能与红系、巨核系白血病的发病机制有关,该基因激活的机制可能与编码区突变无关。

盐酸戊乙奎醚对肝移植患者围术期白细胞介素-8及核因子-κB的影响

目的观察盐酸戊乙奎醚对肝移植患者围术期白细胞介素-8(IL-8)及核因子-κB(NF-κB)的影响,以探讨其对肝缺血-再灌注损伤的作用机制。方法肝移植患者60例,随机分为三组。无肝期30 min 开始,Ⅰ、Ⅱ组分别恒速泵入盐酸戊乙奎醚0.1、0.2 mg/kg(生理盐水稀释至100ml,速率1.5 ml/min),C 组等容量生理盐水等速泵入。三组分别于无肝期30 min(T_0)、再灌注后60min(T_1)、120 min(T_2)、180 min(T_3)及24 h(T_4)上腔静脉采血,测定血清中 IL-8的水平。T_3时取移植肝组织,测 NF-κB蛋白表达量、与靶基因的结合活性,观察肝病理组织学改变。结果 C 组 IL-8T_2时开始升高并达峰;Ⅰ、Ⅱ组 T_2～T_4时明显低于 C 组(P<0.05或 P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ组 NF-κB蛋白表达及其与靶基因的结合活性较低,且 T_3时与 IL-8水平呈线性正相关。Ⅰ、Ⅱ组肝病理组织学改变较轻。结论盐酸戊乙奎醚能减轻肝缺血-再灌注损伤,可能与其抑制 NF-κB蛋白表达量及其结合活性、降低 IL-8水平、减少中性粒细胞在肝组织中的聚集有关。

关于建筑业供应链管理问题的探讨

供应链管理是一种全新的管理模式,即把供应链上的各个企业作为一个不可分割的、协调发展的有机体。建筑业虽然与制造业不同,但却是典型的订单式生产,在建筑业实施供应链管理具有重要意义。本文主要探讨在建筑业实施供应链管理的可能性和作用,论述建筑业供应链管理的方法以及有待进一步研究的问题。

利用ChIP-seq技术研究转录因子EDAG在全基因组的结合谱

为揭示红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)在造血中的作用机制,利用ChIP-seq分析EDAG的全基因组结合谱.首先从产妇脐带血分离CD34+细胞,EPO诱导CD34+细胞培养5 d.利用EDAG抗体进行染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验、Western印迹法检测EDAG抗体的富集情况.将富集到的DNA样品进行高通量测序,最后利用生物信息学分析测序结果.成功富集染色体DNA,经高通量测序和生物信息学分析,共得到1 292个EDAG结合位点的Peaks数目,代表了975个结合的基因且错误发现率(false discovery rate,FDR)小于0.0001.EDAG Peaks主要分布在基因间区和内含子区.进一步利用Q-PCR对ChIP-Seq数据进行了验证,证实EDAG可结合在检测的靶基因调控区上.将EDAG结合的基因进行基因功能(gene ontology,GO)注释,表明EDAG参与了细胞周期、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡及信号通路等多种生物学过程.综上,利用ChIP-seq技术在促红细胞生成素(EPO)诱导分化的CD34+细胞中鉴定了1 292个EDAG结合的peaks对应975个基因,并对该结果进行了随机验证,提示EDAG广泛参与了多种生物学过程.该研究为揭示EDAG的功能及作用机制提供了线索.

EDAG-1在人髓系白血病细胞株中的表达

目的 研究EDAG 1在人髓系白血病细胞株中的表达情况。方法 选取 4种人髓系白血病细胞株分别通过NorthernBlot、PCR、WesternBlot、SouthernBlot了解EDAG 1基因在mRNA、蛋白以及其基因组结构表达情况 ;通过凝胶阻滞实验分析选用白血病细胞系NF κBDNA结合活性。结果 发现向红系分化的K 5 6 2、HEL在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG 1基因 ,但未发现突变、扩增和重排。HL 6 0细胞缺失EDAG 1基因。 4种白血病细胞株NF κBDNA结合活性是增强的 ,以高表达EDAG 1基因的细胞株明显。结论 红系白血病细胞株高表达EDAG 1基因 ,该基因的激活可能与编码区结构无关。

TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响

目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证。结果成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应。结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应。

敲低EDAG加强NPM1蛋白的降解并增加AML病人对药物的敏感性(英文)

Nucleophosmin(NPM1或B23.1)是在细胞核内广泛表达的蛋白磷酸酶,在多方面发挥重要作用,如核糖体合成、中心体复制、细胞周期控制、细胞增殖及转化.NPM1是急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中最常见的突变基因之一.红系分化相关基因(erythroid differentiation associated gene,EDAG)是在造血组织特异表达的基因,在造血细胞的增殖与谱系分化调节方面发挥重要作用.在AML病人中,高表达的EDAG与较差的预后相关联.我们前期研究结果显示,EDAG与NPM1相结合并调节NPM1稳定性,但在AML病人体内EDAG与NPM1的关系,及EDAG与NPM突变体(NPMc+)的关系尚未明确.在本文中发现:在AML病人骨髓CD34+细胞中,敲低EDAG表达导致NPM1蛋白稳定性降低并提高了对柔红霉素的敏感性;EDAG虽不与突变体NPMc+相互作用,但在蛋白出核抑制剂(leptomycin B,LMB)作用下,过表达EDAG提高NPMc+蛋白稳定性;表达突变NPMc+的AML病人与表达NPM1蛋白的病人相比,其骨髓CD34+细胞对柔红霉素具有更高的敏感性,且敲低EDAG能微弱提高其敏感性.上述结果表明,EDAG在AML病人药物治疗中发挥的可能作用以及NPMc+"逃脱",使EDAG无法保护其稳定性,这提示了在AML病人药物治疗过程中EDAG的潜在作用,同时也提示,携带NPMc+蛋白的AML患者具有较好预后,可能与NPMc+蛋白"逃脱"出EDAG对其稳定性的保护有关.

人红系分化相关基因高表达提高TF-1细胞系存活能力

目的:检测人红系分化相关基因(EDAG)对TF-1细胞株存活能力的影响。方法:采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTS法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:用表达GFP的质粒电转染TF-1细胞株,通过综合评价转染效率和细胞状态,确定最佳转染条件为1350 V电压电击30 ms,电击次数为1次;对得到的细胞稳定株进行检测,其内源EDAG的mRNA和蛋白水平均上调;将细胞稳定株在撤除细胞因子状态下培养,过表达EDAG后细胞存活能力增强、凋亡减少。结论:用电转染方式高效转染TF-1细胞,通过筛选得到过表达EDAG的稳定细胞株,并证实撤除细胞因子后过表达EDAG能提高TF-1细胞系的存活及抗凋亡能力。

一种新型丝氨酸苏氨酸激酶CPK的初步克隆及功能

从人胎肝cDNA文库中分离到一种cDNA ,推测的蛋白氨基酸序列具有明显的丝氨酸苏氨酸激酶结构域,可能编码一种新的丝氨酸苏氨酸激酶(命名为CPK ,cellproliferationassociationkinase) .CPKmRNA全长约3 0kb .RT PCR检测表明CPKmRNA在增殖活跃组织或细胞如人胚胎组织、肿瘤细胞株中呈高丰度表达,在成人组织则呈低丰度或不表达.利用PCR技术扩增大鼠同源cDNA ,以此为探针,Northern杂交发现CPK表达于多种成年小鼠组织,以脑组织丰度最高.小鼠2 3肝部分切除可迅速诱导CPKmRNA的表达,在术后2 4～4 8h达高峰,与2 3肝部分切除后细胞增殖期吻合.以小鼠同源cDNA片段为模板,合成RNA探针,原位杂交显示在胚胎发育期CPK低丰度表达在大多数组织,以神经系统组织变化最大,在第8d胚胎神经管内皮细胞中即出现表达,11～13d在端脑、脑膜、间脑、脊神经节表皮细胞、海马、小脑神经胶质细胞等多种神经细胞中表达且丰度较高,16d后这些组织的表达迅速下降到较低水平,表明CPK可能与神经系统的生长发育有一定关联.利用信号通路检测技术,观察到CPK的表达对MAPK ,p38MAPK途径的激活有明显的影响,并可显著增强表皮生长因子对这两条途径的激活,提示该激酶可能参与细胞因子的信号转导.

AKT1磷酸化转录因子HTF4 Ser559位点并调控其活性(英文)

AKT(即也称蛋白激酶B,PKB)通过磷酸化其下游底物发挥多种生理功能.我们利用串联亲和纯化联合质谱技术发现一个新的由HEB基因编码的AKT候选相互作用蛋白HTF4(helix-loop-helix transcription factors 4,也称transcription factor 12,TCF12).通过免疫共沉淀、GST-pull down、共定位实验验证了HTF4与AKT之间的相互作用;采用体内体外实验表明,AKT1磷酸化HTF4的Ser559位点依赖于PI3K途径.突变Ser559位点不改变HTF4的细胞核定位,但降低了HTF4转录活性.这些结果证明HTF4是AKT新的磷酸化底物.进一步研究发现,HTF4表达增强明显抑制了HepG2细胞的迁移,Ser559位点突变进一步增强了HTF4对HepG2细胞迁移的抑制能力.AKT磷酸化HTF4的具体功能有待更加深入的研究.

蛋白磷酸酶2A催化亚基β(PPP2Cβ)过表达慢病毒载体系统的构建及对K562红系分化的影响

目的:构建蛋白磷酸酶2A的催化亚基PPP2Cβ慢病毒表达载体,获得较高滴度慢病毒颗粒,感染K562细胞建立稳定株,检测过表达PPP2Cβ对K562红系分化的影响。方法:将PPP2Cβ的CDS序列插入到第二代慢病毒表达载体FUGW,并与包装质粒p MD2G和ps PAX2共转染293T细胞,36、48h分两次收集慢病毒上清,应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染K562细胞,应用Western blot检测过表达效果。采用联苯胺染色以及实时定量PCR检测过表达PPP2Cβ对K562红系分化的影响。结果:成功构建了PPP2Cβ慢病毒表达载体,利用慢病毒系统包装PPP2Cβ的慢病毒,获得了高滴度的慢病毒颗粒,并成功建立了PPP2Cβ的K562细胞稳定株,促进了K562向红系分化。结论:过表达PPP2Cβ能使K562细胞自发的向红系分化。

THAP11转基因线虫载体的构建及转基因线虫的制备

目的构建带有线虫组织特异启动子的含不同ployQ的THAP11转基因线虫载体,并制备转基因线虫,为进一步研究THAP11基因的功能提供基础。方法设计引物,以THAP11-pcDNA3.1his/mycB真核表达载体为模板,PCR法扩增含不同ployQ的THAP11基因,将其克隆至带有线虫组织特异性启动子的pFx-unc119(Gene Marker dsRed)载体。酶切及测序鉴定正确后,用显微注射的方法制备THAP11转基因线虫,用荧光显微镜观察载体荧光表达并提取转基因线虫基因组DNA、RNA,PCR、RT-PCR方法检测其整合及表达情况。结果PCR扩增出含不同ployQ的THAP11-HIS片段,长度约1000bp,测序正确并构建pFx-unc119(THAP11)载体,THAP11转基因线虫的载体在线虫体内稳定表达红色荧光,转基因线虫基因组内有相应的THAP11插入及转录。结论成功构建的THAP11转基因线虫的载体能稳定转染线虫,将有助于THAP11功能的进一步研究。

SIK2参与TGFβ信号通路的调节

SIK2是调节糖脂代谢最重要的激酶之一.前期研究表明SIK2的同源家族成员SIK1可调控TGFβ信号通路的活性,但SIK2对TGFβ信号通路的调控作用尚无报导.本研究中我们检测了TGFβ通路对SIK2的调节作用以及SIK2对该通路活性的调控.结果表明,TGFβ刺激可诱导SIK2的mRNA表达上调;转染结合报告酶活性分析显示,SIK2可反式激活含TGFβ信号通路反应元件(CAGA)的人工启动子驱动的Luc报告基因的表达;在有TGFβ存在时甚至增强其表达;Western印迹分析表明TGFβ1诱导下敲低SIK2使p21蛋白表达水平下降.本研究结果显示SIK2可被TGFβ诱导表达,是一个新的TGFβ信号通路正调控因子.

在人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率条件的优化

本研究旨在探讨在建立人-小鼠异种移植模型中提高人红细胞产生效率的条件。本研究从三个方面分别进行条件优化:①受体免疫缺陷小鼠品系选择,分别对NOD/SCID和NOD/SCID/IL2rγnull两种小鼠品系进行移植,考察移植后不同品系小鼠嵌合率和人红细胞发育情况;②考察照射剂量和照射方法对小鼠生存率的影响;③优化人造血干细胞培养条件及感染方法,检测重建率及红细胞产生率。结果表明,移植后4周检测小鼠骨髓细胞显示,NOD/SCID/IL2rγnull小鼠人CD45比例可达(51.4±13.9)%,并能检测到人红细胞(5.98±3.46)%;利用X射线分2次对小鼠进行总剂量2.5 Gy的照射,照射后小鼠生存率可以达到100%;利用新鲜脐带血分离的CD34+细胞,不经过冻融和分选过程,在分离后72 h内完成转染和移植过程,移植后嵌合率可达(51.4±13.9)%,并且人红细胞产生的效率为(5.98±3.46)%。结论:利用X射线分两次照射NOD/SCID/IL2rγnull小鼠后通过尾静脉注射2×105个细胞,新鲜分离的人脐带血CD34+细胞在移植前缩短体外培养时间(≤72 h),有利于提高免疫缺陷小鼠体内人红细胞产生效率。

论我国工程建设监理制度

本文论述了工程建设监理的概念，我国工程建设监理制度的建立过程以及有关工程建设监理的规定，并对我国工程建设监理制度中存在的问题进行了分析讨论。

制造业企业IPO常见收入确认问题分析——以上市公司肇民科技为例

近年来,随着制造行业的业务形态不断深入发展,企业经营模式不断推陈出新,在符合国家会计准则前提下,收入会计处理办法也应与时俱进,不断创新丰富。企业收入确认可以采用总额法或净额法、一次性确认收入或分段确认收入等方法,同时如何验证收入确认方法是否体现了真实性、准确性和完整性要求,这对于以财务数据为中心的公众企业信息披露非常重要,各利益攸关方据此站在各自角度判断所得出的结论是有很大差异的。因此拟上市公司(IPO)或已上市公司采用何种方法确认收入,需要谨慎运用处理。上市或拟上市企业更需要创造出一套恰当的会计处理模式,既要符合企业会计准则,又要符合税务会计处理要求;既要符合证监会管理要求,切合资本市场需求,又要符合企业实际经营管理需要。必须经得起多维度的穿透检验,符合各方需求的综合处理方式。文章主要探讨了上市公司收入处理相关内容,并结合上海肇民新材料科技股份有限公司(以下简称“肇民科技”)会计处理做法进行探讨和分析。

产前心理干预结合助产护理对高龄分娩方式、产程时间及产妇负性情绪的改善研究

目的:分析产前心理干预结合助产护理对高龄分娩方式、产程时间及产妇负性情绪的改善影响。方法:选择我院2021年5月~2022年5月收治的50例高龄产妇,以抽签法按序分为研究组和对照组,各25例。为研究组提供产前心理护理和助产护理,对照组则提供常规护理。对比两组产妇的分娩方式和产程耗时,以及情绪改善评分。结果:研究组的汉密尔顿焦虑和抑郁评分均明显低于对照组(P<0.05);研究组的第一、第二和第三,以及总产程耗时均明显短于对照组(P<0.05);研究组的顺产率为92%,明显高于对照组的76%(P>0.05)。结论:对高龄分娩产妇,采用产前心理护理联合助产护理,有助于改善其分娩压力,提升顺产率,缩短产程耗时。

饮料中甜菊糖苷水解条件的优化及高效液相色谱法测定

该文建立高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定饮料中甜菊醇的定量分析方法,并优化饮料中甜菊糖苷水解成甜菊醇的条件。采用3 mmol/g路易斯酸水解,无水乙醇提取,以70%乙腈水溶液(体积分数)作为流动相,使用ZORBAX SB-C18色谱柱。结果表明,甜菊醇在5.0μg/mL~100.0μg/mL的浓度范围内线性关系较好(r2≥0.999),平均回收率在81.9%~92.3%,相对标准偏差在1.17%~3.67%。饮料中甜菊糖苷转化甜菊醇的最佳工艺条件:催化剂为氯化铁,提取温度100℃,甜菊糖苷浓度300 mg/mL,提取时间3 h,催化剂含量3 mmol/g。

FIDIC及土木工程施工国际通用合同条件

本文介绍好国际咨询工程师联合会及其组织税均和国际通用的土木工程施工合同条件.