评价水痘-带状疱疹病毒抗体的新型酶联免疫吸附方法

目的:水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白已被证明是高度准确的VZV特异性免疫指标。本研究以重组蛋白作为包被抗原建立了酶联免疫吸附方法(ELISA),用于评价水痘疫苗接种后的血清抗体水平。方法:筛选ELISA包被抗原,以重组蛋白gE和gB作为包被抗原,W1044国际参考品作为标准品,初步建立VZV抗体的ELISA法并对其进行验证。将建立的ELISA法与膜抗原荧光抗体(FAMA)法进行比对。结果:以gE和gB作为包被抗原,成功建立了ELISA方法,采用线性拟合,标准曲线在抗体浓度0.25~4 mIU·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,R^(2)>0.990,回收率为85%~120%,定量限为0.25mIU·mL^(-1),精密度CV<15%,特异性良好。与FAMA法相比,ELISA法的灵敏度为89%,特异性为93%,总符合率为90%。结论:本课题成功建立了VZV抗体ELISA检测方法,可作为一种灵敏、特异的水痘疫苗临床血清评价方法。

应用响应面法优化超薄高密度纤维板饰面胶合板的热压工艺参数

为提高超薄高密度纤维板饰面胶合板的性能,利用响应面法(Box-Behnken)优化其热压工艺参数。以杨木单板(替代胶合板)、超薄高密度纤维板为试验材料,以热压温度(120、130、140、150、160℃)、热压时间(50、100、150、200、250 s)、热压压力(0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 MPa)为影响因素,以超薄高密度纤维板饰面表面胶合强度、浸渍剥离长度为评价指标,采用单因素试验分析热压工艺(热压温度、热压时间、热压压力)对超薄高密度纤维板饰面的表面胶合强度和浸渍剥离长度的影响;采用响应面法设计多因素正交旋转组合试验,对试验设计范围内的影响因素进行优化热压参数组合、确定最优工艺参数。结果表明:热压温度对表面胶合强度的影响极显著,热压温度和热压压力对浸渍剥离长度影响极显著,热压时间和热压压力对浸渍剥离长度有显著的协同作用,共同影响板材的性能;试验范围内的最优工艺参数:热压温度150℃、热压时间210 s、热压压力0.8 MPa,板材的表面胶合强度为1.49 MPa、浸渍剥离长度为15 mm。

蚀斑法测定呼吸道合胞病毒滴度的建立和验证

目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导原则和《中华人民共和国药典》要求,验证该方法的准确性、精密性、线性和耐用性。结果采用0.8%微晶纤维素作为覆盖物,病毒孵育2~3 h为建立蚀斑法的最优条件。该蚀斑法测定不同浓度样品病毒滴度的结果相对偏倚均小于10%;试验内和试验间精密性几何变异系数分别为11%和18%;本方法的线性斜率为1.004,相关系数为0.9991;本方法中固定细胞的时间0.5~24 h均适用,差异无统计学意义(F=1.767,P=0.2225)。结论建立的蚀斑法具有较好的准确性、精密性、线性和耐用性,适用于呼吸道合胞病毒的滴度测定。

双源CT与超声对痛风的诊断价值对比研究

目的:研究双源CT和超声单独或联合应用对痛风的诊断效能,并分析二者诊断不同时期痛风的差异,以探讨其应用价值。方法:回顾性搜集就诊于青岛大学附属医院痛风专病门诊、同时接受双源CT和超声检查的326例患者,根据改良的2015年美国风湿病学会/欧洲抗风湿联盟痛风分类标准(排除双源CT及超声),搜集患者的临床及影像资料。计算双源CT和超声单独或联合应用诊断痛风的准确性,采用受试者操作特征曲线(ROC)比较诊断效能,同时比较二者诊断不同时期痛风的差异。结果:326例患者中,痛风患者243例,非痛风患者83例。双源CT和超声诊断痛风的准确率分别为84.1%、77.3%,ROC曲线下面积(AUC)分别为0.865、0.796(t=2.323,P=0.020)。将双源CT与超声联合使用诊断痛风,双阳性(两种检查结果均为阳性)、单阳性(至少一种检查结果为阳性)的准确率分别为77.6%、83.7%,AUC值分别为0.850、0.812,与单独使用双源CT相比,诊断效能没有提高。双源CT和超声诊断早期痛风(病程<1年)阳性率42.9%、71.4%,中期痛风(病程1~3年)81.8%、66.9%,晚期痛风(病程>3年)93.3%、80.0%,且二者在检测不同时期痛风时的差异均有统计学意义(χ^(2)=10.083、8.100、16.056,P值均<0.05)。结论:双源CT对痛风的诊断效能高于超声,应作为首选检查用于痛风的诊断;与超声联合应用无法提高诊断效能,无需进行联合检查。超声诊断早期痛风比双源CT敏感,推荐早期痛风患者首选超声检查。

痛风急性发作危险因素分析

目的分析痛风急性发作的危险因素。方法4649例痛风患者根据是否处于急性发作期分为急性组(302例,痛风急性期)和慢性组(4347例,痛风慢性期),采用单因素分析法及多因素Logistic回归分析法分析痛风急性发作的相关因素和危险因素。结果两组血清γ-谷氨酰转移酶(GGT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、尿酸、肾小球滤过率、合并痛风石比较,P均<0.05。多因素分析显示,高GGT、AST、GLU、TG、BUN、CREA及合并痛风石是痛风急性发作的独立危险因素(P均<0.05)。结论GGT、AST、GLU、TG、BUN、CREA及合并痛风石是痛风急性发作的危险因素。

大片刨花形态对可饰面定向刨花板力学性能的影响

【目的】探究大片刨花形态对可饰面定向刨花板力学性能的影响,为可饰面定向刨花板的生产原料筛选提供依据。【方法】以杨木大片刨花为试验材料,以刨花板力学性能为考察指标,选择大片刨花长度(70~230 mm)、宽度(10~58 mm)、厚度(0.3~1.1 mm)为影响因素,通过单因素试验研究刨花三维尺寸对所制备可饰面定向刨花板静曲强度(MOR)和内结合强度(IB)的影响,在此基础上运用Box-Behnken响应面法,以可饰面定向刨花板的静曲强度和内结合强度为响应值,以刨花的长(110,150和190 mm)、宽(34,46和58 mm)、厚(0.3,0.5和0.7 mm)3个因素为自变量,设计三因素三水平正交旋转组合试验,对大片刨花三维尺寸组合进行优选。【结果】单因素试验表明,大片刨花三维尺寸对板材的力学性能均有较大影响。大片刨花长度为150和110 mm时,板材的静曲强度、内结合强度分别达到最大值,为17.61和0.63 MPa;大片刨花宽度为46和34 mm时,板材的静曲强度、内结合强度分别达到最大值,为17.05和0.67 MPa;大片刨花厚度为0.5和0.7 mm时,板材的静曲强度、内结合强度分别达到最大值,为24.65和0.62 MPa。三因素三水平正交旋转组合优化试验表明,静曲强度和内结合强度回归模型的拟合系数R2分别为0.9915和0.9443,大片刨花长度和厚度对静曲强度的影响分别达极显著水平(P<0.01)和显著水平(P<0.05),对内结合强度的影响均达到极显著水平(P<0.01);交互作用分析表明,大片刨花长度与厚度、宽度与厚度的交互作用均对静曲强度有显著影响(P<0.05),长度与厚度的交互作用对内结合强度有显著影响(P<0.05)。【结论】最优的大片刨花形态参数为长140 mm、宽40 mm、厚0.5 mm,在该条件下制备的可饰面定向刨花板的静曲强度为20.31MPa,内结合强度为0.49 MPa。

我国生物质人造板产业资源利用与发展前景

目前,世界人造板需求量逐年增长,国际贸易环境日趋复杂,木材原料、季节性原料、区域性原料供应趋紧,生物质人造板行业面临严峻考验。围绕我国生物质人造板产业发展情况,介绍了生物质资源的主要种类及利用现状,分析了生物质人造板产业目前面临的问题挑战,并对其发展前景与趋势做出判断,对于新时期生物质人造板产业的发展具有重要意义。

线阵CCD用于实时动态测量技术研究

本文研究的是在连续光条件下线阵ＣＣＤ实时动态测量技术，除了考虑ＣＣＤ像元响应非均匀性、非线性等影响因素外，还应认真考虑采样频率、测量精度、动态范围、快速电路等问题。本文还详细讨论了测量精度和动态范围问题，推导了测量精度公式与动态范围公式。为了减小测量误差和提高被测信号的频率，必须相应减小积分时间。精度公式是进行线阵ＣＣＤ电路设计的基本依据公式。动态范围与频率无关，只与结构参数有关，为了充分利用ＣＣＤ的动态范围，激光功率要可调。

PAI-1基因4G/5G多态性与2型糖尿病合并肾病的相关性研究

目的 探讨血浆纤溶酶原激活物抑制物 - 1(PAI- 1)基因启动子区 4G/5 G多态性与中国北方汉族人 2型糖尿病合并肾病的相关性。方法 运用等位基因特异性引物 PCR扩增技术 ,检测病程超过 10年的 2型糖尿病患者 (143例 )和健康人 (85例 )的 PAI- 1基因 4G/5 G多态位点的基因型 ,用发色底物法测血浆 PAI- 1活性。结果 (1)糖尿病肾病组血浆 PAI- 1活性明显高于糖尿病非肾病组 (P<0 .0 5 )。 (2 ) 4 G/4 G基因型者 PAI- 1活性明显高于 4G/5 G和 5 G/5 G者 (P<0 .0 0 5 )。 (3)糖尿病肾病组 PAI- 14G/4 G基因型频率 (39% )和 4G等位基因频率 (6 0 .5 % )高于糖尿病非肾病组 (33%和 5 6 .5 % ) ,但无统计学意义 (P>0 .0 5 )。结论 PAI- 1活性升高是糖尿病肾病的独立危险因素 ,PAI- 1基因启动子区4G/5 G多态性与 PAI- 1活性密切相关 ,4G/4 G基因型可能是易发糖尿病肾病的遗传标记。

胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立及鉴定

目的建立呈胰岛素抵抗的HepG2细胞模型。方法将HepG2细胞置于10-7mol／L胰岛素培养液中24小时，使HepG2细胞胰岛素受体充分下调，检测并比较下调和未下调的HepG2细胞、糖、脂类代谢水平，发现：下调HepG2细胞（DR-HepG2）胰岛素受体减少了56％，将DR-HepG2细胞置于不同浓度胰岛素培养液中，胰岛素受体数仍明显减少，当培养液中胰岛素的浓度为10-7mol／L时，DR-HepG2细胞胰岛素受体数减少到17％，其14C-葡萄糖、14C-醋酸盐掺合量明显低于未下调的HepG2细胞（NDR-HepG2）。将DR-HepG2细胞置于不含胰岛素DMEM培养液中48小时，再用不同浓度的胰岛素刺激24小时。结果DR-HepG2细胞14C-葡萄糖、14C-醋酸盐掺合量仍明显低于NDR-HepG2细胞。结论将HepG2细胞置于10-7mol／L胰岛素环境中24小时，该细胞对胰岛素的作用产生抵抗，该胰岛素抵抗状态可维持48小时。

应用ELISA竞争法检测疫苗制品中残余的牛血清白蛋白

目的 应用ELISA 竞争（cELISA）法检测残余牛血清白蛋白（ESA）。方法 以BSA免疫家兔，获得高滴度的抗BSA血清；以BSA包被酶标板作为固相抗原，以梯度稀释的BSA为游离抗原，二者竞争结合抗体，以游离抗原浓度对数作为横坐标，相应吸收值为纵坐标作标准曲线，由对应样品的吸收值，可以求得样品中BSA含量。结果 当检测200、50、20和5ng/ml样品时，其试验内变异系数分别为4．5％、7．8％、5．8％和 14％，试验间变异系数分别为3．4％、8．8％、3.3％和30％。本试验还证明人血清白蛋白与牛血清白蛋白的交叉反应较低。结论cELISA可初步用于疫苗中残余BSA含量的检测。

以重组人巨细胞病毒pp65制备的多克隆抗体建立检测感染性病毒颗粒方法

人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%。免疫家兔制备的抗血清,ELISA抗体滴度高达1∶2560000;免疫印迹证明能与HCMVpp65抗原特异反应。将HCMV病毒感染细胞,以纯化的多克隆抗体建立了间接免疫荧光法,成功地检测到细胞中的病毒。因此,该方法为临床检测HCMV病毒活动性感染奠定了良好的基础。

辣椒嫁接育苗关键技术要点

辣椒种植土壤连作障碍对辣椒种植具有较大的不利影响,嫁接育苗技术是解决土壤连作障碍的有效措施之一。为进一步推广普及辣椒嫁接育苗技术提供参考,从嫁接品种选择(砧木及接穗)、育苗准备、播种育苗、嫁接方法、嫁接后管理等方面总结辣椒嫁接育苗的关键技术要点。

AR基因启动子区C-106T多态性与糖尿病肾病的相关性

目的 探讨染色体7q35区醛糖还原酶(AR)基因启动子区C- 10 6 T多态性与2型糖尿病肾病(DN)相关性。方法 运用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR- RFL P)、DNA测序技术及高浓度琼脂糖凝胶电泳分离技术对AR基因启动子区C- 10 6 T多态位点的等位基因和基因型进行了检测,将2型DM患者139例,按尿微量白蛋白排泄率(UAER)分为早期DN组(DN+组,6 1例)和非DN组(DN-组,78例)两个亚组,并以6 3例健康成人作为对照(CON组)。结果 AR基因启动子区C- 10 6 T多态位点存在T、C两种等位基因和CC、CT、TT三种基因型,DM组和CON组间各等位基因和基因型频率差异无显著性,DN+组T等位基因和CT基因型频率明显高于DN-组和CON组(P<0 .0 5 )。结论 AR基因启动子区C- 10 6 T多态性与DN的发生、发展有关。

eNOS基因第7外显子894G→T点突变与早期糖尿病肾病并高血压的关系

目的 探讨内皮细胞型一氧化氮合酶 (eNOS)基因第 7外显子 894位点多态性与糖尿病肾病并高血压的相关性。②方法 随机选择单纯 2型糖尿病病人 (2DM组 )、单纯糖尿病肾病病人 (DN组 )和糖尿病肾病并高血压病人 (DN +HP组 )为研究对象 ,应用PCR技术扩增目的片段 ,PCR产物以限制性内切酶BanⅡ进行酶切 ,2 0g/L的琼脂糖凝胶电泳分离。各组间等位基因频率及基因型频率的比较用卡方检验 ,危险因素分析用Logistic回归分析。③结果 DN病人组T等位基因和TG基因型频率显著高于单纯 2DM组 (χ2 =8.32～ 1 0 .2 3,P <0 .0 5 ) ,DN +HP组T等位基因及TG基因型频率与DN组比较差异无显著意义 (χ2 =0 .4 4、0 .6 1 ,P >0 .0 5 )。Lo gistic回归分析表明 ,体质量指数、HbA1c、TC、TG、eNOS基因第 7外显子 894G→T点突变是DN并高血压的危险因素。④结论 eNOS基因第 7外显子 894G→T点突变与糖尿病肾病并高血压有关。

“微时代”高校教育管理应变举措研究

伴随科学技术进步、网络技术发展,以微博、微信等为代表的新媒体迅猛地影响着学生的学习和生活,昭示着"微时代"的到来。"微时代"给高校教学与管理带来了前所未有的机遇和挑战,如何有效利用"微工具""微媒体",转变教育教学理念,创新高等教育管理方式,引导学生正确树立人生观、价值观,是当前"微时代"背景下高校工作的重中之重。

基于信号博弈的供应链交易成本研究

交易成本是企业组织模式变动的原因,是供应链成本管理的重要方面。首先从交易成本经济学的角度分析了供应链交易成本产生的原因及其决定因素和影响因素;然后,通过信号博弈的方法研究了信息不确定的市场中供应链企业间的交易活动,确定了不同市场均衡下供应链企业间的交易成本;最后,通过对不同均衡下供应链交易成本的分析,论述了降低交易成本的方法和途径,为供应链管理提供理论指导。

对高校学生教育管理工作精细化的思考

精细化管理作为一种企业管理理念,曾收到了良好的效果。自20世纪90年以来,精细化管理理念慢慢融入大学教育管理工作中,但精细化管理理念在高校学生教育管理工作中的应用研究目前还在刚刚起步。本文在深入分析精细化管理的思想本质,把握其与大学的融合态势的基础上,研究探索精细化管理在高校学生教育管理工作中的实施意义、实现策略、现实困境和运行保障等问题,以此推动高校学生教育管理工作更上一个新台阶。

人巨细胞病毒gp52蛋白与pp65蛋白融合表达及初步应用

建立以重组表达HCMV蛋白为抗原的检测试剂盒，提高试剂盒的敏感性及特异性。从病毒及质粒中分别扩增gp52（281～433aa，f1）及pp65（361～473aa，f2）2个片段，以不同酶切位点同时插入到pTrcHisB载体上，筛选正确的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。表达蛋白rp52～65占菌体总蛋白的30％，以包涵体的形式存在，分子量为35000.以金属螯合亲和层析（IMAC）及分子筛方法纯化表达蛋白，纯度达到96％，得率为22．9％。以间接法检测HCMVIgM阳性血清，敏感性达到90．4％（19／21）。融合蛋白具有良好的抗原性，可代替gp52及pp65作为HCMVIgM抗体检测试剂盒的包被抗原。