玉米酒精的浓醪同步糖化发酵工艺研究

以我国目前玉米酒精生产工艺为基础,通过选择液化[拌料干物浓度(dry solid,DS)、液化pH、液化时间、耐高温α-淀粉酶剂量、液化温度]和同步糖化发酵(葡萄糖淀粉酶剂量、酵母接种量、发酵温度等)等过程主要控制参数建立实验室玉米酒精发酵方法。实验确定液化条件为拌料DS 25%、液化pH 5.6、液化时间120 min、耐高温α-淀粉酶剂量40 U/g、液化温度88℃,此时液化醪黏度(91.2±2.8)mPa·s、还原糖为(11.65±0.03)g/100 g,符合同步发酵玉米酒精的液化指标要求。实验确定同步糖化发酵条件为葡萄糖淀粉酶剂量150 U/g、酵母接种量3%、发酵温度32℃,在该条件下酒精发酵过程稳定,CO 2失重数据最大标准差为0.38,占相应CO 2平均失重仅为2.96%;在发酵成熟醪中乙醇含量为(12.58±0.04)g/100 mL,发酵效率为97.71%,粮酒转化率为2.425 t/t,实验结果符合我国玉米酒精生产的实际情况。因此该方法可以为酒精生产工艺的优化及原辅料的选择提供数据参考。

小麦型饲粮中添加不同类型木聚糖酶对肉鸡生长性能、免疫与抗氧化功能、食糜黏度与pH的影响

为研究比较小麦型饲粮中添加不同类型木聚糖酶对肉鸡生长性能、养分消化率、免疫与抗氧化功能、食糜黏度与pH及肠道紧密连接蛋白(ZO-1)的影响,试验选取1日龄罗斯308雏鸡800只,随机分为4组,每组10个重复,每个重复20只鸡,公母各半。对照组饲喂基础饲粮,试验1~3组分别添加4 U/g中性木聚糖酶和2、4 U/g酸性木聚糖酶,试验期42 d。结果表明:(1)1~21日龄,各组间肉鸡生长性能无显著差异(P>0.05),从数值上看,试验组3的21日龄体重最高,料肉比(F/G)最低;22~42日龄,试验组3肉鸡42日龄体重较试验组1显著提高2.95%,平均日增重(ADG)提高3.58%(P<0.05),F/G显著降低2.92%(P<0.05);1~42日龄,试验组3 F/G较试验组1显著降低1.89%(P<0.05)。(2)试验组3粗蛋白质(CP)消化率较试验组1显著提高5.67%,总能(GE)消化率提高3.03%(P<0.05)。(3)试验组3血清总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)和免疫球蛋白A(IgA)含量较试验组1显著提高9.22%、10.46%、18.14%(P<0.05)。(4)试验组3回肠和肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性较试验组1显著提高17.15%、8.13%(P<0.05),肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性提高46.15%(P<0.05)。(5)试验组3 ZO-1表达量较对照组显著提高28.00%(P<0.05),食糜黏度较试验组1显著降低了21.19%(P<0.05)。综上所述,50%小麦型饲粮中添加木聚糖酶可提高养分消化率、增强肠道屏障功能和免疫与抗氧化功能,同时降低食糜黏度与pH,促进肉鸡生长性能,且4 U/g酸性木聚糖酶效果优于4 U/g中性木聚糖酶。

日粮中添加不同水平酸性蛋白酶对白羽肉鸡生产性能、血清生化指标和肠道形态的影响

本试验旨在研究添加不同水平酸性蛋白酶对白羽肉鸡生产性能、血清生化指标和肠道形态的影响。选取1日龄罗斯308白羽肉鸡400只,随机分为4组(每组10个重复,每重复10只鸡):其对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂分别添加0.40、0.80、1.60 U/g酸性蛋白酶的试验日粮,试验全期42d,分为前后两个试验阶段。结果表明:(1)生长性能:1-21日龄阶段,日粮中添加酸性蛋白酶可显著提高白羽肉鸡21日龄末重、ADG和降低F/G(P<0.05)。22-42日龄阶段,酸性蛋白酶对白羽肉鸡42日龄末重、ADG、ADFI和F/G无显著影响(P>0.05)。(2)血清生化指标:添加0.8 U/g酸性蛋白酶可显著提高白羽肉鸡21日龄的血清IgG、IgM含量(P<0.05);添加0.40 U/g可显著提高白羽肉鸡42日龄血清IgA含量(P<0.05)。添加酸性蛋白酶对白羽肉鸡21、42日龄的血清TP、ALB、GLB和BUN含量均无显著影响(P>0.05)。(3)肠道形态:1-21日龄,添加0.4 U/g酸性蛋白酶可显著提高回肠V/C(P<0.05);添加0.8 U/g可显著提高空肠、回肠绒毛高度和回肠V/C(P<0.05);添加1.6 U/g时可显著提高回肠绒毛高度(P<0.05),空肠隐窝深度和空肠V/C各组间差异不显著(P>0.05)。22-42日龄,各组间空肠和回肠绒毛高度、隐窝深度和V/C差异不显著(P>0.05)。由此可见,1-21日龄日粮中添加酸性蛋白酶可改善白羽肉鸡生产性能、提高其免疫能力和促进肠道形态。综合各项指标及添加成本,在白羽肉鸡1—21日龄日粮中添加0.4 U/g酸性蛋白酶,可获得较好生产性能与经济效益。

纤维素酶对玉米秸秆与酒糟混合青贮营养成分、发酵品质、瘤胃体外降解率及微生物多样性的影响

本试验旨在研究纤维素酶对玉米秸秆与酒糟混合青贮营养成分、发酵品质、瘤胃体外瘤胃降解率及微生物多样性的影响。试验以玉米秸秆与酒糟混合为青贮原料,设置3个组,分别为对照组(CK组)、纤维素酶组(CE组,纤维素酶制剂添加量为50 U/g)和纤维素酶与淀粉组(CES组,纤维素酶制剂添加量为50 U/g,淀粉添加量为2%),青贮发酵30 d。结果表明:1)与CK组相比,CE组和CES组干物质和粗蛋白质含量显著提高(P<0.05),CES组可溶性碳水化合物含量有提高趋势(P=0.053)。2)与CK组相比,CE组和CES组pH极显著降低(P<0.01),且CES组pH较CE组也极显著降低(P<0.01)。与CK组相比,CES组乳酸含量和乳酸/乙酸值均极显著提高(P<0.01),氨态氮/总氮值显著降低(P<0.05),乳酸菌数量极显著增加(P<0.01),且CES组乳酸菌数量较CE组也极显著增加(P<0.01);CE组乳酸含量显著提高(P<0.05),乳酸/乙酸值有提高的趋势(P=0.064),氨态氮/总氮值有降低的趋势(P=0.089),乳酸菌数量显著增加(P<0.05)。3)与CK组相比,CE组和CES组干物质体外降解率显著提高(P<0.05),CES组中性洗涤纤维体外降解率显著提高(P<0.05),CE组中性洗涤纤维体外降解率有提高的趋势(P=0.071)。4)与CK组相比,CES组Observed_species极显著提高(P<0.01),Shannon指数有提高的趋势(P=0.088),Chao1指数和Ace指数极显著提高(P<0.01),且CES组Chao1指数和Ace指数显著高于CE组(P<0.05);CE组Observed_species有提高的趋势(P=0.079)。与CK组相比,在门水平上,CE组和CES组厚壁菌门的相对丰度显著提高(P<0.05),变形菌门的相对丰度显著降低(P<0.05);在属水平上,CE组和CES组植物乳杆菌属和柠檬乳杆菌属的相对丰度显著提高(P<0.05),布氏乳杆菌属的相对丰度显著降低(P<0.05)。综上所述,玉米秸秆与酒槽混合后添加纤维素酶和淀粉可降低青贮过程的营养损失,改善发酵品质和瘤胃体外降解率,并提高青贮饲料微生物群落的多样性及改善菌群结构,且同时添加纤维素酶与淀粉效果更优。

复合葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶对肉鸡生长性能、养分消化率、血清指标及肠道形态的影响

本试验旨在研究复合葡萄糖氧化酶(GOD)与过氧化氢酶(CAT)对肉鸡生长性能、养分消化率、血清指标及肠道形态的影响。选用健康的1日龄罗斯308白羽肉鸡600只,随机分成6组,每组10个重复,每个重复10只鸡(公母各占1/2)。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加250 g/t GOD、250 g/t CAT、250 g/t GOD+125 g/t CAT、250 g/t GOD+250 g/t CAT和250 g/t GOD+500 g/t CAT。试验分为1~21日龄和22~42日龄2个阶段,试验期42 d。结果表明:1)1~21日龄,与对照组相比,250 g/t GOD+250 g/t CAT组的21日龄体重和平均日增重显著升高(P<0.05),料重比(F/G)显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,250 g/t GOD+250 g/t CAT组1~21日龄粗脂肪消化率显著升高(P<0.05),干物质、粗蛋白质和总能消化率分别提高了1.94%、1.47%和2.37%(P>0.05)。3)与对照组相比,250 g/t GOD组21日龄血清白蛋白含量显著升高(P<0.05),250 g/t CAT组血清免疫球蛋白G含量显著升高(P<0.05),250 g/t GOD+125 g/t CAT组血清免疫球蛋白A含量显著升高(P<0.05)。4)与对照组对比,250 g/t CAT组21日龄血清超氧化物歧化酶活性显著降低(P<0.05),250 g/t GOD+125 g/t CAT组血清丙二醛含量显著升高(P<0.05)。5)与对照组相比,250 g/t GOD+125 g/t CAT组和250 g/t GOD+250 g/t CAT组21日龄回肠隐窝深度显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加250 g/t GOD+250 g/t CAT可提高肉鸡1~21日龄的生长性能和养分消化率,添加250 g/t GOD+125 g/t CAT和250 g/t GOD+250 g/t CAT可促进肉鸡肠道发育。

不同液化pH对发酵生产玉米酒精的影响

为研究不同液化pH对玉米酒精同步糖化发酵的影响,以我国目前玉米酒精生产工艺为基础构建玉米酒精发酵模型,研究不同液化pH对液化、发酵过程和发酵成熟醪指标的影响。结果表明,液化还原糖在液化pH为5.6时最高,分别较液化pH为5.2和4.8的提高16.48%和121.08%;在液化pH为4.8~5.6内的CO_(2)失重标准差表明,该模型稳定性良好,最大标准差仅为0.55,同时发酵CO_(2)的失重速率随着液化pH的提高而下降;发酵成熟醪酒精浓度在液化pH 5.6的最高,分别较液化pH 5.2和4.8提高0.32%和1.18%;发酵成熟醪残淀粉浓度在液化pH 5.6的分别较液化pH 5.2和4.8的降低0.66%和5.26%;同时发酵成熟醪残过滤总糖浓度在液化pH 5.6的分别较液化pH 5.2和4.8的降低3.61%和提高11.93%。因此,玉米酒精生产过程必需同时兼顾耐高温α-淀粉酶的作用效果和发酵初期的还原糖浓度,以保证发酵速率和发酵成熟醪指标。

酸性木聚糖酶在玉米豆粕型日粮中的研究

为研究酸性木聚糖酶和中性木聚糖酶在玉米-豆粕型饲粮中对817肉鸡生长性能、营养表观消化率、血清生化指标、回肠抗氧化功能及紧密连接蛋白的影响,试验选取600只1日龄体重相近的健康817肉公鸡,随机分为3组,每组10个重复,每个重复20只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加2000 U/kg中性木聚糖酶或酸性木聚糖酶。试验期为42 d,分前期(1~21 d)和后期(22~42 d)两个阶段饲养。结果表明:饲粮中添加2000 U/kg酸性木聚糖酶可显著提高1~21日龄白羽肉鸡日增重(P<0.05),一定程度提高总能、脂肪、钙的代谢率,白羽肉鸡机体的体液免疫功能及回肠的抗氧化能力,并且可显著提高回肠组织闭合小环蛋白-1(ZO-1)的相对表达量(P<0.05),有助于维持肠道屏障功能。

雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达及其酶学性质研究

采用同源克隆法获得了雪白根霉的脂肪酶基因(rnl),将其连接到pPICZαA载体上,得到重组表达载体pPICZαA-rnl。将表达载体pPICZαA-rnl用限制性内切酶SacI线性化后,电击转入毕赤酵母X-33中。雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母X-33中成功表达,重组菌株摇瓶培养144 h后,酶活可达48 U/mL。重组酶最适pH值为8.5,最适反应温度为35℃。1 mmol/L的Mn2+,Ca2+和K+以及1%的表面活性剂吐温20,吐温80,曲通100对重组脂肪酶具有激活作用。重组酶的最适底物为三月桂酸甘油酯(C12)。

优化密码子及诱导温度提高雪白根霉脂肪酶在毕赤酵母中的表达

根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对雪白根霉脂肪酶基因(rnl)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(rnl-opt)GC含量由原来的46%提高到49%,碱基A,T,C,G均匀分布,减少了AT和GC富集区,适应指数由0.82提升到0.85。将rnl-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。将含有rnl和rnlopt的重组工程菌在摇瓶和50 L发酵罐中进行诱导表达。摇瓶培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活分别为458、956 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活和总蛋白浓度分别为14 856、30 500 U/m L和3.61、7.8 g/L。为了进一步提高含rnl-opt重组工程菌的表达酶活,对其在50L发酵罐培养的诱导温度进行优化,当诱导温度为22℃时,含rnl-opt重组工程菌的酶活和细胞湿重均达到最大值分别为39 520 U/m L和461 g/L。相对于30℃,酶活和细胞湿重分别提高了30%和16%。

门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina P10脂肪酶基因的克隆及其在酵母中的表达

采用同源克隆法获得了门多萨假单胞菌Pseudomonas mendocina P10脂肪酶基因的全长序列,DNA测序结果表明,该基因的DNA全长序列为801bp,编码267个氨基酸,推测蛋白相对分子量为29.95ku。将该脂肪酶基因连接到pPICZαA载体上得到重组表达质粒,转化Pichia pastoris X-33。脂肪酶基因在Pichia pastoris X-33中实现了分泌性表达,摇瓶发酵液上清酶活最大可达8U/mL。

克氏担孢酵母脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达

以克氏担孢酵母V3脂肪酶基因为研究对象,构建毕赤酵母稳定的高效表达系统。采用同源克隆法从克氏担孢酵母V3中获得一个脂肪酶基因,并将其构建到表达载体pPICZαA,转入毕赤酵母X33中,成功实现了克氏担孢酵母V3脂肪酶基因在毕赤酵母X33中的表达。重组工程菌摇瓶培养120 h后,酶活力可达18 U/mL。重组酶的最适反应温度为60 ℃,最适pH值为5.0。1 mmol/L的Mg2+、K+和Na+以及质量浓度为1 g/100 mL的曲通-100、吐温-80、吐温-20对重组KLIP具有激活作用。重组酶的最适底物为三硬脂酸甘油酯(C18)。

黑曲霉葡萄糖氧化酶基因改造及其在毕赤酵母中的表达

为构建并筛选高效表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株,采用PCR法从黑曲霉基因组中获得葡萄糖氧化酶全长基因(GOD),采用定点突变法和重叠PCR法获得GOD^(mut)基因,将其插入到pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-GOD^(mut),经Pme I线性化后,用电击法转化毕赤酵母菌株X33,经大量筛选,获得1株高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GOD^(mut),在此基础上,去除GOD基因的信号肽,用同样的试验方法构建并筛选高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GODnew,结果表明:X33-pPIC-GOD^(mut)的产酶水平为460. 3 U/mL,X33-pPIC-GODnew的产酶水平为714. 9 U/mL,是前者的1. 52倍,该酶的最适作用温度和最适作用pH值分别为40℃和5. 0,成功获得1株高效稳定表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株。

密码子优化及透明颤菌血红蛋白共表达提高耐热脂肪酶在毕赤酵母的表达

根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对Thermomyces lanuginosus脂肪酶基因(tll)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(tll-opt)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb-opt)中碱基GC含量分别由原来的46%提高到49%和42%提高到51%,碱基A、T、C、G均匀分布,减少了AT和GC富集区,利于tll-opt和vhb-opt基因在毕赤酵母X33中的表达。将tll和tll-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。摇瓶培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为7 U/m L和16 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为201 U/m L和430 U/m L。为了进一步提高含tll-opt重组工程菌的表达酶活性,将vhb-opt转入该重组工程菌得到工程菌VHb^+(含有tll-opt和vhb-opt)。重组工程菌VHb+在摇瓶培养条件下最大酶活力为23 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.39倍和3.28倍。重组工程菌VHb+在50 L发酵罐瓶培养条件下最大酶活力为610 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.41倍和3.03倍。

里氏木霉α-半乳糖苷酶基因agl2在毕氏酵母中高效表达

通过反转录PCR从里氏木霉Rut C-30基因中克隆到α-半乳糖苷酶基因agl2,将其构建到具有AOX1强启动子的表达载体p PIC9K中,线性化后转化到毕氏酵母GS115中进行表达。结果表明agl2基因在毕氏酵母GS115中得到了高效表达,在50 L发酵罐中高密度发酵168 h,酶活达最高值1 106 U/m L。经PCR产物鉴定,结果表明agl2基因已整合到毕氏酵母GS115基因组中。

枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因优化及表达

研究旨在获得高效表达的枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因毕赤酵母工程菌株。采用PCR方法,从枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis基因中克隆出甘露聚糖酶全长基因(WBMAN);并利用定点突变、重叠PCR的方法,获得突变型甘露聚糖酶基因;将其连接至载体pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-WB-MANmut,用DpnI酶切重组质粒使其线性化,用电击的方法把线性化的重组质粒转入毕赤酵母(Pichiapastoris)X33中,经大量筛选,获得一株高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株。结果表明:在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导48 h发酵酶活力达到120 U/ml,最适作用温度和pH值分别是40℃和6.0。枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达,具有开发作为工业用酶的潜能。

博落回散与葡萄糖氧化酶对仔猪生长性能、腹泻率、养分消化率和血液生化指标的影响

本试验旨在研究博落回散与葡萄糖氧化酶替代抗生素对仔猪生长性能、腹泻率、养分消化率和血液生化指标的影响。试验选用360头35日龄的健康"杜×长×大"三元仔猪,按照体重相近、公母各半的原则,将其随机分为对照组、抗生素组、试验组,每组6个重复,每个重复20头仔猪。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲粮+1000mg/kg土霉素钙+50mg/kg吉他霉素+25mg/kg喹烯酮,试验组饲喂基础饲粮+300mg/kg博落回散+750U/kg葡萄糖氧化酶,试验期15天。结果表明:1)与对照组相比,试验组降低耗料增重比(P<0.05)、腹泻率(P<0.05),提高干物质、粗蛋白、总能消化率(P<0.05),降低血清AST含量(P<0.05),同时提高血清SOD活力、GSH-Px活力、IL-6和IL-10含量,均差异显著(P<0.05);提高血清IgG含量(P<0.01)。2)试验组和抗生素组相比,各项指标均差异不显著。综上所述,博落回散和葡萄糖氧化酶可替代抗生素土霉素钙、吉他霉素和喹烯酮组合应用在饲粮中,降低仔猪的腹泻率,提高仔猪抗氧化能力和免疫力,增强对营养物质的消化率,从而提高生长性能。

共表达内质网响应蛋白HAC1对α-半乳糖苷酶在毕氏酵母中表达的影响

为提高毕氏酵母(Pichia pastoris)中重组α-半乳糖苷酶的表达,将来源于P.pastoris GS115的hac1基因构建至pPIC9K表达载体中,转化到重组P.pastoris中与α-半乳糖苷酶共表达。研究结果表明,在AOX1启动子控制下,HAC1过表达提高了重组P.pastoris中α-半乳糖苷酶蛋白表达含量,使α-半乳糖苷酶活性提高了2.2倍。经PCR产物鉴定,结果表明重组P.pastoris基因组中插入hac1基因。经50 L发酵罐甲醇诱导168 h,Gal-HAC1-4#工程菌最终酶活达到6 560 U/mL,比Gal-21#工程菌提高了27%。甲醇诱导后Gal-HAC1-4#发酵液中粗蛋白浓度均高于Gal-21#工程菌。表明共表达HAC1蛋白可提高毕氏酵母产α-半乳糖苷酶蛋白的能力。

丁酸类添加剂及其与合生元组合对肉鸡生长性能和肠道健康的影响

本试验旨在研究丁酸类添加剂及其与合生元(SYN)组合替代杆菌肽锌(BAC-Zn)对肉鸡生长性能和肠道健康的影响。选取1日龄健康罗斯(Ross) 308白羽肉鸡720只(公母各占1/2),随机分为6组,每组6个重复,每个重复20只鸡。对照(NC)组饲喂不含抗生素的玉米-豆粕型基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加10 mg/kg BAC-Zn(BAC-Zn组)、1 g/kg包膜丁酸钠(CSB)(CSB组)、1 g/kg CSB+0.5 g/kg SYN(CSB+SYN组)、1 g/kg三丁酸甘油酯(GTB)(GTB组)、1 g/kg GTB+0.5 g/kg SYN(GTB+SYN组)。试验期42 d。结果显示:1)与NC和BAC-Zn组相比,饲粮中添加GTB显著降低肉鸡1~21日龄时的料重比(F/G)(P <0.05),添加CSB显著提高22~42日龄时的平均日采食量(ADFI)(P<0.05),添加CSB+SYN或GTB+SYN显著提高1~21日龄时的平均日增重(ADG)(P<0.05),显著降低1~21日龄时的F/G(P<0.05)。2)与BAC-Zn组相比,饲粮中添加CSB、GTB或GTB+SYN显著降低肉鸡空肠食糜中大肠杆菌数量;添加GTB显著提高空肠食糜中乳酸杆菌数量及盲肠食糜中总菌、厚壁菌门、拟杆菌门、梭菌ⅪⅤa、乳酸杆菌数量(P<0.05);添加CSB+SYN显著提高空肠食糜中梭菌ⅪⅤa数量及空肠和盲肠食糜中乳酸杆菌数量(P<0.05);添加GTB+SYN显著提高盲肠食糜中总细菌和乳酸杆菌数量(P<0.05)。3)与NC组相比,饲粮中添加CSB+SYN、GTB或GTB+SYN显著提高肉鸡盲肠食糜中总短链脂肪酸(SCFAs)、乙酸和丙酸浓度(P<0.05)。与BAC-Zn组相比,饲粮中添加GTB+SYN显著提高肉鸡盲肠食糜中总SCFAs和乙酸浓度(P<0.05)。4)与BAC-Zn组相比,饲粮中添加GTB显著提高肉鸡空肠组织连接黏附分子2(JAM2)和盲肠组织白细胞介素-2(IL-2)的mRNA相对表达量(P<0.05),添加GTB+SYN显著提高空肠组织IL-2和闭合小环蛋白-1(ZO-1)以及盲肠组织ZO-1和JAM2的mRNA相对表达量(P<0.05),添加GSB+SYN显著提高盲肠组织黏蛋白2(MUC2)的mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,CSB和GTB与SYN组合较其单独使用具有更好的促生长效果,GTB较CSB可更好地促进肠道有益菌增殖和SCFAs生成,降低炎症反应,增强肠道屏障,且SYN能增强其益生作用。

小麦型饲粮中添加酸性木聚糖酶对肉鸡消化道食糜黏度的影响

本试验旨在对比研究酸性和中性木聚糖酶的酶学性质及其在小麦型饲粮中的降黏效果。饲养试验检测2种木聚糖酶(酸性和中性木聚糖酶)对胃肠液的耐受性;pH 3.5条件下测试2种木聚糖酶的相对活性;选用木聚糖纯品和谷物检测2种木聚糖酶的降黏效果;选取512只1日龄的817白羽肉公鸡,随机分为4组(每组8个重复,每个重复16只),对照组饲喂小麦型基础饲粮,试验组在小麦型基础饲粮中分别添加4 U/g中性木聚糖酶、2和4 U/g酸性木聚糖酶,试验期42 d。结果显示:1)相比中性木聚糖酶,酸性木聚糖酶对肉鸡胃肠液有更好的耐受性。2)在pH 3.5条件下,酸性木聚糖酶的相对活性比中性木聚糖酶高64.1%。3)对于高黏(黑麦)阿拉伯木聚糖,相比中性木聚糖酶,酸性木聚糖酶的降黏效果提升了42.9%。4)在小麦型饲粮中添加木聚糖酶提高了肉鸡的生长性能,其中4 U/g酸性木聚糖酶对生长性能的提高效果优于4 U/g中性木聚糖酶。5)对于饲喂小麦型饲粮的肉鸡,4 U/g酸性木聚糖酶组粗蛋白质表观消化率分别比2 U/g酸性木聚糖酶组、4 U/g中性木聚糖酶组和对照组提高了3.5%(P<0.05)、7.4%(P<0.05)和7.9%(P<0.05)。6)与4 U/g中性木聚糖酶组和对照组相比,在小麦型饲粮中添加4 U/g酸性木聚糖酶显著降低了肉鸡肌胃、空肠和回肠食糜黏度(P<0.05)。7)与对照组相比,在小麦型饲粮中添加4 U/g酸性木聚糖酶显著提高了肉鸡胃蛋白酶和胰蛋白酶的活性(P<0.05)。由此可见,酸性木聚糖酶在pH 3.5条件下有更高的活性,更能耐受动物胃肠液,具有更好的降低黏度效果;在小麦型饲粮中添加4 U/g酸性木聚糖酶能改善肉鸡的生长性能、粗蛋白质表观消化率、食糜黏度和消化酶活性,其效果优于同剂量的中性木聚糖酶。

花鳗鲡重组促黄体生成素在毕赤酵母中的表达

采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以lin-ker将两个基因连接成单个基因LHβα。然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα。再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7%甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000。