自噬相关蛋白5在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响

目的评估自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)在结肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系,分析ATG5对结肠癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法运用在线分析工具cProsite分析ATG5 mRNA以及ATG5蛋白在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达水平。使用Kaplan-Meier Plotter分析ATG5表达水平对结肠癌患者预后的影响。免疫组织化学法检测100例结肠癌组织中ATG5表达,χ^(2)和Fisher's检验分析ATG5表达水平与临床病理特征的相关性。转染质粒或小干扰过表达或敲低ATG5后,Western blotting检测转染效率及自噬相关标记物微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的变化,Transwell实验评估过表达或敲低ATG5后结肠癌细胞的迁移及侵袭能力。使用LinkedOmics数据库分析结肠癌中与ATG5相关的差异表达基因,并进行基因本体(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。结果结肠癌组织中ATG5 mRNA及蛋白的表达水平均低于癌旁正常组织(P<0.001)。低表达ATG5的结肠癌患者无复发生存期明显短于高表达ATG5的结肠癌患者(P<0.001)。免疫组化结果表明,结肠癌组织中ATG5的表达水平与淋巴结转移相关,低表达ATG5的结肠癌患者更容易发生淋巴结转移(P=0.027)。Western blotting及Transwell实验显示在SW1116细胞中过表达ATG5后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增加,细胞的迁移侵袭能力减弱(P_(ATG5)=0.001;P_(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)=0.04;P_(迁移)<0.001,P_(侵袭)<0.001);反之,在DLD1细胞中敲低ATG5后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ降低,细胞的迁移侵袭能力增加(P_(ATG5#1)=0.021,P_(ATG5#2)<0.001;P_(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ#1)=0.013,P_(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ#2)=0.02;P迁移<0.001,P侵袭<0.001)。ATG5相关的差异表达基因富集分析结果显示,结肠癌中ATG5可能通过影响DNA损伤反应、染色质重排及Notch信号通路等途径影响结肠癌的转移。结论ATG5在结肠癌中低表达,并与患者淋巴结转移及预后显著相关,结肠癌细胞中ATG5能够增加细胞自噬水平并抑制细胞侵袭转移,提示ATG5及其调控的自噬过程可能成为结肠癌临床治疗的新靶点。

胰腺癌不同进展期血清外泌体蛋白质组学分析

目的筛选健康对照与不同进展期胰腺癌患者的血清外泌体差异蛋白质,绘制差异蛋白质表达图谱,并分析差异蛋白质参与的生物学过程。方法采用非标记定量蛋白质组学进行外泌体蛋白质检测,筛选差异蛋白质并进行生物信息学分析;利用蛋白免疫印迹对与胰腺癌进展相关的蛋白质进行血清学验证。结果在对照组、胰腺癌未转移组和转移组样品中共检测到2242个蛋白质。通过不同分组差异蛋白质分析,共鉴定出664个差异具有统计学意义的蛋白质,主要参与囊泡介导转运、局灶黏附、细胞外基质(ECM)受体相互作用等信号通路。此外,鉴定到在3组间差异均有统计学意义的蛋白质5个,验证发现富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)在胰腺癌转移组外泌体中表达量较高。结论对照组、胰腺癌未转移组和转移组间蛋白质表达存在差异,差异蛋白质主要富集于局灶黏附、细胞外基质受体相互作用等信号通路,且在3组间表达均有差异的外泌体蛋白质LRG1可能成为监测胰腺癌进展的血清学标志物。