Aqp5-C末端截断小鼠的构建及其潜在应用

目的 Aqp5蛋白的C末端结构对其功能的发挥起着重要作用。本研究旨在通过构建Aqp5-C末端6个氨基酸缺失的突变小鼠,验证Aqp5-C末端6个氨基酸缺失对该蛋白亚细胞定位的影响,并初步比较研究此突变小鼠的肺脏组织结构和转录组的改变,探讨该突变小鼠用于Aqp5功能研究的潜在应用价值。方法 采用基于gRNA的CRISPER Cas 9技术构建Aqp5末端6个氨基酸缺失的突变小鼠(Aqp5-p.I260*)并进行序列鉴定,采用组织切片、荧光染色和显微镜观察等手段明确突变蛋白在肺泡上皮细胞的亚细胞定位和突变小鼠肺组织结构,采用转录组测序研究突变小鼠肺脏基因差异表达。结果 本研究成功构建了Aqp5蛋白C末端截断小鼠,发现p.I260*改变了亚细胞定位,Aqp5-p.I260*鼠肺泡数目少于野生鼠;Aqp5-p.I260*小鼠肺组织的转录组上调基因主要富集于发育和造血细胞谱系等通路,其Aqp5功能缺陷后诱发炎症相关通路基因(Hspa1a、IL-1β、Col3a1等)的表达水平改变。结论 本研究在体验证了小鼠Aqp5蛋白C末端6个氨基酸缺失突变对该蛋白细胞膜定位的关键作用,表明了以该小鼠作为Aqp5功能缺陷模型探讨Aqp5蛋白在肺发育和骨髓造血、炎症和免疫调节等生物学功能的潜在应用价值。

西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤放线菌多样性、新颖性及抗菌活性研究

目的探究西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤放线菌多样性、新颖性和活性菌株的次级代谢产物,为放线菌新物种和新抗生素的发现储备菌种资源。方法采用10种分离培养基,利用稀释涂布法进行放线菌的分离纯化;通过PCR扩增和测序,比对16S rRNA序列进行放线菌多样性和新颖性分析;采用纸片扩散法对潜在放线菌新物种发酵液的酯相萃取物、水相和菌体相进行抗菌活性筛选;采用反相柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20和半制备HPLC方法分离纯化菌株Hoyosella sp.S15b3-3粗提物的活性成分,通过ESI-MS、NMR波谱数据,并结合文献确定化合物的结构;采用微量稀释法评价化合物1和2的抗菌活性。结果从15份样品中分离获得1343株放线菌,分属于10目23科42属,其中涅斯捷连科菌属、拟诺卡菌属和链霉菌属为优势菌属;15株放线菌与近缘菌株的16S rRNA基因的最高相似度≤98.65%;5株潜在新物种对至少1株检定菌表现出抗菌活性;从Hoyosella sp.S15b3-3中分离鉴定2个已知化合物1(3-吲哚甲醛)和2(2-羟基-1-(3-吲哚)乙酮),化合物1对2株鲍曼不动杆菌(2799和ATCC19606)有一定的抑制作用,MIC值分别为64和32μg/mL。结论西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤含有丰富的放线菌资源,且新颖性较高,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力,值得深入研究。

肺炎支原体P1黏附蛋白结构与功能及其致病性的研究新进展

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)是一种基因组较小的微小生物,它是最小的可自由生活、无细胞壁、可自我复制的原核生物。MP是引起社区获得性肺炎(community-acquired pneumonia,CAP)的常见病原体,可侵犯呼吸道引起喉炎、咽炎、支气管炎、非典型肺炎和加重哮喘,亦可引起肺外并发症。MP通过黏附细胞器黏附于宿主呼吸道上皮细胞从而破坏气道黏膜的完整性和免疫防御功能,P1蛋白作为一个关键黏附蛋白,不仅在MP与宿主细胞黏附过程中发挥重要作用,还参与MP在气道表面的滑行和在气道的定殖和致病性。本文对P1蛋白的结构、功能及其致病性等方面进行综述,重点关注P1蛋白参与MP黏附、滑行和致病的作用机制。

澳门红树林植物内生放线菌多样性及新颖性研究

目的研究澳门红树林植物内生放线菌多样性及新颖性,为放线菌新物种及新抗生素发现奠定基础。方法 12份采集自澳门红树林的植物样品,消毒粉碎后,撒在10种分离培养基上分离内生放线菌,采用ISP2培养基进行菌株纯化;通过PCR扩增和测序获得16S r RNA基因序列,并提交到数据库中进行搜索比对,开展内生放线菌多样性和新颖性分析;放线菌潜在新物种经液体发酵、离心后,上清液经乙酸乙酯萃取,菌丝经丙酮浸泡,分别获得发酵液水相样品、发酵液酯相样品和菌丝丙酮浸提液3类样品;样品通过纸片扩散法进行抗菌活性初筛。结果从12份植物样品中得到192株内生放线菌,分布于8个目17个科30个属,其中链霉菌为优势菌属;16S r RNA基因序列相似性低于98.6%的菌株共有22株,其中菌株4Q3S-3和2Q3S-4-2分别为弗莱德门菌属(Friedmanniella)和中村菌属(Nakamurella)的新种,放线菌潜在新物种的鉴定工作正在进行;2株放线菌新种及6株潜在放线菌新种的抗菌活性筛选结果表明,5株具有抗菌活性。结论澳门红树林植物内生放线菌资源丰富多样,新颖性高,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力,值得深入研究。

1986-2016年国家自然科学基金红树林及其药物研究领域资助概况

红树林是热带和亚热带海岸潮间带上独特的生态系统,栖息在该生态系统中的植物和微生物是重要的天然药物资源。国家自然科学基金委员会从1986年成立开始资助与红树林相关的基础与应用基础研究,至今已超过265个项目,经费超过1.13亿元人民币。其中,与药物研究相关项目超过50项,达2282.4万元人民币。这些资助促进了红树林研究各领域人才的培养、队伍的形成和成果的产出。本文简述了红树林的分布与特点,结合本专刊研究进展,概括了国家自然科学基金委员会对红树林,尤其是红树林微生物药学领域资助的情况。

基于SAT技术探讨新冠肺炎疫情下北京地区儿童肺炎支原体感染流行病学特征

目的研究北京地区儿童肺炎支原体(MP)感染情况和流行病学特征,为新冠肺炎疫情下本地区MP感染的防治提供理论依据。方法选择2018年1月至2021年12月在首都医科大学附属北京儿童医院就诊的5951例社区获得性肺炎患儿为研究对象。所有患儿采集咽拭子标本,采用实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测MP靶标RNA。结果5951例患儿的MP总检出率为36.62%(2179/5951)。4年中MP出现一次暴发流行(2018年至2019年),流行年检出率可高达42.81%。新冠肺炎疫情爆发后,MP感染率明显降低;不同季节MP检出率差异具有统计学意义(P<0.0001),总检出率最高季节为秋季(47.48%)和夏季(41.78%);新冠肺炎疫情爆发后,MP的季节流行特点发生改变;各年龄组间MP检出率差异具有统计学意义(P<0.0001),学龄组患儿MP总检出率最高(60.24%),其次为青春组(49.47%),婴儿组MP总检出率最低(5.97%),且新冠肺炎疫情前后,MP感染高发人群未发生改变;女性患儿MP总检出率(38.75%,1037/2676)高于男性患儿(34.87%,1142/3275),差异具有统计学意义(χ^(2)=9.56,P=0.002);新冠肺炎疫情爆发后,不同性别患儿间MP检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结果MP是北京地区儿童社区获得性肺炎的主要病原体,其分布特点具有季节、年龄和性别差异。新冠肺炎疫情下,MP感染率明显降低,但无显著性别差异,且高发季节发生改变。

广西茅尾海红树林根围淤泥放线菌多样性及抗菌活性

目的对广西茅尾海红树林保护区植物根部淤泥中的放线菌进行分离鉴别,研究放线菌的多样性和抗菌活性。方法选用10种分离培养基,经稀释涂布法分离放线菌;通过PCR扩增,测序后获得菌株16SrRNA基因序列;邻接法构建系统发育树并进行同源性分析,探测放线菌的多样性;针对发酵液经乙酸乙酯萃取后的有机相、水相及菌丝丙酮浸泡液共3类样品,采用纸片扩散法开展抗菌活性研究。结果从8份红树林植物根围淤泥样品中分离纯化得到244株放线菌,分布于5个目13个科29个属,优势菌属为链霉菌属和小单孢菌属;16SrRNA基因序列相似性低于98.65%的放线菌共有4株,可能为潜在新物种;抗菌活性筛选结果表明,83株放线菌的抗菌活性阳性率达71.1%。结论广西茅尾海红树林保护区植物根围淤泥中抗菌活性放线菌的多样性丰富。

湖北利川喀斯特洞穴放线菌多样性及抗菌活性研究

目的勘探湖北利川喀斯特洞穴放线菌多样性并进行抗菌活性筛选,以期发现新的药用微生物资源,为新抗生素发现奠定基础。方法采用10种分离培养基,从来自3个洞穴内的38份样品中分离放线菌;通过基于16S r RNA基因序列的系统发育学分析,开展放线菌多样性研究;对67株放线菌发酵液乙酸乙酯萃取浓缩物和菌丝体丙酮浸提浓缩物进行抗菌活性筛选;阳性菌株进行次级代谢产物生物合成基因PKSⅠ、PKSⅡ和NRPS的初步筛选。结果从38份样品中共分离得到197株放线菌,它们分布于6个目13个科24个属,其中链霉菌为优势菌属,菌株T3-7-1为微杆菌科的一个潜在新分类单元;发酵67株放线菌,均在至少一个抗菌活性检测中显示为阳性;67株阳性菌株中有63株基于PKSⅠ、PKSⅡ或NRPS基因的引物PCR扩增出相应的目的条带,表明这些放线菌可能含有相应的PKSⅠ、PKSⅡ或NRPS基因。结论湖北利川喀斯特洞穴中蕴藏着丰富的放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力,值得进一步研究。

水通道蛋白5在免疫调控中的研究进展

水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)作为一个多次跨膜通道蛋白,在多个器官中表达,在水分子的跨膜转运中发挥着重要的生理和病理作用。已有的研究提示,AQP5在感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的免疫应答中可能发挥重要作用。本文就AQP5在炎症免疫、感染免疫和肿瘤免疫的相关研究进展进行综述,以期指导临床诊疗。

儿童耐药结核病诊治研究进展

耐药结核病是严重危害儿童健康的重要疾病之一。儿童结核病患者临床症状不典型、细菌载量低、病原学难以确诊,在诊断和治疗上均存在较大困难,对结核病防控构成了严重的威胁。作者对儿童耐药结核病诊断与治疗最新进展进行综述。

结核分枝杆菌Rv1973重组载体构建及其异源性表达

目的Rv1973是人型结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mt)RD区(region of differences)基因表达的一个外膜蛋白(OMP),其功能尚不明确。分枝杆菌和革兰氏阴性菌的外膜结构与其毒力、耐药性等常密切相关。本研究拟构建Mt-Rv1973及其耻垢分枝杆菌(M.smegmatis,Ms)同源基因MSMEG_0353(Ms-Rv1973)重组表达载体并建立其异源性表达的菌株,用于目的蛋白的诱导表达及其生物学功能的相关研究。方法将密码子优化的Mt-Rv1973与Ms-Rv1973的编码序列重组入pMAL-c6T载体并转化入低内毒素的ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌中获得异源性Mt-Rv1973与Ms-Rv1973融合表达菌株,并通过对目的蛋白进行诱导表达、SDS-PAGE分析和液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定、Ni2+亲和层析和标签切割等获得纯化的目的蛋白。结果成功构建了Mt-Rv1973与Ms-Rv1973表达载体和异源性表达菌株,并经诱导表达和纯化获得了目的蛋白。结论为研究该蛋白的功能奠定了基础。