一种提高RAPD技术扩增效率的有效方法

RAPD技术是由Williams等于1990年首先创立的一种DNA分子标记技术。但是由于低的退火温度和短的引物序列等原因 ,常常使得RAPD技术的分辨率和可重复性低。本文介绍一种通过延长从退火到延伸的ramp时间 ,提高RAPD产物的分辨率和产量 ,由此提高RAPD技术的扩增效率的有效方法。

睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1与Mtsarg1的分子克隆及Mtsarg1基因的表达谱分析

从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (GenBank登录号 :BE64 45 3 8)出发 ,利用生物信息学和实验技术 ,克隆了小鼠睾丸生精细胞凋亡相关新基因Mtsarg1及相应的人类新基因TSARG1,Gen Bank登录号分别为AF3 99971和AY0 3 2 92 5。小鼠Mtsarg1与人类TSARG1基因在氨基酸水平有 5 5 %的一致性和 61%相似性 ,与其他已知蛋白质无明显同源性。小鼠 10种组织的RT -PCR分析结果表明 ,Mtsarg1基因在睾丸中高表达 ,在附睾中呈微弱表达 ,在其他组织不表达 。

14个染色体区带特异性探针池的构建

本文运用人类染色体显微切割和ＰＣＲ技术，成功地构建了１４个染色体区带特异性探针池，并通过染色体原位杂交证明它们均分别来源于相应的被切割的染色体区带。

特发性无精症和严重少精症患者Y染色体微缺失的分子检测

目的 :研究特发性无精症和严重少精症患者与 Y染色体微缺失的关系 ,建立无精症和严重少精症患者 Y染色体微缺失的分子检测方法。方法 :应用 PCR技术对 1 0 0例无精症和严重少精症患者 (其中无精症 72例 ,严重少精症 2 8例 )进行 Y染色体 AZFa、AZFb、AZFc/DAZ、SRY的微缺失检测。结果 :1 2例患者 (1 2 % )有 AZFc的微缺失 (其中无精症 8例 ,占 1 1 .1 % ;严重少精症 4例 ,占 1 4.3% ) ,且其中 1例无精症患者为 AZFb、AZFc双重缺失 ;所有病例未发现有 AZFa的缺失 ;SRY基因 PCR扩增均为阳性。6 0例已有生育的正常男性均无 AZFa、AZFb、AZFc、SRY微缺失。结论 :Y染色体微缺失 ,特别是 AZFc/DAZ的缺失是引起无精和严重少精、造成男性不育的重要原因之一 ,在进行遗传咨询和行卵细胞质内注入精子术 (ICSI)时 ,有必要对不明原因的不育男性患者进行

应用RAPD技术对蜘蛛系统演化的初步研究

利用随机扩增多态ＤＮＡ 技术检测了３ 类不同蜘蛛的系统发生关系．用１２ 个随机引物对各实验蜘蛛的基因组ＤＮＡ 进行扩增，选择其中扩增谱带清晰的８ 个引物进行分析并计算不同类蜘蛛间的遗传距离．结果表明：所有８ 个引物获得的ＲＡＰＤ谱带均表现为不同程度的多态性；地穴型蜘蛛与结网型蜘蛛间的遗传距离及结网型与游猎型之间的遗传距离，均比地穴型与游猎型之间的遗传距离近，体现了蜘蛛由地穴→结网→游猎的系统演化进程．这一结论与根据古生物学、胚胎学、形态学及生态学等得出的结论一致，从而进一步从ＤＮＡ 分子水平上为蜘蛛系统演化提供了新的证据．

一例罕见的复杂易位携带者的染色体绘画研究

本文报道了一例罕见的复杂易位男性携带者，结婚８年，其妻连续７次流产、死胎和出生早夭的畸型儿。用染色体显微切割、ＰＣＲ技术构建的人类７号和８号染色体特异性探针地对其进行了染色体绘画研究，分析确定其核型为：４６，ＸＹ，－７，－８，－９，＋ｄｅｒ（７）、ｔ（７；９）（ｑ２２００；ｐ２４），＋ｄｅｒ（８）ｉｎｖｉｎｓ（８；７）（ｑ２１００；ｑ３１．２ｑ２２００），＋ｄｅｒ（９）ｔ（９；７）（ｐ２４；ｑ３１．２）．ｉｓｈｄｅｒ（７）ｔ（７；９）（ｗｃｐ７＋），ｄｅｒ（８）ｉｎｖｉｎｓ（８；７）（ｗｃｐ７＋，ｗｃｐ８＋），ｄｅｒ（９）ｔ（９；７）（ｗｃｐ７＋）。染色体绘画技术为研究染色体异常提供了一种有效的分子细胞遗传学技术，本文并对携带者复杂易位的发生机理进行了讨论。

小鼠生精相关基因SRG4的cDNA克隆及在小鼠各发育阶段的表达

从大鼠精子尾部基因Spag4出发 ,在dbEST数据库中同源搜寻与大鼠Spag4基因编码氨基酸同源性较高的表达序列标签 (ExpressedSequenceTag ,EST) ,找到两个在小鼠精母细胞中表达的ESTs ,BG10 1130和BG10 0 990。通过电子杂交得到 115 5bp的片段 ,包含了小鼠假想基因AK0 0 6 2 2 5的全部序列 ,定位于 2H1 H2 ,其开放阅读框为 87～ 1133bp ,并被RT PCR所证实 ,将该基因命名为小鼠生精相关基因 4 (SpermatogenesisRelatedGene 4 ,SRG4 ,GenBank登录号为AY30 70 77)。SRG4基因推定编码 348个氨基酸 ,有一个coiled coil区 ,可能是一个跨膜蛋白。该基因与人类同源基因TSARG4同源性为 74 % (2 77/374 ) ,与大鼠Spag4同源性为 4 5 % (10 3/22 4 )。多组织RT PCR和Northernblot结果显示 ,SRG4在睾丸中特异性表达。RT PCR结果发现 ,小鼠出生后 2周内 ,SRG4表达量极低 ;3周开始时SRG4大量表达 ,到 4～ 5周时表达量最高。该结果提示 。

一种快速高效的人类淋巴母细胞建株方法

遗传多样性及其资源保存的研究,是全球性生物多样性研究的重要组成部分。人类突变细胞的保存,不但是研究人类生物学特征的资源,也是在细胞和分子水平上开展遗传病基础研究的材料。本文应用浓缩的 EBV(Epstein-Barr Virus)液转化外周血 B 淋巴细胞,同时加入环孢霉素(Cyclosporine)抑制 T 淋巴细胞,整个建株过程不需 CO_2孵育箱,建株成功时间在20天左右,且成功率达95—100%,为人类突变细胞的收集、永久保存及其在基因定位、基因克隆等方面的应用创造了条件。

13例肝豆状核变性家系致病基因突变的检测和分析

为了研究Wilson病(wilson disease,WD)基因突变的类型和发生情况,探讨WD疾病的病因、临床特点,通过采用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)方法结合DNA测序方法对13例无亲缘关系的患者及33位亲属进行ATP7B基因所有外显子及5′端非转录区突变检测.33例DNA标本确认11种基因突变,其中包括9种错义突变(p.R778L、p.R919G、p.T1178A、p.T977M、p.K1010Q、p.C490TERM、p.A874P、p.G943S、p.G943D),1种缺失突变(2790delCAT),1种剪切位点改变(c.1708-1G>C(intron 4+1 G>C)).在13个家系中,发现4例R778L突变,2例2790delCAT,均为杂合型突变,涉及17个等位基因,本组检出率为70.8%(17/24).DHPLC-测序法是WD疾病基因突变筛查较为快捷、全面而且敏感的方法.WD基因突变存在热点区分别为3、8、12号外显子.2790delCAT、p.K1010Q、c.1708-1G>C(intron 4+1 G>C)是ATP7B基因新突变类型,p.S406A、p.V456L、p.V1140A、p.R952K是中国人比较常见的多态类型.

中国汉族群体vWF基因40内含子VNTR

本文将Ａｍｐ－ＦＬＰ与ＲＦＬＰ结合起来，检测ｖＷＦ基因４０内含子ＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｓ）。调查长沙地区１５６名无亲缘关系汉族人，发现ｖＷＦ基因４０内含子ＶＮＴＲ基因１３６个。基因型１５３个，全部为杂合子，分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。此ＶＮＴＲ的杂合率为０．９８８４，ＰＩＣ为０．９８８３，是现已检出Ａｍｐ－ＦＬＰ中多态性最高的遗传标记。家系分析显示ＶＮＴＲ无遗传重组，依照常染色体共显性遗传。用高分辨聚丙烯酰胺凝胶电解质梯度电泳，分离扩增的杂合子个体ｖＷＦ基因４０内含子ＶＮＴＲ两条ＤＮＡ，回收后再次扩增，ＡｌｕＩ消化，电泳直接检测了ＶＮＴＲ基因型，解决了Ａｍｐ－ＦＬＰ－ＲＦＬＰ分析中无法判定基因型的难题。首次将ＳＳＣＰ应用于微卫星ＤＮＡ亚型的检测，检出一个ＶＮＴＲ亚型。

精子发生相关基因的分子遗传学研究进展

特发性无精、严重少精症的分子遗传学研究越来越广泛深入。近年来,控制精子发生的相关基因,主要包括位于Y染色体AZFa区的USP9Y和DBY、AZFb区的RBM基因、AZFc区的DAZ基因,和位于常染色体的DAZLA基因等在分子遗传学研究方面均取得了可喜的进展。对这方面的研究进展及其展望进行了综述。

706例供精者染色体分析

目的 研究染色体分析在精子库供精者 (Donor)筛查中的作用 ,防止供精人工受精后出生遗传病患儿。 方法 应用染色体G显带 ,对 70 6例Donor的染色体进行分析。 结果 70 6例Donor染色体中 ,染色体异常 12例 [inv(9) ] ,共有多态 76例 (Yqh + 73例 ,16qh + 3例 )。 结论 供精者个体存在染色体异常且以 9号染色体倒位为主 ,供精者个体存在较高频率的大Y ,其临床意义有待于积累更多资料。

染色体末端微小结构异常的分子细胞遗传检测

为检出易于被忽略的染色体末端微小结构异常 ,为生育提供指导 ,选取特异性 7号全染色体探针、X染色体长臂探针和 7q亚端粒 (7q36→qter)探针 ,用荧光原位杂交 (fluorescenceinsituhybridization ,FISH)结合G显带技术分析 2个病例 ,其中病例 1有不良妊娠史并疑有末端微小易位 ,病例 2在G显带水平已发现为X和 7号染色体易位的卵巢早衰患者。结果表明 ,FISH确诊病例 1为染色体末端的隐匿易位 ,病例 2的易位断点得到精确定位 ,它不在 7q36而在 7q末端。应用特异性染色体探针及亚端粒探针 ,通过FISH技术可以确诊染色体末端区域的微小结构异常 ,在临床遗传学中有广泛的应用 。

人类7号染色体专特性探针池的构建及应用

本文用显微切割,PCR技术和染色体绘画技术,构建了人类第七号染色体特异性探针池,并完成了一个7号染色体结构异常患者的家系分析。

杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断

目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精-胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法。再对在该中心进行超排和体外授精-胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果选择健康的优质的胚胎移植入子宫。结果携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28)。分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠。病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植。结论该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD患儿出生的目的。

FISH技术的临床应用研究

荧光原位杂交 (FISH)是染色体显带技术的补充和发展 .以人类精子、早期胚胎等间期核及中期染色体为材料 ,用FISH技术检测染色体的数目异常和微小的结构异常 .结果快速准确 ,显示它较之传统的细胞遗传学技术诊断具有明显的优越性 ,在临床应用中有广泛的前景 .

小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因SRG2的分子克隆及其在隐睾中的表达特征

从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (BE6 4 4 5 4 2 )入手 ,利用网上生物信息学克隆了SRG2基因全长 ,GenBank登录号为AF395 0 83。从小鼠睾丸cDNA文库中分离出该基因完整阅读框cDNA ,SRG2基因的cDNA全长为 10 88bp ,为编码 2 95个氨基酸、分子量为 335 79kD、等电点为 9 6 4的蛋白质 ,与人类同源基因TSARG2相似性为 78% ,而与其他已知蛋白质无明显同源性。RT PCR结果表明 :该基因只在睾丸中有高表达。应用新型的分子信标检测该基因在不同时期隐睾中的mRNA表达水平 ,发现该基因呈明显上调 。

小儿Prader-Willi综合征1例报告——附临床及遗传学诊断

利用染色体高分辨显带、SNRPN基因甲基化PCR及Southern杂交确诊了 1例Prader-Willi综合征 (PWS)患者。该患儿具有PWS典型症状并伴有糖尿病。通过报道这一病例及复习文献资料 ,分析PWS的临床特征 ,简要讨论其发病机制及遗传学诊断方法。

应用端粒区带涂染探针检测染色体微小结构重排

为了评估染色体端粒区带涂染探针在遗传诊断的应用价值,应用显微切割获得的11q、12q和22q等3个染色体端粒区涂染探针(11q23.3→qter,12q24.1→qter,22q13.1→qter),通过荧光原位杂交技术分析两个疑有染色体末端微小易位的习惯性流产病例。结果显示,病例1和病例2分别为t(11;12)和t(11;22)长臂末端间的微小易位,结合G显带技术确定断裂位点位于11q23.3、12q24.1、22q13.1。结果表明特异性染色体端粒区带探针可以确诊染色体末端区域的微小结构异常,可作为一种检出隐匿易位携带者并确定断裂位点的方法。

367例不育男性的染色体分析

为了研究染色体因素对男性不育症的影响 ,为辅助生殖技术提供指导 ,我们应用染色体 G显带、C显带技术 ,分析了 3 67例男性不育症患者的染色体。结果发现 79例染色体异常 ,异常率为 2 1 .5 %。染色体异常是男性不育症的重要原因 。