花生种子活力与贮藏蛋白质降解的关系

花生种子吸胀2d后,子叶中肽链内切酶活性上升,贮藏蛋白质开始降解。高活力种子肽链内切酶活性在吸胀2d后迅速上升,至4d时达到高峰,而中等活力种子的肽链内切酶活性上升速度缓慢。高活力种子萌发时贮藏蛋白质降解速度高于中等活力种子。中等活力种子经PEG和PUT处理可提高种子活力,也促进了种子贮藏蛋白质降解能力的提高。

二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建

为构建一种食品残留检测用二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体(sdsFvCAP)。以抗氯霉素抗体可变区基因为模板,通过引物突变PCR在轻链和重链的可变区分别引入一个半胱氨酸定点突变,以重叠延伸PCR组装成sdsFvCAP。在大肠杆菌系统强启动子T7驱动下,sdsFvCAP基因不能单独表达,而通过同义突变降低其5'端序列GC含量则可实现高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在,经β-环糊精分子伴侣系统复性可获得亲和力与母本抗体相似的sdsFvCAP。所构建的sdsFvCAP具有取代单克隆抗体用于氯霉素残留检测的潜力。

甲醇酵母表达系统高拷贝数整合型表达载体的构建

以甲醇酵母（Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）表达系统的ＹＩｐ型表达载体ｐＪＦ５１为基础，通过引入宿主来源的一个ｒＤＮＡ随机顺序和由ＳＶ４０早期启动子控制的Ｇ４１８抗性基因（ｎｅｏ）及对野生型标记基因Ｈｐｌｅｕ２启动子大部分上游序列的缺失，构建了一个高拷贝整合型表达载体ｐＭＩＲＨ。有关转化、筛选和拷贝分析等试验结果表明，由ｐＭＩＲＨ可产生含高拷贝数载体的转化子，并可通过由ｌｅｕ２＋筛选和Ｇ４１８抗性筛选所组成的二级筛选方法富集这些含高拷贝数载体的转化子。有关完整ＤＮＡ和消化ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析结果进一步表明，上述高拷贝数的载体以串联重复排列的方式整合于宿主基因组。

甲醇酵母表达系统pMIRH型载体研究

在为甲醇酵母（Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）表达系统成功构建高拷贝整合型表达载体ｐＭＩＲＨ－１的基础上，构建了更能满足外源基因表达需要的、大小仅为７３００ｂｐ的高拷贝整合型表达载体ｐＭＩＲＨ－２．有关转化、筛选及传代稳定性试验结果表明，ｐＭＩＲＨ－２亦具有与ｐＭＩＲＨ－１相似的转化和筛选特性及高拷贝整合能力，且二者均可在非选择条件下稳定传代６０代以上．

β-半乳糖苷酶供体片段定点突变、表达、纯化与活性分析

目的构建含ε-NH2标记位点的克隆酶供体免疫分析（CEDIA）系统供体片段。方法从大肠杆菌基因组克隆β-半乳糖苷酶（β-gal）的α片段基因,通过定点突变在原精氨酸位点处引入赖氨酸突变,与硫氧环蛋白（Trx）融合表达后与Δα片段进行酶学互补活性分析。结果克隆的α片段为β-galN端1-56多肽片段,定点突变得R14K、R53K和R14K/R53K等3种突变体。融合表达产物经亲和层析后纯度达到90%以上,且4种α片段的纯度基本一致。各纯化产物显示了不同的酶学互补活性,其中R53K突变体的活性远高于R14K和R14K/R53K的,且与野生型α片段的基本一致。结论α片段R53K突变体具有作为CEDIA系统含内部标记位点供体的潜力。

靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR^(262-328)的构建及免疫原性分析

目的构建靶向EGFR二聚化界面的肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328并分析其免疫原性。方法采用重叠延伸PCR来扩增P64k-EGFR262-328融合基因,克隆至pMD18-T,经测序鉴定后与pET-21b构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。目的蛋白经IPTG诱导表达后用Source Q阴离子层析和Ni-NTA亲和层析纯化,纯化的融合蛋白乳化后免疫BALB/c小鼠分析其免疫原性。结果获得了2 031 bp的融合基因,IPTG诱导后获得了相对分子质量(Mr)70 000大小的目的蛋白,经两步柱层析后,融合蛋白达到了95%以上的纯度,并在小鼠体内产生了高达1∶16 000以上的抗体滴度。结论成功制备了肿瘤多肽疫苗P64k-EGFR262-328。

重组人表皮生长因子体外生物活性的测定

目的：探讨适合本实验室用M7TT或MTS／PMS检测重组人表皮生长因子（rhEGF）的一系列实验参数，包括血清浓度、细胞浓度、细胞培养时间和酶解程度。方法：利用MTF或MTS／PMS结合酶标仪分别在多种实验条件下对重组人表皮细胞因子进行了生物活性检测，同时绘制细胞生长曲线，对细胞生长状态拍照观察。结果：血清浓度为0．5％，细胞浓度为5000－7000个／孔，细胞铺满率为70％－80％及酶解适当时，用MTT和MTS／PMS都测得ED50约为0．6ng／ml，与标准品相符。结论：改进后的实验条件下，MTT和MTS／RMS都可用于rhEGF的生物活性检测。

直接与产业对接的生物科学专业应用型人才培养探索

文章探讨了药学院校生物科学专业人才培养模式的教学改革。通过在人才培养、师资队伍建设等各个方面与企业进行合作,建立了基于"3+1+专业拓展"培养模式的、面向广东区域生物医药行业、并直接与生物医药产业和技术服务产业对接的"厚基础、强技能、善应用"的生物科学应用型人才培养模式。

溶菌酶分离纯化综合性实验的开设

介绍溶菌酶分离纯化综合性实验开设的背景、课程改革的思路以及实施过程。通过开设综合性实验,对生物工程下游技术课程中分散的实验教学内容进行改革,极大地激发了学生的学习兴趣,对其他医药院校改革生物工程下游技术实验教学有一定的参考意义。

任务驱动教学模式在《生物工程下游技术》中的应用

《生物工程下游技术》是一门内容较多、发展较快、实践性强的课程。采用任务驱动教学模式,充分调动了学生的学习积极性,增强了其创新能力和实践能力,有利于培养生物医药应用型创新人才。

基于“任务式”教学方法提高学生的应用创新能力

任务教学法以任务为载体,强调在实践中应用、内化知识,可提高学生的应用创新能力。本文论述了在实践性较强的生物工程下游技术中运用任务教学法开展教学的体会,以为同行提供参考。

EGFR二聚化B细胞表位抗原肽基因克隆、表达与纯化

目的利用基因工程手段建立表皮生长因子受体(EGFR)二聚化B细胞表位抗原肽MVF-ER的高效制备方法。方法采用重叠延伸PCR扩增MVF-ER后克隆于表达载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,产物采用肠激酶酶切和镍离子螯合亲和层析法纯化。结果通过10对引物5步重叠延伸得到273 bp的扩增产物,目的基因与硫氧环蛋白(Trx)融合后可高效表达,经酶切和层析后得到纯度为95%的抗原肽。结论成功建立抗原肽"MVF-ER"的高效制备方法,为进一步研究EGFR过表达恶性肿瘤的治疗性疫苗打下了坚实基础。

基于硝酸消解法的蛋白琥珀酸铁口服溶液含量测定

目的:优化现有蛋白琥珀酸铁口服溶液含量检测方法。方法:采用硝酸消解法替代现有盐酸消解法预处理样品,以完全水解多肽链并释放结合铁,采用2,2'-联吡啶络合物比色法测定铁含量,以琥珀酸酰化酪蛋白为空白载体考察回收率,以市售样品考察重复性。结果:硝酸消解法和盐酸消解法的回收率分别为99.62%和90.36%,市售样品含量测定RSD分别为0.44%和3.50%。结论:硝酸消解法替代盐酸消解法可显著改善蛋白琥珀酸铁口服溶液含量检测方法的可靠性。

腹水型抗EGFR单克隆抗体纯化方法的研究

目的:研究腹水型抗EGFR单克隆抗体的纯化方法。方法:抗EGFR杂交瘤细胞诱生的腹水,经离心预处理,上清先用PEG6000沉淀,沉淀物溶解再用Protein-A柱亲和纯化,SDS-PAGE鉴定纯化效果。结果:经两步纯化,抗EGFR单抗纯度达到了98%以上,收率达到90%以上。结论:PEG6000沉淀和Protein-A柱亲和层析相结合,是纯化腹水型单抗体的一种高效方法。

花生种子活力与贮藏蛋白和rRNA完整性关系

以花生 (Arachishypogaea) 种子为材料 ,探讨了不同活力花生种子在发育中合成与积累贮藏蛋白的能力 ,在萌发中贮藏蛋白的降解动员能力 ,以及肽键内切酶 (主要的蛋白酶 )活性的变化 ,阐明这些生物活动反映种子活力高低 .同时还研究了在蛋白合成中起重要作用的rRNA ,阐明它的完整性也随种子活力而变化 .

高职学生职业规划培养路径探究——以S院校医美专业为例

随着国家对职业教育的重视,职业教育得到了蓬勃发展,引导学生开展职业规划成为当代大学生培养的重要环节。S院校医美专业学生是新建专业,学生对该专业发展比较迷茫。基于此,文章首先阐述了高职学生开展职业规划培养的意义,分析了S院校医美专业职业规划的现状,最后论述了职业规划的培养实践,旨在通过教育教学、竞赛实习等强化学生对职业的认识和规划,激发学生内在的动力,提升学生的专业能力,强化学生的职业认同,从而提升学生的就业能力。

STEAM教育理念下卫生类高职学院大学生艺术素养探究——以四川护理职业学院为例

目的:探究在STEAM教育理念下卫生类专业学生的艺术素养培养情况。方法:通过随机抽样方法,选取2020级医学影像专业1班和2班学生,1班为实验组,通过STEAM项目培养设计方案进行教学;2班为对照组,采取常规的教学方案进行教学。共6次STEAM项目式活动,测试两组最终教学效果。结果:实验组教学满意度和艺术活动参与度均显著优于常规组(P<0.05);实验组学生平均分虽高于常规组,但成绩差异不显著(P>0.05)。结论:STEAM教育理念指导的艺术素养培养,能有效提高卫生类专业大学生的艺术兴趣,促进艺术特长的发展,提高学生整体艺术素养,值得推广。

基于CDIO的生物制药人才培养模式改革——基于实践教育与创新创业教育融合培养的探索

以构思、设计、实施和运行为核心环节的CDIO模式代表了工程教育的系统性改革。广东药科大学生物制药专业根据专业特色,在实践教育和创新创业教育中开展了系列CDIO模式改革。包括建立基于课程群的“跨课程综合性实验”培养系统集成能力;通过导师制《专业拓展训练》强化创新思维培养,结合创新创业竞赛塑造构思与设计能力;建立基于生物医药企业孵化器的“3+1”协同育人模式,让学生在企业中了解项目实施、运行过程,并通过优化重组核心课程群,建立多环节、多角度的教学质量监控体系,保障CDIO模式改革的顺利实施。

利用大肠杆菌高效制备人端粒酶逆转录酶抗原肽

目的利用大肠杆菌基因工程系统建立人端粒酶逆转录酶h TERT抗原肽的高效制备方法.方法利用抗原表位预测软件SYFPEITHI、BIMAS与Epi Jen确定截短表达策略,通过Prot Scale软件亲水性分析改善表达产物的可溶性.目的基因克隆于表达载体p ET21b,高浓度尿素裂解法溶解包涵体蛋白,稀释复性法复性.结果 3个覆盖全长h TERT的截短片段仅Ser480-Leu665能高效表达,但所形成的包涵体蛋白难溶于8 mol/L尿素.进一步优化所获的Tyr562-Ile665包涵体蛋白则可溶,且经纯化后可有效复性,产物纯度达到95%以上.结论利用大肠杆菌系统成功建立了h TERT抗原肽高效制备方法,为后续肿瘤疫苗的开发应用奠定了基础.

翻转课堂教学模式在“基因工程”课程中的设计与实践

作为药科大学开设的“基因工程”课程,应该侧重于理论与实践的结合。前期已成功开展了基因工程实验教学改革,取得了较好的教学成果,并发表了数篇教学改革论文。为进一步提高“基因工程”理论课程的教学质量和教学效率,基于翻转课堂教学模式开展教学改革,充分利用校内教学资源库和公共网络课程平台的教学资源,在教学方法和教学手段等方面进行设计,探究翻转课堂教学模式相对于传统授课模式在课程教学过程中的优势。根据教学效果评价结果,分析存在的问题并提出完善方案。