Cyr61在单纯及放创复合伤愈合过程中的表达及其临床意义

目的研究Cyr61在单纯和放创复合伤愈合过程中的表达变化,对伤口愈合和组织改建的影响,及其在创伤实验室诊断中的意义。方法制备单纯及放创复合伤动物模型,采用光镜、免疫组化、RT-PCR等方法,动态观察伤口愈合过程中Cyr61mRNA及蛋白表达变化规律。结果5Gy(γ射线)全身照射后对伤口愈合有明显的损害作用。在伤后第3、6、9、15天,Cyr61表达量均随创伤愈合时间延长而增加;但在同一时间点,放创复合伤组Cyr61蛋白和mRNA的表达量均低于单纯创伤组,第21天放创复合伤组表达继续升高,而单纯创伤组表达下降。Cyr61表达时相拖后与辐射所致伤口愈合延迟一致。结论Cyr61在放创复合伤肉芽组织中表达较单纯创伤组明显降低,影响细胞迁移、新生血管形成和组织改建等重要过程,这可能是辐射所致伤口难愈的重要原因之一,认识Cyr61在创伤愈合过程的表达规律有助于创伤的预后判断和治疗。

过表达外源性CCN1对大鼠放创复合伤愈合的影响

目的观察过表达外源性CCN1对大鼠放创复合伤愈合的影响,并初步探讨其机制。方法利用AdCCN1感染CHO细胞及放创复合伤大鼠创面,Western blot法鉴定CCN1在CHO细胞的分泌和创面组织细胞中的表达,感染后7d取创面组织制作石蜡切片,HE染色观察创面愈合情况,免疫组化检测MMP1、TIMP1、bFGF等创伤愈合相关因子表达。结果 CCN1在CHO细胞和创面组织中均高表达,与AdRFP组相比,AdCCN1组创面成纤维细胞增多,微血管密度增高,MMP1、TIMP1、bFGF等创伤愈合相关因子表达均升高。结论 CCN1具有促进放创复合伤愈合的作用,其机制可能与CCN1促进成纤维细胞增殖和迁移,促进血管形成,并且调控创伤修复相关因子表达有关。

辐射对L929细胞生长及CCN1基因表达的影响

目的通过观察辐射对小鼠皮肤成纤维细胞系L929生长及CCN1基因表达的影响,探讨CCN1基因与辐射损伤的关系。方法体外培养L929细胞系,以4Gy60Coγ射线照射为辐射组,并设对照组,MTT法测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测克隆形成能力,流式细胞术测细胞周期,RT-PCR及免疫细胞化学法检测L929细胞中CCN1基因的表达情况。结果辐射组细胞辐照2d增殖抑制明显(P<0.01),克隆形成也明显受到抑制(P<0.05);辐射后24h,细胞出现G2期停滞;辐射后6hL929细胞CCN1的mRNA表达水平明显降低(P<0.01),至24h开始回调(P<0.05);辐照后24～48h,细胞CCN1蛋白的表达水平明显下降(P<0.01)。结论因辐照生长受到抑制的小鼠成纤维细胞L929,其CCN1基因的表达水平下调,提示CCN1基因的表达水平低下是辐射导致细胞生长抑制的因素之一。

外源性CCN1促进辐射损伤L929细胞的生长和迁移

目的观察外源性CCN1是否促进辐射损伤L929细胞生长和迁移,以探讨CCN1在放创复合伤修复中的作用。方法以4Gyγ射线辐射L929细胞作为辐射损伤细胞模型,细胞辐射后分别加入2mlCCN1或RFP条件培养液,37℃,5%CO2培养,作为CCN1组和RFP组;空白条件培养液培养辐射损伤L929细胞作为空白组。各组进行MTT试验、平板克隆形成试验、细胞周期分析和划痕愈合试验。结果与RFP组和空白组相比,CCN1条件培养液处理后,与空白组辐射损伤L929细胞增殖明显增强(P<0.05),与RFP组和空白组相比,克隆形成率明显增高[CCN1组(34.4±3.6)%,RFP组(24.5±2.9)%,空白组(29.5±3.5)%](P<0.05),培养5d时CCN1组S期细胞[(37.3±2.3)%]比RFP组[(25.2±1.9)%]和空白组[(26.9±1.3)%]增多(P<0.01),细胞迁移能力明显增强划痕愈合试验在1～5d的愈合宽度/原宽度值与RFP组和空白组相比差异显著(P<0.01)。结论外源性CCN1可促进辐射损伤的成纤维细胞生长和迁移,提示CCN1是放创复合伤修复的促进因素之一。